概述血脂脂蛋白及载脂蛋白测定.ppt课件

第一节第一节 概概 述述第二节第二节 血脂、脂蛋白血脂、脂蛋白 及载脂及载脂蛋白测定蛋白测定一、血脂和血浆脂蛋白一、血脂和血浆脂蛋白    自学自学二、脂蛋白代谢紊乱二、脂蛋白代谢紊乱     〔一〕高脂蛋白血症〔一〕高脂蛋白血症  血脂含量超越正常称为血脂含量超越正常称为高脂血症，由于血脂均以血浆脂蛋白的方式存高脂血症，由于血脂均以血浆脂蛋白的方式存在，故也称为高脂蛋白血症按发病缘由分为在，故也称为高脂蛋白血症按发病缘由分为两大类         1.按表型分类按表型分类  以以Fredrickson〔〔1967〕分类〕分类法为根底，经法为根底，经WHO〔〔1970〕修订的分类系统，〕修订的分类系统，根据血清根据血清TC、、TG、外观和脂蛋白电泳图谱，将、外观和脂蛋白电泳图谱，将其分为其分为6型第一节第一节 概概 述述     〔〔1〕〕Ⅰ型型高高脂脂蛋蛋白白血血症症 又又称称高高乳乳糜糜微微粒粒血血症症是是一一种种常常染染色色体体隐隐性性遗遗传传病病由由于于LPL缺缺损损或或LPL活活化化因因子子〔〔ApoCⅡ〕〕缺缺损损所所致致。

婴婴儿儿期期即即可可发发生生，，但但稀稀有有其其生生化检查特征：化检查特征：        ①①4℃冷冷置置实实验验，，血血清清上上层层为为奶奶油油状状，，下层清亮下层清亮        ②②血血清清TG↑↑，，达达11mmol/L以以上上，，血血清清TC正常或轻度正常或轻度↑        ③③血清血清LPL活性活性↓        ④④血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，CM↑↑ 〔〔2 2〕〕ⅡaⅡa高高脂脂蛋蛋白白血血症症 又又称称高高β-β-脂脂蛋蛋白白血血症症或或高高胆胆固固醇醇血血症症属属常常染染色色体体显显性性遗遗传传，，有有明明显显的的家家族族史史病病因因LPLLPL受受体体缺缺损损，，杂杂合合子子型型发发生生频频率率为为1/5001/500，，纯纯合合子子型型发发生生频率为频率为1/1000001/100000其生化检查特征：其生化检查特征： ①4℃①4℃冷冷置置实实验验，，血血清清外外观观清清亮亮透透明 ②②血血清清TC↑↑TC↑↑，，＞＞15.6mmol/L15.6mmol/L尤尤其其是是LDL-C↑↑LDL-C↑↑，，TGTG正常。

正常 ③ ③血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，β-LP↑↑β-LP↑↑ 临临床床表表现现，，中中青青年年常常伴伴有有冠冠状状动动脉脉硬化，结局为心肌堵塞硬化，结局为心肌堵塞       〔〔3〕〕Ⅱb型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症           在在 Ⅱa型型 根根 底底 上上 伴伴 有有 VLDL〔〔 高高LDL+VLDL血血症症〕〕，，病病因因不不明明其其生生化检查特征：化检查特征：         ①①4℃冷冷置置实实验验，，血血清清外外观观清清亮亮或或微混         ②②血清血清TC↑，，TG↑         ③③血血 清清 脂脂 蛋蛋 白白 电电 泳泳 ，， β-LP↑，，preβ-LP↑        〔〔4〕〕Ⅲ型型高高脂脂蛋蛋白白血血症症  又又称称宽宽β-脂脂蛋蛋白白血血症症属属常常染染色色体体显显性性遗遗传传病病，，发发病病率率1/10000，，病病因因，，ApoE异异常常，，与与相相应应受受体结合率体结合率↓其生化检查特征：其生化检查特征：          ①①4℃冷冷置置实实验验，，血血清清外外观观混混浊浊，，后后构成蜡样黄色薄膜。

