姜黄生姜醇提物对幼龄SD大鼠前列腺的作用.doc

姜黄生姜醇提物对幼龄SD大鼠前列腺的作用作者：杨家庆，张志华，胡英杰，张美义，朱宇同，李国桥【摘要】目的观察姜黄与生姜醇提物对幼龄SD大鼠前列腺生长的影响方法取姜黄与生姜各500g,粉碎混匀后 加70%乙醇回流提取制得醇提物;取体质量约50g的SD大鼠 随机分成正常对照组、阳性药物组、醇提物低、中、高剂 量组，每组13只正常对照组及阳性药物组均按 20mL - kg-1体质量灌胃(ig)给予生理盐水(NS)，另阳性药 物组按lm g • kg-1体质量皮下注射(sc)己焼雌酪，每周3 次;低、中、高剂量组按20mL • kg-1体质量ig给予醇提物 连续3周3周后，测定血清总酸性磷酸酶(TAP)水平，再 取睾丸、精囊腺、前列腺(腹叶、侧叶、背叶)分别称取湿 重，计算各指数结果与正常对照组比较，醇提物中、高 剂量组的大鼠前列腺生长均受到明显抑制(P【关键词】姜 黄;生姜;幼龄大鼠；良性前列腺增生(BPH)Abstr act:Object iveToobser vethecombi nedeffectsofCurcumaafjuvenileS rcumaandGianoltogettndGingeronpragueDawlnger500greheethanolethegrowtho eyrats. Met spectivelyxtracts. SDfprostateohodsTakeCu，add70%ethratswithbodyweightabormalcontrethanolextoups, withl algroupand NSat20mLpetivemedicilbestrolthout50gwere olgroup, poractsoflow3ratsineacpositivemerkgbodyweinegroupwerroughsubcurandomlydisitivemedi-，mid-andh hgroup. Rat dicinegrou ght,andrat etreatedby taneousinjvidedintoncinegroup,igh-dosegrsinthenormpweregivensintheposidiethylstiectionatlmgperkgbody weightthre etimesawee k. Ratsinlo w-, mid-and high-doseg roupsweret reatedbyetctthroughiLperkgbodyloftotalacterminedan ostate (ven ratedandwencomparisonificantinntragastri weight. Thr idphosphatdthetestistral, later ightedforvnwiththenohibitionwacadministreeweekslat ase (TAP)in ,seminalvealanddorsaisceraindermalcontrosobservedihanolextraationat20mer,theleveserumwasdesicleandpr 1)weresepa x.ResultsI1group, sig nprostategrowthinmid -andhigh-d osegroups (PKeywords: Curcuma: Gi nger; juven ilerats;be nignprosta tichyperpl asia(BPH) 良性前列腺增生(b enignprost atichyperp lasia, BPH)是困扰老年男性的常见疾病，以排尿困难、尿闭等为主要临床特征。

姜黄根茎中主要含挥发油类及姜黄素两大 类成分姜黄素类为二苯基庚烃类成分，主要含姜黄素、 去甲氧基姜黄素和双去甲氧基姜黄素［1］生姜的块茎主要 含挥发油类、姜辣素、二苯基庚烷［2］杨磊等［3］的研究 表明姜黄素能抑制雄激素受体的表达，说明姜黄素具有类 雌激素的作用Shukla等［4］通过研究发现［6］_姜酚（姜辣 素）在LN Cap细胞和大鼠前列腺腹叶中对睾酮诱导的抗凋亡 蛋白bcl-2和存活素的表达具有向下调节作用，表明［6 ］_ 姜酚可能具有一定的抗雄性激素作用可见，两者可能具 有的类雌激素作用与治疗前列腺增生的抑制雄性激素的水 平相符当前市面上用于治疗前列腺增生的制剂中未见有 姜黄或生姜本研究以姜黄为主辅以生姜，考察两者组合 的醇提物对幼龄S D大鼠前列腺的影响，为开拓良性前列腺 增生的用药范围提供参考现报道如下1材料药物姜黄（批号08 0401D510,四川）与生姜（购自农贸市场） 经广州中医药大学青蒿研究中心朱宇同教授鉴定，分别为 姜科植物姜黄Curcum alongaL.的干燥根茎与姜科植物姜Z ingiberoff icinaleRos c.的新鲜根茎；姜黄素对照品（自 制），经HPLC法测定纯度为％;己烯雌酚注射液（2mg/mL，批 号0 80605,上海通用药业股份有限公司）。

动物SD大鼠，雄性，体质量45〜55 g，SPF级，由广东省 医学实验动物中心提供实验动物质量合格证号⑻46490, 许可证号：SCXK （粤）XX-0002，粤监证字XXA020仪器LC-10 A高效液相色谱仪，S PD-M10Avp光二极管阵列 检测器（日本岛津公司）；Oly mpus全自动生化分析仪 （AU5421,日本奥林巴斯公司），由南方医院检验科提 供;Startoriu s （BS224S）万分之一电子天平（德国赛多利斯 公司）实验方法醇提物的制备及含量测定参考文献［5-9］制备姜黄生姜 提取物取姜黄、生姜各5⑻g粉碎，混合均匀，加生药3 倍量的70%（4））乙醇回流2次，时间分别为h、h，过滤，合 并滤液，回收，浓缩制成干膏（每克干膏相当于姜黄或生姜 均为5 4g）,以HPLC法对有效成分姜黄素进行定量动物实验分组及给药将SD大鼠随机分成正常对照组，阳性药物 组（己烯雌酚），醇提物低、中、高剂量组（共5组），每组 13只正常对照组及己烯雌酚组均按20mL - kg -1体质量 灌胃（ig ）给予生理盐水（NS ），阳性药物组再按1 mg • kg-1 体质量皮下注射（sc）己烯雌酚，每周均3次;低、中、高剂量组分别按20mL • kg-1体质量ig给予醇提物（分别相当于 生药8、2 2、36g - kg-1 各组均自由饮水，摄食，连续3周（21d）。

