香蕉果实品质比较.docx

植物生理学实验13 个香蕉品种的果实品质比较分析小组人员：谢小涵 蒋灵灵 王卓琴 邵方平 龚胜斌本实验通过测定 3 个香蕉品种的可溶性总糖、V C、可溶性蛋白和有机酸含量来比较这 3 个香蕉品种的果实品质1.可溶性总糖含量的测定【实验目的】掌握蒽酮法测定可溶性总糖含量的原理和方法【实验原理】糖（还原糖与非还原糖）在硫酸作用下生成糠醛，糠醛再与蒽酮作用形成蓝绿色络合物，其颜色的深浅与糖含量高低呈正相关利用蓝绿色物质在 625nm 波长处有最大吸收值的特性进行比色测定，方法简单器材与试剂】1.实验仪器与用具分光光度计、恒温水浴锅、天平、离心机、电炉、烘箱、研钵、 剪刀、刻度试管、玻璃棒、漏斗、移液管、容量瓶2.实验试剂葡萄糖标准液（200μg/ml）：葡萄糖在 80℃烘箱中烘至恒重，称取 100mg，用蒸馏水定容至 500ml，即得含糖量为 200μg/ml 的标准液蒽酮试剂：100mg 蒽酮溶于 100ml 稀硫酸（向 76ml 浓硫酸中加 30ml 水），储于棕色瓶内，冰箱保存，最好使用当天配置乙醇（80％）活性炭3.实验材料3 个品种的香蕉【实验步骤】1.可溶性糖的提取称取新鲜果肉 1g，剪碎研磨至均浆，倒入三角瓶（50ml）中，加入 10ml 80％乙醇，80℃水浴 40min，不断搅拌，冷却，4000g 离心 10min，残渣中加入 5ml 80％乙醇，重复在80℃水浴中提取 2 次，合并上清液，加入 10mg 活性炭，80℃水浴 30min，过滤，定容至25ml，取滤液待测定。

2.制作标准曲线取 7 支大试管，按下表数据配制一系列不同浓度的葡萄糖溶液：管号 1 2 3 4 5 6 7葡萄糖标准液（ml）0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.7 0.6 0.4 0.2葡萄糖含量 0 10 20 30 40 60 80植物生理学实验2（μg）在每支试管中立即加入蒽酮试剂 5ml，混匀，沸水浴 10min，冷却用分光光度计测定625nm 处的 OD 值，绘制标准曲线3.显色和比色吸取 0.2ml 样品提取液，加入 0.8ml 蒸馏水，混合，再加入 5ml 蒽酮试剂，小心混合，沸水浴 10min，冷却用分光光度计测定 625nm 处的 OD 值从标准曲线上得到提取液中糖的含量结果计算】可溶性糖含量（mg/g）=[C×n×V/a] ÷（W×10 3）式中，C 为从标准曲线查到的待测果实样品葡萄糖含量（μg/ml） ；a 为样品提取液体积（ml） ；V 为提取液定容体积（ml） ；n 为稀释倍数；W 为果肉重量（g） 注意事项】1.应用蒽酮试剂与糖反应的呈色程度随时间发生变化，故样品要尽快比色2.该显色反应非常灵敏，所用器皿需洁净。

2.维生素 C 含量的测定【实验目的】学习并掌握 2,6 一二氯酚靛酚滴定法定量测定维生素 C（抗坏血酸）的原理和方法【实验原理】2，6-二氯酚靛酚钠是氧化性染料，可将还原态的维生素 C 氧化成脱氢维生素 C，而染料本身从深蓝色被还原成无色的衍生物2，6-二氯酚靛酚钠在酸性条件下呈红色在滴定终点之前，滴下的 2，6-二氯酚靛酚钠立即被还原成无色当溶液从无色转变成微红色时，即为滴定终点器材与试剂】1.实验仪器与用具锥形瓶（50ml） 、移液管（1ml 和 10ml） 、容量瓶、微量滴定管（3ml 或 5ml） ，研钵2.实验试剂抗坏血酸标准溶液：准确称取 50mg 抗坏血酸，溶于 1％的草酸溶液中，稀释至 500ml，用棕色瓶储藏，冷藏保存，最好现用现配2％草酸溶液：草酸 2g，溶于 100ml 蒸馏水中1％草酸溶液：1g 草酸溶于 100ml 蒸馏水中0.01％ 2,6 一二氯酚靛酚溶液：称取 104mgNaHCO3溶于 300ml 热水中，加入 50mg 2,6 一二氯酚靛酚溶解，冷却后，加水定容至 500ml，过滤，滤液储于棕色瓶内（4℃，可保存一周）每次临用前，用标准抗坏血酸溶液标定浓度。