构成蜡样黄色薄膜          ②②血清血清TC↑，，TG↑           ③③血血清清脂脂蛋蛋白白电电泳泳，，β-LP↑，，preβ-LP↑，，IDL↑交融构成宽交融构成宽β区带       〔〔5〕〕Ⅳ型型高高脂脂蛋蛋白白血血症症  又又称称高高前前β-脂脂蛋蛋白白血血症症或或家家族族性性高高甘甘油油三三脂脂血血症症属属常常染染色色体体显显性性遗遗传传病病，，较较常常见见，，我我国国原原发发性性高高脂脂蛋蛋白白血血症症中中一一半半属属于于此此型型病病因因，，ApoA2异异常常其其生生化化检检查查特征：特征：          ①①4℃冷置实验，血清外观混浊冷置实验，血清外观混浊          ②②血清血清TG↑↑，，TC正常或稍正常或稍↑          ③③血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，preβ-LP↑        临临床床表表现现，，多多见见于于中中年年人人易易发发生生冠心病      〔〔6〕〕Ⅴ型型高高脂脂蛋蛋白白血血症症  属属常常染染色色体体显显性性遗遗传传病病，，病病因因不不详详，，能能够够由由几几种种遗遗传传缺缺陷陷所所致致，，较较稀稀有有生生化化检检查查特征：特征：         ①①4℃冷冷置置实实验验，，血血清清上上层层为为奶奶油状，下层混浊。

油状，下层混浊        ②②血清血清TG↑↑，，TC↑        ③③血血 清清 脂脂 蛋蛋 白白 电电 泳泳 ，， CM↑↑，，preβ-LP↑          2.按按能能否否继继发发于于全全身身性性疾疾病病分分类类  分分为为原原发发性性和和继继发发性性高高脂脂血血症症常常继继发发于于糖糖尿尿病病、、肝肝病病、、肾肾病病、、肥肥胖胖以以及及过量饮酒，成人发病率为过量饮酒，成人发病率为3%～～5%         3.高高脂脂血血症症的的基基因因分分型型法法  一一部部分分高高脂脂血血症症患患者者存存在在单单一一或或多多个个遗遗传传基基因因的的缺缺陷陷，，具具有有明明显显的的家家族族聚聚集集性性，，有明显的遗传倾向有明显的遗传倾向       〔二〕低脂蛋白血症〔二〕低脂蛋白血症  主要有四种类型主要有四种类型        1.低低LDL血血症症  是是一一种种常常染染色色体体显显性性遗遗传传病病，，病病因因ApoB100低低下下，，血血浆浆LDL减减少少，，TC↓        2.无无LDL血血症症  稀稀有有的的常常染染色色体体隐隐性性遗遗传传病病，，病病因因ApoB100、、B48缺缺损损，，血血浆浆中中无无LDL，，TC↓↓。

       3.低低HDL血血症症  病病因因不不详详，，血血清清TG↑，，动动脉粥样硬化、冠心病的发病率高脉粥样硬化、冠心病的发病率高       4.无无HDL血血症症〔〔Tangier病病〕〕稀稀有有的的常常染染色色体体隐隐性性遗遗传传病病，，ApoAⅠ、、AⅡ缺缺损损，，血血浆浆TC↓，，HDL-C↓         血血脂脂测测定定方方法法很很多多，，目目前前临临床床实实验验室室根根本本检检验验工工程程有有：：血血清清外外观观分分析析，，TC，，TG，，HDL-C，，LDL-C测测定定进进一一步步可可做做HDL亚亚组组分分，，IDL，，Apo〔〔如如ApoAⅠ、、ApoB100〕〕，，Lp〔〔a〕〕及及脂脂蛋蛋白白电电泳泳，，LPL，，LCAT测测定定，，为为保保证证分分析析结结果果的的可可靠靠性性，，标标本本的的采采集集应应在在餐餐后后12h以上第二节第二节  血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定一、血清外观分析〔血清冷置实验〕一、血清外观分析〔血清冷置实验〕 混浊混浊〔〔TG增高〕增高〕下层浊〔下层浊〔VLDL增高〕增高〕Ⅴ型型下层清〔下层清〔VLDL正常〕正常〕Ⅰ型型均匀混浊均匀混浊〔〔VLDL↑〕〕TC正常正常  Ⅳ型型上层奶油样上层奶油样〔〔CM↑〕〕TC增高增高  Ⅱa型型TC正常正常  正常人正常人清亮清亮〔〔TG正常〕正常〕TC↑  Ⅱb，，Ⅲ型型空空腹腹血血清清 测测TC TC 4℃过夜过夜 测测TCTC二、血清总胆固醇测定二、血清总胆固醇测定        胆固醇是人体重要的脂类成分，胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重要的生理功能，如合成类固醇具有重要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素激素，维生素D3胆汁酸，并构成细胞胆汁酸，并构成细胞膜成分，膜成分，TC包括包括FC〔〔1/3〕和〕和CE〔〔2/3〕，胆固醇与动脉粥样硬化有亲〕，胆固醇与动脉粥样硬化有亲密关系，故胆固醇测定是最常用的实密关系，故胆固醇测定是最常用的实验室检测工程之一。