解剖、计算于第22天称取大鼠体质量，取血，测定总 酸性磷酸酶（T AP）水平；随后处死动物，剖取前列腺腹叶、 侧叶、背叶及精囊腺、睾丸，分别称取湿质量，计算各脏 器指数统计学处理采用统计软件进行数据处理，实验数据以 （土s）表示，各组间数据比较采用t检验，以P2结果 法测定醇提物中姜黄素的含量色谱条件参考文献［10-11］拟定以下色谱条件色谱柱： Diamons ilC18 柱（250 mmXmm, 5 u m）:流动相：乙膳-4%（小） 冰醋酸溶液（5 0 : 50）;流速：m L/min;柱温：2 5C;检测波 长：25 4nm流动相的选择取姜黄素对照品适量，加甲醇制成mg/mL的溶液，精 密量取10 PL注入液相色谱仪，记录色谱图分别以不同比 例的流动相进样，最终确定乙腈_4 %（巾）冰醋酸溶液比例为 60 : 40,在该条件下姜黄素的峰形较佳入max的选择利用二极管阵列检测器在190〜370n m范围内对姜黄素对照品溶液进行扫描，结果在263nm处具有最大吸收，故 以263n m为检测波长线性试验精密量取姜黄素对照品溶液(9mg/mL) 3、6、9、1 2、15 18 HL注入液相色谱仪，记录色谱图。

以姜黄素色谱峰峰面 积为纵坐标，进样量为横坐标绘制曲线，得回归方程为： Y=,相关系数r2为909 ,表明姜黄素在〜ug范围内线性 关系良好精密度试验精密量取上述对照品溶液(9 mg/mL),连续进样5次， 每次10uL ,记录色谱图，计算得姜黄素峰面积的平均值 为2486170, R SD=/o(n=5),表明测定的精密度良好稳定性试验取姜黄素对照品加甲醇制成mg/mL的溶液， 以Pm滤膜滤过，作为姜黄素对照品溶液;另取醇提物约g 精密称定，置25mL量瓶，加甲醇适量超声溶解，放冷、定 容、滤过，再以Pm滤膜滤过，作为供试品溶液精密量取 上述供试品溶液各10 uL分别在0、3、6、9、12h注入液 相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算各时间点的含量及 RSD(%),结果得姜黄素平均含量为％，RSD=%,表明供试品 溶液在12h内稳定回收试验取姜黄素对照品适量，加甲醇制成约mg/m L 的溶液，作为姜黄素对照品贮备液取贮备液适量加甲醇稀释成含姜黄素mg/mL的溶液，以ym滤膜滤过，作为姜黄 素对照品溶液;另取醇提物约g，共5份，精密称定，置2 5mL容量瓶，分别精密加入上述对照品贮备液ImL，加甲醇 适量，超声溶解，放冷、定容、滤过，滤液再以Pm滤膜滤 过，作为供试品溶液。

精密量取对照品溶液及供试品溶液 各10 PL注入液相色谱仪，记录色谱图，计算各供试品溶液 中姜黄素的回收率(%)及RS D(%),结果得平均回收率为％， RSD 为％重复性试验取醇提物约g，精密称定，置25mL量瓶， 加甲醇适量，超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀， 滤过，吸取滤液适量以Pm滤膜滤过，作为供试品溶液精 密量取上述对照品溶液和供试品溶液各10 uL注入液相色 谱仪，记录色谱图，按外标法计算姜黄素的含量结果RSD 为％，表明测定的重复性良好姜黄素对照品与醇提物的色 谱图见图1、2(横坐标为样品洗脱时间；纵坐标为信号响应 值)[PSdl2l3图1姜黄素对照品HPLC图FigurelHPL Cchromatog ramofcurcu min[PSdl22 :S*2〗图 2 醇提物HPLC 图 Figur e2HPLCchro matogramof ethanolext racts 动物实验醇提物对大鼠体质量增长率的影响结果见表1与正常 对照组比较，己烯雌酚组明显降低了大鼠的体质量(P醇提 物对大鼠睾丸、精囊腺的影响结果见表2与正常对照组比 较，己烯雌酚组大鼠睾丸的生长明显受到抑制，而精囊腺 受影响不大;醇提物低、中、高剂量均能不同程度抑制睾丸 生长，但不及己烯雌酚显著(P醇提物对大鼠前列腺的影响 结果见表3。

与正常对照组比较，己烯雌酚组的大鼠总前列 腺指数显著降低(P醇提物对各组大鼠血清总酸性磷酸酶 (TAP)的影响结果见表4与正常对照组比较，己烯雌酚组 总酸性磷酸酶(TAP)的水平显著降低；醇提物低、中、高剂 量组的TAP也明显降低，随浓度增大，降低的幅度越大 表1醇提物对大鼠体质量增长率的影响表2醇提物对大鼠 睾丸、精囊腺的影响表3醇提物对大鼠前列腺的影响表4 醇提物对大鼠TAP的影响3讨论参考文献［1 2］，本研究以体质量为45〜55g的幼龄SD 大鼠为实验动物，结果表明姜黄生姜醇提物对该种动物的 前列腺生长具有抑制作用低剂量对前列腺作用不明显， 中、高剂量作用明显，且对侧叶、背叶均有抑制作用，而 对腹叶的抑制仅在高剂量时明显可见，姜黄生姜醇提物对大鼠前列腺各叶的抑制作用具有选择性TAP主要来自前 列腺，健康男性血清中1 /3〜1/2的TAP来源于前列腺，即 前列腺特异性酸性磷酸酶(PAP。