免疫沉淀类试验免疫比浊.ppt

免疫浊度测定免疫浊度测定微生物与免疫教研室微生物与免疫教研室沉淀反应（precipitation ）可溶性抗原与相应抗体在适当条件下发生特异性结合所出现的沉淀现象分类液体内沉淀试验絮状沉淀试验 环状沉淀试验免疫浊度测定凝胶内沉淀试验免疫扩散免疫电泳单向免疫扩散试验双向免疫扩散试验火箭免疫电泳对流免疫电泳沉淀反应免疫浊度测定概念：将现代光学测量仪器与自动化分析 检测系统相结合应用于沉淀反应，可以 对各种液体介质中的微量抗原、抗体和 药物及其他小分子半抗原物质进行定量 测定一）免疫浊度分析的基本原理：• 抗原、抗体在特定的电解质溶液中反应，形成 小分子免疫复合物(19S)，使反应液出现浊度 在抗体稍微过量且固定的情况下，形成的免疫 复合物量随抗原量增加而增加，反应液的浊度 亦随之增大，即待测抗原量与反应溶液的浊度 呈正相关用一系列已知浓度的抗原标准品同 时进行试验，制备剂量反应曲线，即可计算出 标本中抗原的含量（二）类型1. 透射免疫比浊法通过检测光被吸收、衍射、反射和折射后光 线减弱的变化来衡量抗原抗体的复合物 2、散射免疫比浊法通过检测光折射和衍射而形成的散射光强度 来定量抗原抗体的复合物。

3、免疫胶乳比浊法以胶乳作为载体对小分子免疫复合物进行微 量测定，进一步提高了免疫浊度测定的灵敏 度1 透射免疫比浊法 原理：可溶性抗原抗体在一定缓冲液中发生反应 后形成的免疫复合物，使介质浊度发生改变， 光线通过抗原抗体反应的溶液时，被其中的免 疫复合物微粒吸收，在保持抗体过量的情况下 ，免疫复合物量越多，透射光越少，光线被吸 收越多，用吸光度来表示即吸光度与免疫复 合物量呈正相关可用抗原标准品建立标准曲 线，测出待检抗原含量•由于免疫复合物颗粒大小再35- 100nm，对近紫外的光线可见最大 吸收峰，故选择290-410nm波长测 定最佳，目前多用340nm方法评价：优点：① 灵敏度比单扩法高5— 10倍；② 操作简便快速，1h可报 告结果；③结果准确，且能用全自动 化或半全自动化仪器进 行分析，尤其随着胶乳 粒子增强浊度测定法的 出现，使敏感度提高， 其应用更加广泛缺点： ①抗体用量较大；②检测需抗原抗体反应 达到平衡，耗时较长 ；③溶液中存在的抗原抗 体复合物分子应足够 大④灵敏度较散射比浊法 低2 散射免疫比浊法原理：散射光系指一定波长的光沿水平轴照射，碰 到溶液中的免疫复合物，对光线产生反射和折 射而形成的。

散射浊度法是在入射光的一定角 度检测粒子发出的散射光，散射光的强度与复 合物的含量呈正比，即待测抗原越多，形成复 合物越多，散射光强度越强又可分为速率散 射比浊法(rate nephelometry)和终点散射比浊 法(endpoint nephelometry)3 免疫胶乳比浊法 原理 是一种带载体的免疫比浊法，用抗体致敏的大 小适中，均匀一致的胶乳颗粒（一般是0.2μm） ，在遇到相应抗原时，胶乳颗粒上抗体与抗原特 异性结合，引起胶乳颗粒凝集分散的单个胶乳 颗粒直径位于入射光波长之内，光线可透过，当2 个或2个以上胶乳凝集时，则使透过光减弱或散射 光增强这种减少或增强的程度与胶乳凝集成正 比，与抗原浓度呈正相关a）带抗体的胶乳在波长之内可透过光线；（b）结合后，则形成光线衰减方法评价1、敏感度高，可达到ng/L水平 2、操作简单，容易自动化 3、结果稳定、可靠，特异性好；不需 特殊仪器设备，一般分光光度计、自 动化生化分析仪或散射比浊仪均可使 用 (三)、主要影响因素1.抗原抗体比例 2.抗体的质量 3.抗原抗体反应的溶液 4.增浊剂的使用1 抗原抗体比例1. 高剂量钩状效应（high dose hook effect )2. 海德堡（heidelberger）曲线理论2 抗体的质量（1）特异性高（2）效价高（3）亲和力高（4）抗血清来源3 抗原抗体反应的溶液• pH6.5~8.5• 电解质离子强度、种类（磷酸盐缓冲液）4 增浊剂的使用• PEG、tween-20等非离子型亲水剂 • 作用：消除蛋白质分子周围的电子 云和水化层，促进抗原、抗体分子 靠近，结合形成大分子复合物。

本次实验内容•免疫浊度测定——免疫球蛋白检测 具体步骤见说明书思考题• 免疫浊度测定的原理、方法与分类？ • 影响免疫浊度测定的因素有哪些？。