验室检测工程之一        TC测定方法很多，约测定方法很多，约200多种，多种，分为化学测定法、酶法、气相色谱法、分为化学测定法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法〔高效液相色谱法、核素稀释质谱法〔决议性方法〕决议性方法〕      〔一〕化学测定法〔一〕化学测定法  主要有两类主要有两类         1.Liberman-Burchard反反响响  简简称称L-B反反响响，，胆胆固固醇醇经经冰冰醋醋酸酸，，浓浓硫硫酸酸脱脱水水生生成成3.5-胆胆烷烷二二烯烯阳阳离离子子，，然然后后被被醋醋酐酐，，浓浓硫硫酸酸氧氧化化生生成成绿绿色色的的胆胆烷烷六六烯烯磺磺酸酸呈呈色色稳稳定性差         2.Zak反反响响  胆胆固固醇醇经经冰冰醋醋酸酸，，浓浓硫硫酸酸脱脱水水生生成成3.5-胆胆烷烷二二烯烯阳阳离离子子，，然然后后在在Fe3+存存在在下下氧氧化化生生成成紫紫红红色色胆胆烷烷四四烯烯阳阳离离子子，，灵灵敏敏度度较较L-B反反响响高高7倍倍，，且且呈呈色色稳稳定定性性好好，，但但试试剂剂腐腐蚀蚀性性极极大大，，不不能能用用于于自自动动化分析       〔二〕酶法〔二〕酶法胆固醇酯胆固醇酯                         胆固醇胆固醇 ＋＋ 脂肪酸脂肪酸胆胆固固醇醇 ＋＋ O2                                      胆胆烷烷-4-烯烯-3酮酮 ＋＋H2O2H2O2 ＋＋ 4AAP ＋＋酚酚                        红红色色亚亚胺胺醌醌 ＋＋ H2OCEHChODPOD        试试剂剂中中除除上上述述三三种种酶酶外外，，还还有有胆胆酸酸钠钠和和外外表表活活性性剂剂及及稳稳定定剂剂，，胆胆酸酸钠钠用用于于激激活活CEH，，外外表表活活性性剂剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。

促进胆固醇从脂蛋白中释放         酶酶法法操操作作简简便便，，快快速速，，试试剂剂无无腐腐蚀蚀性性，，适适宜宜于于自自动动化化分分析析，，但但也也存存在在有有一一些些缺缺乏乏，，CEH对对胆胆固固醇醇水水解解不不完完全全，，外外表表活活性性剂剂影影响响CEH活活性性，，黄黄疸疸血血清中过高的胆红素可复原清中过高的胆红素可复原H2O2使结果偏低使结果偏低       【参考范围】【参考范围】3.10～～5.70mmol/L       【【临临床床意意义义】】血血清清TC含含量量受受年年龄龄、、性性别别、、饮饮食食和和运运动动等等要要素素的的影影响响①①20岁岁以以上上随随年年龄龄↑而而↑，，70岁岁以以后后那那么么有有下下降降趋趋势势②②20～～40岁岁阶阶段段男男性性高高于于女女性性，，但但女女性性绝绝经经后后那那么么高高于于男男性性③③城城市市人人群群高高于于乡乡村村人人群群，，与与饮饮食食和和运运动动有有关关④④脑脑力力劳劳动动者者高于膂力劳动者高于膂力劳动者         病病理理性性高高胆胆固固醇醇血血症症  原原发发性性高高胆胆固固醇醇血血症症，，糖糖尿尿病病、、胆胆道道阻阻塞塞、、肾肾病病综综合合症症、、甲状腺功能减退。

