大柴胡汤对急性坏死性胰腺炎大鼠模型的影响.pdf

N A N T O N G H E P A T O B l L I A R y & P A N C R E A T l C S U R G E R YF o R U M⑧翟鬻搿离焉摊峻流会胰腺E B 含量在3 h 较高，之后明显下降这可能与大鼠对造模手术操作本身的应激反应有关，胰腺毛细血管通透性亦呈一过性升高，由于损伤程度轻，之后很快下降A N P 组血清淀粉酶在造模后各时间点持续升高，均显著高于对照组( 7 倍左右) √心咿 组血清A Q P l 含量逐渐减少，除3 h 外均显著低于对照组，提示√6 岬大鼠血清A Q P l 含量可能与病情严重度呈负相关此外，免疫组化检测和W e s t e r nb l o t 检测结果均显示，A N P 组大鼠胰腺组织A Q P l 蛋白表达显著低于对照组；F Q ．P C R 检测结果显示，A N P 组大鼠胰腺组织A Q P l 基因m R N A表达较对照组减弱，在造模后3 h 、1 2 h 时间点这种差异有显著性，表明在A N P 大鼠模型中胰腺组织A Q P l 基因m R N A 表达受到抑制，蛋白含量减少上述结果提示A N P 大鼠胰腺组织毛细血管通透性增高可能与A Q P l 表达减弱有关。

最近高振明等【9 l 报道急性胰腺炎大鼠肺组织中A Q P l 表达显著下调，参与了肺损伤机制本研究结果也提示，A N P 大鼠胰腺A Q P l 蛋白和基因表达显著下调，A Q P l 表达减弱可能在胰腺毛细血管渗漏的发生中起重要作用据推测，导致A Q P l 表达下调的原因，可能与A N P 时机体释放的胰酶及T N F o L 等炎性因子的抑制作用有关参考文献：略大柴胡汤对急性坏死性胰腺炎大鼠模型的影响奉典旭1 ，陈亚峰1 ，陈腾1 ，施浩然1 ，蔡杰1 ，李秋营1 ，孔雷1 ，饶亚敏2 ，韩峰1上海中医药大学附属普陀医院1 普外科2 病理科2 0 0 0 6 2重症急性胰腺炎( S A P ) 是外科常见的急腹症，病情凶险，治疗棘手中医药治疗S A P具有独特的疗效，其中汉代张仲景的经典方剂大柴胡汤在临床应用较广泛【l 】大柴胡汤具有和解少阳，通里泻热的功效，主治少阳阳明合病本课题采用实验动物模型，动态观察大柴胡汤对急性坏死性胰腺炎( a c u t en e c r o t i z i n gp a n c r e a t i t i s ，A N P ) 的治疗作用，并初步探讨其机理。

1 材料与方法1 ．1 材料1 ．1 ．1 实验动物健康雄性S D 大鼠( S p r a g u e - D a w l e yr a t s ) 5 4 只，体质量2 2 0 士3 0 9 ，购自上海西普尔一必凯实验动物有限公司，生产许可证号为S C X K ( 沪) 2 0 0 3 - - 0 0 0 2 1 ．1 ．2 实验药物大柴胡汤由上海中医药大学附属普陀医院中药房煎制，给药量相当于含生药8 ．2 9 ／k g ／日大柴胡汤中，柴胡半斤( 1 5 9 ) ，黄芩三两( 9 9 ) ，芍药三两( 9 9 ) ，半夏 半斤( 9 9 ) ，枳实四枚( 9 9 ) ，大黄二两( 6 9 ) ，生姜五两( 15 9 ) ，大枣十二枚( 5 个，约1 0 9 ) ，总计8 2 克1 2 I 大鼠的剂量根据公式d B = d A x R B ／R A ×( W A ／W B ) 1 ／3 计算，其中，d A 、d B 分别为人和大鼠每公斤体重的剂量，单位为m g ／k g ，R A 、R B 为人和大鼠的体型 系数，R A = 1 0 0 ，R B = 5 9 ，W A 、W B 分别为人和大鼠的体重值，单位为k g t 3 i 。