甲状腺功能减退        病病理理性性低低胆胆固固醇醇血血症症   严严重重贫贫血血、、甲甲亢、营养不良亢、营养不良 三、血清甘油三脂测定三、血清甘油三脂测定        TG是有一分子甘油与三分子脂肪是有一分子甘油与三分子脂肪酸组成的化合物，主要存在于酸组成的化合物，主要存在于VLDL和和CM中，临床化学中往往以测定甘中，临床化学中往往以测定甘油代表油代表TG的含量TG的测定方法很的测定方法很多，如气相色谱法、高效液相色谱法、多，如气相色谱法、高效液相色谱法、红外分光光度法但上述方法需特殊红外分光光度法但上述方法需特殊的仪器设备和技术，故普通只用于研的仪器设备和技术，故普通只用于研讨任务中临床实验室主要用化学法讨任务中临床实验室主要用化学法和酶法         〔一〕化学法〔一〕化学法  根本步骤可归纳为四步根本步骤可归纳为四步           1.提提取取：：甘甘油油三三脂脂的的提提取取  采采用用适适宜宜的的溶溶剂剂，，使使脂脂蛋蛋白白变变性性提提取取TG，，同同时时去去除除干干扰扰物物质质(磷磷脂脂、、游游离离甘甘油油、、葡葡萄萄糖糖等等),常常用用方法有：方法有：       〔〔1〕〕异异丙丙醇醇抽抽提提，，沸沸石石合合剂剂〔〔沸沸石石、、高岭土〕吸附。

高岭土〕吸附       〔〔2〕异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂〕异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂       〔〔3〕〕正正壬壬烷烷、、异异丙丙醇醇、、稀稀硫硫酸酸分分溶溶抽抽提提，，免免去去吸吸附附磷磷脂脂的的操操作作，，后后用用价价廉廉的的正正庚庚烷替代正壬烷运用较广烷替代正壬烷运用较广         2.皂皂化化：：甘甘油油三三脂脂的的水水解解  普普通通都都采采用用KOH乙乙醇醇或或KOH异异丙丙醇醇溶溶液液，，60℃，，5～～15min可使可使TG完全水解完全水解         3.氧氧化化：：甘甘油油的的氧氧化化  最最常常用用的的氧氧化化剂剂是是HIO4，，甘甘油油在在酸酸性性条条件件下下被被氧氧化化成成甲甲醛醛、、甲甲酸酸反反响响受受α-磷磷酸酸甘甘油油、、葡葡萄萄糖糖、、丝丝氨氨酸酸的的干干扰扰，，故故抽抽提时应尽量除去此类物质的干扰提时应尽量除去此类物质的干扰        4.显显色色：：显显色色测测定定甲甲醛醛常常用用方方法有：法有：      〔〔1〕〕甲甲醛醛与与变变色色酸酸〔〔4.5-二二羟羟-2.7-萘萘二二磺磺酸酸〕〕在在硫硫酸酸溶溶液液中中加加热热生生成紫红色化合物。

〔成紫红色化合物〔570nm〕〕      〔〔2〕〕甲甲醛醛与与乙乙酰酰丙丙酮酮在在氨氨的的存存在在下下缩缩合合成成黄黄色色的的3.5-二二乙乙酰酰-1.4-二二氢氢-2.6-二甲基吡啶〔二甲基吡啶〔420nm〕〕    〔二〕酶法〔二〕酶法   常用的有：常用的有：1.磷磷酸酸甘甘油油氧氧化化酶酶法法〔〔GK-GPOD-POD法〕法〕  TG ＋＋H2O                     甘油甘油 ＋＋ FA 甘甘油油 ＋＋ ATP                     3-磷磷酸酸甘甘油油 ＋＋ ADP 3-磷磷酸酸甘甘油油 ＋＋ O2                     磷磷酸酸二二羟羟丙酮丙酮 ＋＋ H2O2 H2O2 ＋＋ 4-AAP ＋＋ 酚酚                    红红色色亚亚胺醌胺醌 ＋＋ H2O           试试剂剂较较稳稳定定，，灵灵敏敏度度高高，，线线性性范范围围宽宽，，胆胆红红素素、、维维生生素素C可可耗耗费费H2O2使使结结果偏低LPLGK GPOD POD 2.乳酸脱氢酶法〔乳酸脱氢酶法〔GK-PK-LDH 法〕法〕TG ＋＋ H2O                 甘油甘油 ＋＋ FA甘甘油油 ＋＋ ATP                   3-磷磷酸酸甘甘油油 ＋＋ ADPADP ＋＋ 磷磷酸酸烯烯醇醇式式丙丙酮酮酸酸           ATP ＋＋ 丙酮酸丙酮酸 丙丙酮酮酸酸 ＋＋ NADH＋＋H+                 乳乳酸酸 ＋＋ NAD+ 3.甘油氧化酶法甘油氧化酶法第一步消除血清中原有的甘油：第一步消除血清中原有的甘油： LPLGPOD PKLDH 游离甘油游离甘油 ＋＋ O2                    甘油醛甘油醛 ＋＋ H2O2GlyODH2O2 ＋＋ EMAE                    无色物质无色物质        EMAE称称N-乙乙基基-N-〔〔3-甲甲基基〕〕-N-乙乙酰酰乙乙二二胺胺。

是是一一种种复复原原剂剂，，灵灵敏敏度度比比酚酚高高第第二二步步测测定定甘甘油油三脂水解释放的甘油：三脂水解释放的甘油：TG ＋＋H2O                             甘油甘油 ＋＋ FA 甘油甘油 ＋＋ O2                            甘油醛甘油醛 ＋＋ H2O2  H2O2 ＋＋ 4-AAP ＋＋ EMAE                    有色化合物有色化合物 POD GlyODLPL POD        【参考范围】【参考范围】0.56～～1.70mmol/L       【【临临床床意意义义】】血血清清TG普普通通随随年年龄龄增长而升高，体重超标者往往偏高增长而升高，体重超标者往往偏高        1.病病理理性性增增高高  原原发发性性高高脂脂蛋蛋白白血血症症、、肥肥胖胖症症、、糖糖尿尿病病、、肾肾病病综综合合症症、、脂脂肪肝、妊娠后期肪肝、妊娠后期        2.病病理理性性降降低低    甲甲亢亢、、肾肾上上腺腺皮皮质质功能减退、严重肝功能损伤功能减退、严重肝功能损伤 四、血清〔浆〕脂蛋白测定四、血清〔浆〕脂蛋白测定      〔一〕血清脂蛋白电泳〔一〕血清脂蛋白电泳         临床实验室常用的支持介质有醋酸纤临床实验室常用的支持介质有醋酸纤维薄膜和琼脂糖凝胶。

维薄膜和琼脂糖凝胶         1. 血清脂蛋白醋酸纤维薄膜电泳血清脂蛋白醋酸纤维薄膜电泳  以醋以醋酸纤维薄膜为支持介质，血清脂蛋白经电酸纤维薄膜为支持介质，血清脂蛋白经电泳分别，然后用臭氧氧化，使脂蛋白中的泳分别，然后用臭氧氧化，使脂蛋白中的不饱和脂肪酸的双键断裂生成醛，再用亚不饱和脂肪酸的双键断裂生成醛，再用亚硫酸品红染色，即生成紫红色区带硫酸品红染色，即生成紫红色区带          2. 血血清清脂脂蛋蛋白白预预染染琼琼脂脂糖糖电电泳泳  血血清清脂脂蛋蛋白白经经饱饱和和苏苏丹丹黑黑B预预染染后后，，以以琼琼脂脂糖糖凝凝胶胶为为支支持持介介质质，，进进展展电电泳泳分分别别，，即即可可得得到到明明晰晰的兰色区带的兰色区带         凝凝胶胶浓浓度度普普通通为为0.5%，，超超越越1%，，β-Lp与与preβ-Lp不不易易分分开开，，＜＜0.5%，，凝凝胶胶机机械械强强度太低         血血清清：：染染料料为为9：：1，，染染料料过过多多稀稀释释标标本本，，而而且且染染料料中中乙乙醇醇会会引引起起蛋蛋白白量量变变性性，，影影响分别效果响分别效果           结结果果判判别别，，直直观观区区带带的的着着色色深深浅浅，，宽宽窄窄，，用用浅浅染染，，稍稍浅浅染染，，深深染染及及消消逝逝加加以以描描画画；；或或用用光光密密度度扫扫描描仪测定。