以6 0 k g 体重作为人的标准体重，大鼠以2 0 0 9 为标准体重，计算所得牛磺胆酸钠、伊文思蓝( E v a n sB l u e ，E B ) 购自s i g m a 公司2 0 0 9 国际肝胆胰外耧南通论坛 暨第二十二届全国肝胆胰外科学7 l t 经验交流会侨糯N A ⋯N T O N G 姒州⋯c —c 礓趣爹8 U 硒刚m R U M1 ．1 ．3 仪器设备全自动生化分析仪( I N T E G R A 4 0 0 ，C O B A S ) ；紫外分光光度计( B i o ．R a d ) ；病理切片机( R M 2 2 3 5 型，L e i c a ) ；病理染色机( S T 5 0 1 0 型，L e i c a )1 ．2 方法1 ．2 ．1 动物分组实验动物按随机数字法分为假手术组、A N P 组和大柴胡汤预处理组( 大柴胡汤组) ，每组1 8 只1 ．2 ．2 模型制备及标本留取大鼠实验前1 2 h 禁食，自由饮水，2 ．5 ％戊巴比妥钠( 0 ．1m l ／1 0 0g ) 腹腔内注射麻醉，腹部正中切口进腹，于胆胰管肝门水平用无损伤血管夹暂时夹闭，经十二指肠侧壁逆行胆胰管穿刺，按0 ．1 5 m L ／1 0 0 9 体重剂量匀速注射5 ％牛磺胆酸钠，1 0 m i n 后去除血管夹和穿刺针，缝合十二指肠穿刺孔，连续缝合腹壁，制成A 3 , f P 模型。

大柴胡汤组制模前4 8 h 、2 4 h 、2 h 分别用大柴胡汤2 m l 灌胃，制模方法同A N P 组假手术组开腹后只轻轻翻动十二指肠及胰腺大鼠造模后于3 、6 、1 2 h 分批处死，每个时间点每组处死6 只处死前1 h ，经阴茎静脉按0 ．1 m l ／1 0 0 9 体重剂量注入2 ％伊文思蓝染料1 h 后，2 ．5 ％戊巴比妥 钠腹腔内注射麻醉，新洁尔灭酊消毒后，腹部正中切口入腹，抽取腹水、腹主动脉血，记录腹水量，留取胰腺、肺、肠壁组织标本1 ．2 ．3 血清淀粉酶测定采用酶法在全自动生化分析仪上测定血清淀粉酶含量1 ．2 ．4 组织病理学观察组织标本常规中性福尔马林固定，石蜡包埋，切成4 u m 的切片，H E 染色，光学显微镜下观察胰腺、肺、肠壁组织的病理变化并根据S c h m i d t l 4 1 方法对胰腺、肺及肠壁病理改变进行严重度积分1 ．2 ．5 毛细血管通透性测定采用E B 染料法检测胰腺、肺、肠壁组织毛细血管通透性参照M u h s 等【5 1 报道的方法进行大鼠处死前1 h ，经阴茎静脉按0 ．1 m l ／1 0 0 9 体重剂量注入2 ％伊文思蓝染料。

方法：取相应组织标本3 0 0 m g ，加入l m l 甲酰胺溶液，6 0 C 孵育2 4 h 2 0 0 0 9离心3 0 m i n ，取上清液，空白管调零，采用紫外分光光度计测定吸光度( 波长6 2 0 n m ) ，记录O D 值根据已知E B 值绘制标准曲线根据所测组织的O D 值和标准曲线计算组织中E B 含量，代表组织血管通透性1 ．3 统计学分析各检测指标测定结果均以均数- I - 标准差( 姓可表示，应用S P S S l 5 ．0 统计软件包分析处理数据，采用S t u d e n tf 或单因素方差分析法检验各组间差异，P < 0 ．0 5 为差异有统计学意义2 结果2 ．1 大鼠腹水量的变化假手术组大鼠各时间点均无腹水形成；A N P 组可见淡黄色或红色血性腹水，腹水量 在制模后6 h 最多( 表1 ) 在造模后3 h 、6 h 、1 2 h 大柴胡汤组大鼠腹水量明显低于√6 脚组表1 各组大鼠腹水量的变化( m l ，x 士s )注：与同时间点A N P 组比较，宰尸< 0 ．0 5 ，水+ 尸< 0 ．0 1黔硼国际肝胆胰外科南迥论坛 叠第= 十二届茔国肝胆胰外科学7 | l 经验交5 j ；| 盆徽麟避要裘懑黼融嘲誊2 ∞9 国际肝胆胰外科南通论坛 暨第二十二届呈国肝胆胰外科宇7 f c 经验交流合N A N T O N G H E P A T O B I L l A R Y & P A N C R E A = r l C S U R G E R YF O R U M表2 各组胰腺、肺、肠壁组织病理学评分比较( x 虹)注：与同时I ’H J 点假手术组比较，≯< O ．0 1 ；与同时问点大柴胡汤组比较，p < O ．0 52 ．3 血清淀粉酶含量各组大鼠血清淀粉酶变化见表3 。