仪测定         【参考范围】【参考范围】          α-Lp 30%～～40%           preβ-Lp 13%～～25%            β-Lp 50%～～60%            CM 〔－〕〔－〕     〔二〕血清高密度脂蛋白测定〔二〕血清高密度脂蛋白测定         常常以以测测定定HDL-C含含量量代代表表HDL程程度度测测定定步步骤骤包包括括①①HDL的的分分别别；；②②测测定定HDL中胆固醇中胆固醇         HDL的的分分别别方方法法有有：：超超速速离离心心法法、、凝凝胶胶过过滤滤法法、、免免疫疫化化学学法法、、电电泳泳法法、、沉沉淀淀法法临临床床实实验验室室常常用用沉沉淀淀法法沉沉淀淀剂剂普普通通为为二二价价阴阴离离子子和和多多价价阴阴离离子子如如：：肝肝素素-Mg2+、、硫硫酸酸葡葡聚聚糖糖- Mg2+、、磷磷钨钨酸酸- Mg2+、、聚聚乙乙二醇〔二醇〔PEG〕等          如如：：磷磷钨钨酸酸- Mg2+选选择择性性地地沉沉淀淀血血清清中中的的LDL和和VLDL，，经经离离心心上上清清液液中中保保管管HDL，，然然后后用用酶酶法法测测定定上上清清液液中中的的胆胆固固醇醇含含量量，，即即代代表表HDL中中的的胆胆固醇。

固醇        【参考范围】男【参考范围】男 1.28±0.33mmol/L                                女女 1.37±0.33mmol/L        【【临临床床意意义义】】HDL-C与与冠冠心心病病发发病病呈呈负负相相关关，，HDL-C低低于于0.9mmol/L是是冠心病危险要素冠心病危险要素〔三〕血清高密度脂蛋白亚组分测定〔三〕血清高密度脂蛋白亚组分测定        HDL有三个亚类〔有三个亚类〔HDL1、、HDL2、、HDL3〕最近的研讨任务阐明，〕最近的研讨任务阐明，HDL2亚类亚类与冠心病危险度的相关程度比总与冠心病危险度的相关程度比总HDL-C更更亲密        HDL2 d = 1.063～～1.125g/ml               HDL3 d = 1.125～～1.210g/ml        HDL2脂类脂类60%   蛋白质蛋白质40% ；；HDL3脂类脂类45%   蛋白质蛋白质55%        高密度脂蛋白亚组分的分析方法有超速高密度脂蛋白亚组分的分析方法有超速离心法、柱层析法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、离心法、柱层析法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、多价阴离子分级沉淀法。

多价阴离子分级沉淀法        其中多价阴离子分级沉淀法具有快速、其中多价阴离子分级沉淀法具有快速、经济、简便更为适用，是目前临床实验室最经济、简便更为适用，是目前临床实验室最常用的方法常用的沉淀剂有硫酸葡聚糖常用的方法常用的沉淀剂有硫酸葡聚糖- Mg2+、聚乙二醇〔、聚乙二醇〔PEG〕      【【原原理理】】用用PEG做做沉沉淀淀剂剂，，以以不不同同浓浓度度的的PEG在在不不同同pH条条件件下下分分别别将将VLDL和和LDL〔〔沉沉淀淀剂剂Ⅰ 95g/L PEG，，pH6.5〕〕HDL2〔〔沉沉淀淀剂剂Ⅱ 170g/L PEG，，pH7.5〕〕沉沉淀淀，，上上清清液液中中只只含含有有HDL〔〔沉沉淀淀剂剂Ⅰ〕〕和和HDL3〔〔沉沉淀淀剂剂Ⅱ〕〕，，然然后后用用酶酶法法测测定定HDL-C和和HDL3-C，，并并以以HDL-C减减去去HDL3-C的的差差即即为为HDL2-C的的含量      【参考范围】【参考范围】       HDL2-C 男男 0.53±0.17mmol/L                      女女 0.62±0.22mmol/L       HDL3-C 男男 0.75±0.17mmol/L                      女女 0.75±0.16mmol/L     〔四〕低密度脂蛋白测定〔四〕低密度脂蛋白测定       低密度脂蛋白程度通常以低密度脂蛋白程度通常以LDL-C含量表含量表示。

示LDL-C测定方法很多，常用的有：测定方法很多，常用的有：        1. Friedewald公式法公式法          LDL-C ＝＝ TC－－HDL-C－－        式中的浓度单位是式中的浓度单位是mmol/L，在普通情，在普通情况下能得到可被临床接受的近似结果，但况下能得到可被临床接受的近似结果，但TG＞＞4.25mmol/L时不能运用此公式计算，时不能运用此公式计算，否那么结果偏向太大否那么结果偏向太大TG2.2         2.聚乙烯硫酸盐沉淀法聚乙烯硫酸盐沉淀法    聚乙烯硫酸〔聚乙烯硫酸〔PVS〕能选择性沉淀血清中〕能选择性沉淀血清中LDL，再以血清，再以血清TC减去上清液〔含减去上清液〔含HDL和和VLDL〕胆固醇，〕胆固醇，即得即得LDL-C值试剂中参与值试剂中参与EDTA去除两价去除两价阳离子，防止阳离子，防止VLDL共沉，辅以聚乙二醇独共沉，辅以聚乙二醇独甲醚〔甲醚〔PEGME〕可加速沉淀〕可加速沉淀         3.直接测定法直接测定法   匀相的匀相的LDL-C直接测定直接测定法是以不同的外表活性剂的双试剂使非法是以不同的外表活性剂的双试剂使非LDL-C与与LDL-C分两步水解，因先消除非分两步水解，因先消除非LDL-C，故也称为消除法。

故也称为消除法       【参考范围】【参考范围】LDL-C≤3.12mmol/L       【临床意义】【临床意义】LDL-C增高是动脉粥样硬增高是动脉粥样硬化发生开展的主要危险要素化发生开展的主要危险要素      〔五〕脂蛋白〔〔五〕脂蛋白〔a〕测定〕测定        脂蛋白脂蛋白(a)是由载脂蛋白是由载脂蛋白(a)与载脂蛋白与载脂蛋白B100经过二硫键衔接所构成的特殊蛋白经过二硫键衔接所构成的特殊蛋白脂蛋白脂蛋白(a)测定的方法目前常用的是测定的方法目前常用的是ELISA法        血清中的脂蛋白血清中的脂蛋白(a)与单克隆抗与单克隆抗Lp(a)抗抗体结合，再与过氧化物酶结合，构成体结合，再与过氧化物酶结合，构成Lp(a)-单克隆抗体单克隆抗体-酶复合物，然后与底物孵育显酶复合物，然后与底物孵育显色       【参考范围】【参考范围】120～～180mg/L       【【临临床床意意义义】】Lp〔〔a〕〕动动脉脉粥粥样样硬硬化化、、冠冠心心病病的的独独立立危危险险要要素素，，与与动动脉脉粥粥样样硬硬化化成成正正相相关关，，血血清清Lp〔〔a〕〕浓浓度度＞＞300mg/L时时，，其其冠冠心心病病的的发发病病率率高高于于安安康康人人的的2～～5倍倍。