造模后各时间点A N P 组大鼠血清淀粉酶均高于假手术组，大柴胡汤组血清淀粉酶较A N P 组明显下降，差异有显著性意义( 尸< o ．0 1 ) 表3 不同时间点各组血清淀粉酶含量变化( U ／L ，x 姆)注：与同时问点假手术组比较，宰P < 0 ．O l ，与同时间点大柴胡汤组比较，肇< 0 ．0 5表4 各组胰腺、肺、肠壁组织毛细血管渗透性( E B 含量) 变化( g g ／m l ，x 姆)注：与同时间点假手术组比较，+ P < 0 ．0 5 ，与同时间点大柴胡汤组比较，肇< 0 ．0 5N A N T O N G H E P A T O B I L 队R y & P A N C R E A T I C S U R G E R YF O R U M∥加洛2 0 0 9 国际肝胆胰外科南通论坛1 ≤：参’暨第二十= 届茔国肝胆胰外科学术经验交流会2 ．4 胰腺、肺、肠壁组织毛细血管通透性的变化各组胰腺、肺、肠壁组织毛细血管通透性变化见表4 胰腺组织中，A N P 组各时间点胰腺组织E B 含量均显著高于假手术组，大柴胡汤组胰腺E B 含量显著低于A N P 组( 尸< O ．0 5 ) 。

肺组织中，A N P 组各时间点肺组织E B 含量均显著高于假手术组，大柴胡汤组肺E B 含量在3 h 、6 h 显著低于A N P 组( 氏O ．0 5 ) 肠壁组织中，A N P 组肠壁组织E B 含量均显著高于假手术组，大柴胡汤组肠壁E B含量显著低于A N P 组( 尸< o ．0 5 ) 3 讨论重症急性胰腺炎是临床上常见的急腹症，起病急、变化快、病情复杂在其发病的较早阶段，国内外均强调规范的非手术治疗措施，包括及时充分的液体复苏、胰腺休息、保护和改善胃肠道功能及去除病因等中西医结合治疗是我国的特色，已成为重症急性胰腺炎非手术治疗方案中的重要组成部分【6 】大柴胡汤是仲景名方，具有和解少阳，通里泻热的功效现代研究发现，该方剂具有广泛的药理作用，如松弛括约肌张力和利胆、抑制胃酸过多分泌以保护胃粘膜、保护肝细胞及降低血脂等【_ 卜8 1 自2 0 世纪7 0 年代初，国内开始应用大柴胡汤治疗急性胰腺炎，取得良好的效果，但其作用的机制有待进一步通过实验研究来阐明本课题采用5 ％牛磺胆酸钠经胆胰管逆行注射法制备大鼠A N P 模型，其病理改变与人的急性出血坏死性胰腺炎相似本研究结果显示在造模前应用大柴胡汤灌胃作为对A N P模型的预处理，可以明显减轻造模后胰腺、肺、肠壁组织的病理改变，减少腹水量，降低血淀粉酶水平。

这表明大柴胡汤对A N P 大鼠有明显的防治作用孔棣等【9 】报道，中药大柴胡汤冲剂对蛙皮素和内毒素诱导的大鼠重型急性胰腺炎模型有良好的保护作用，减轻大鼠胰腺病理改变，提高2 4 h 生存率本研究结果还显示，A N P 大鼠在制模后3 h 开始，其胰腺、肺、肠壁组织E B 含量即显著高于假手术组俨< o ．0 1 ) ，表明在A N P 大鼠模型早期，胰腺、肺、肠壁组织的毛细血管通透性显著升高，这与病理检测显示胰腺显著水肿、肺和肠壁间质水肿、大量腹水形成相符大柴胡汤组胰腺、肺和肠壁E B 含量显著低于A N P 组，提示大柴胡汤可以有效减轻该模型大鼠胰腺、肺和肠壁组织的毛细血管渗漏其中，大柴胡汤对肺组织的毛细血管渗漏的保护作用在病程的早期较明显类似结果尚未见报道，值得进一步研究本研究结果表明，应用大柴胡汤预处理可以有效减轻A N P 大鼠胰腺、肺、肠壁等组织的病理改变，显著减少大鼠腹水量、降低血清淀粉酶水平，其机理可能与降低组织毛细血管通透性有关参考文献：略。