血血清清Lp〔〔a〕〕程程度度主主要要决决议议于于遗遗传传，，个个体体间间Lp〔〔a〕〕程程度度差差别别很很大大，，但但同同一一个个体体血血浆浆Lp〔〔a〕〕程程度度的的变变化化较较小小，，环环境境、、饮饮食食、、药物对它的影响不明显药物对它的影响不明显五、血清载脂蛋白五、血清载脂蛋白AⅠ及及B测定测定           脂蛋白中的蛋白质部分称为载脂蛋白脂蛋白中的蛋白质部分称为载脂蛋白〔〔apolipoprotein，，Apo〕，可分为〕，可分为A、、B、、C、、D、、E、、F、、G、、H八类，其中八类，其中ApoA，，B，，C还有亚类还有亚类         ApoAⅠ是是HDL的主要蛋白质，占的主要蛋白质，占HDL蛋白质的蛋白质的85%左右，它的血清浓度可代表左右，它的血清浓度可代表HDL程度，程度，ApoB是是LDL的主要蛋白质，占的主要蛋白质，占LDL蛋白质的蛋白质的97%左右，左右，ApoB浓度主要反浓度主要反映映LDL程度         Apo的测定方法主要有三类：的测定方法主要有三类：①①层析分别，然后再按普通蛋白质定量；层析分别，然后再按普通蛋白质定量；②②电泳分别后经染色光密度扫描定量；电泳分别后经染色光密度扫描定量；③③各种免疫分析法。

各种免疫分析法         层析法操作费事，普通只用于研层析法操作费事，普通只用于研讨；电泳法简便灵敏，但各类讨；电泳法简便灵敏，但各类Apo染染色性能不一致，反复性不好；免疫法色性能不一致，反复性不好；免疫法特异性好，灵敏度高，不需预先分别特异性好，灵敏度高，不需预先分别脂蛋白，适宜临床实验室的运用，但脂蛋白，适宜临床实验室的运用，但需特异抗血清需特异抗血清        目前常用的免疫学方法有：目前常用的免疫学方法有：        1.单单向向免免疫疫分分散散法法〔〔RID〕〕 方方法法简简单单，，但需时间长，灵敏度较低但需时间长，灵敏度较低        2.火火箭箭免免疫疫电电泳泳法法〔〔IE〕〕 比比RID快快速速、、灵敏，抗血清用量少灵敏，抗血清用量少        3.免免疫疫比比浊浊法法   测测定定抗抗原原抗抗体体复复合合物物构构成成而而产产生生的的混混浊浊，，方方法法简简便便、、快快速速，，适适宜宜于于自自动动分分析析仪仪，，灵灵敏敏度度高高于于火火箭箭电电泳泳法法，，免免疫疫比比浊浊法法又又分分为为：：散散射射比比浊浊法法和和透透射射比比浊法        4.酶酶联联免免疫疫吸吸附附法法〔〔ELISA〕〕 需需制制备备指指示示酶酶与与Apo或或其其抗抗体体的的交交联联物物〔现有商品化试剂盒〕和酶标仪。

〔现有商品化试剂盒〕和酶标仪         5.放放射射免免疫疫法法〔〔RIA〕〕  用用核核素素标标志志抗抗原原作作为为示示踪踪物物，，灵灵敏敏度度可可达达3～～5μg        6.荧光免疫分析法〔荧光免疫分析法〔FIA〕〕        7.化学发光免疫法〔化学发光免疫法〔CLIA〕〕     【【 参参 考考 范范 围围 】】 Apo  AⅠ  1.00～～1.50g/L                             Apo  B        0.80～～1.00g/L     【【临临床床意意义义】】 Apo AⅠ是是HDL的的主主要要构构造造蛋蛋白白，， Apo B 是是LDL的的主主要要构构造造蛋蛋白白，，因因此此，，Apo AⅠ和和Apo B 可可直直接接反反映映HDL和和LDL的的含含量量但但在在某某些些病病理理情情况况下下，， Apo AⅠ与与HDL和和Apo B与与LDL并并非非成成正正相相关关，，临临床床上上常常将将 Apo AⅠ和和Apo B 比比值值作作为为冠冠心心病病的的危危险目的。