3.实验材料3 个品种的香蕉【实验步骤】1.提取洗净新鲜果实，吸干，称取 5g 剪碎放入研钵内，加 5ml 2％草酸研磨成匀浆，倒入 100ml的容量瓶内，用 2％草酸洗数次，定容至刻度，混匀后过滤，根据滤液颜色深浅考虑是否需要脱色2.滴定植物生理学实验3标定 2,6 一二氯酚靛酚溶液取 2 个 50ml 锥形瓶，其中 1 个加入 1ml 标准抗坏血酸溶液和9ml 1％草酸溶液，混合；另外 1 个锥形瓶只加入 10ml 1％草酸溶液（为空白） ，分别用已标定的 2,6 一二氯酚靛酚溶液（染料）滴定至粉红色出现，15s 不褪色记录所用的 2,6一二氯酚靛酚溶液毫升数，用 K 表示取 2 个 50ml 锥形瓶各加入提取液 10ml，同样的方法用标定的 2,6 一二氯酚靛酚溶液滴定，记录两次滴定所得的 2,6 一二氯酚靛酚溶液毫升数，求平均值为滴定提取液所用的体积 V1.【结果计算】样品名 称样品质量（W）/g提取液总体积(V）/ml测定时所取滤液（V 3）/ml滴定样液所用染料体积（V 1）/ml滴定空白所用染料体积（V 2）/ml1ml 染料氧化维生素C 的量（K）/mg维生素 C 含量（mg/100g）维生素 C 含量（mg/100g）=[（V 1-V2）×K×V] ÷（W×V 3）×100【注意事项】1.滴定维生素 C 时不要超过 2min，因为样品内一般都含有其他物质，其还原染料的能力比维生素 C 迟缓，快速滴定可以减少它们的影响。

2.染料 2,6 一二氯酚靛酚溶液的用量在 1-4ml，超过此范围则应减少样品量或将提取液适当稀释3.样品提取液要避免日光直射，否则会加速抗坏血酸的氧化4.提取物中存在色素类物质，会影响滴定终点的观察，可加入适量白陶土进行脱色过滤后再滴定每次滴定时以标准坏血酸溶液标定3.有机酸含量的测定【实验目的】学习并掌握用指示剂滴定法测定有机酸含量的原理和方法实验原理】植物组织中的有机酸易溶于水、醇和醚，可用这些溶剂先将有机酸提出，然后用氢氧化钠标准溶液滴定，以酚酞为指示剂，通过消耗的氢氧化钠标准溶液的体积计算植物组织内有机酸的含量器材和试剂】1.实验仪器与工具电子天平、电热恒温水浴锅、研钵、量筒、移液管、烧杯、容量瓶、漏斗、锥形瓶、碱式滴定管等玻璃仪器和滤纸2.实验试剂0.1mol/L 氢氧化钠标准溶液、酚酞指示剂、10g/L 95%乙醇溶液等3.实验试材3 个品种的香蕉植物生理学实验4【实验步骤】1.样品提取称取 5g 果实，放入研钵中，加少许石英砂研磨成匀浆，用蒸馏水洗入 50ml 三角瓶中，加水约 30ml，放入 80℃水浴中浸提 30min，期间不断搅拌取出冷却，过滤入 50ml 容量瓶中，并用蒸馏水洗残渣数次，定容至刻度，充分摇匀做测定用。

2.测定根据预测酸度，用移液管取 10-15ml 样液到 50ml 三角瓶中，加入酚酞指示剂 3-5 滴，用0.1mlo/L 氢氧化钠标准溶液滴定至出现微红色，摇 30-60s 不褪色为滴定终点，记下所消耗体积取 3 次平均值结果计算】有机酸含量（％）=c×V 1×k×50÷（V 0×m）×100式中，c 为氢氧化钠标准溶液摩尔浓度；V 1为滴定时所消耗的氢氧化钠标准溶液体积（ml） ；k 为换算为某种酸克数的系数，见下表；50 为试样浸提后定容体积（ml） ；V 0为吸取滴定用的样液体积（ml） ；m 为试样质量（g） 几种有机酸的换算系数（k）有机酸名称 换算系数（k） 果蔬与制品苹果酸 0.067 仁果类、核果类水果结晶柠檬酸（1 个结晶水） 0.070 柑橘类、浆果类水果酒石酸 0.075 葡萄草酸 0.045 菠菜乳酸 0.090 盐渍、发酵制品乙酸 0.060 醋渍制品4.可溶性蛋白质含量的测定【实验目的】掌握考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量的基本原理和方法实验原理】考马斯亮蓝 G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。

该染料在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在 465nm，后者在 595nm 在一定蛋白质浓度范围内（1-1000µg） ，蛋白质与色素结合物在 595nm 波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定考马斯亮蓝 G-250 于蛋白质结合反应十分迅速，2min 左右即达到平衡其结合物在室温下 1h 内保持稳定此法灵敏度高，易于操作，干扰物质少，是一种比较好的定量法其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异器材与试剂】1.实验仪器与用具电子天平、分光光度计、离心机、研钵、刻度试管及试管架、移液管（1ml 和 5ml） 、容量植物生理学实验5瓶（10ml）2.实验试剂考马斯亮蓝 G-250 染色液：称取考马斯亮蓝 100mg，用 50ml95%乙醇溶解，加 100ml85%磷酸，加水稀释至 1L，储于棕色瓶中标准蛋白溶液（0.1mg/ml）：称取 10mg 牛清蛋白，用 0.9%的氯化钠溶解，定容至100ml3.实验器材三个品种的香蕉【实验步骤】1.取 7 支试管，按下表加入试剂混合摇匀，放置 5-20min。

用分光光度计测定 OD595值以 OD595为纵坐标，标准蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线0 1 2 3 4 5 6牛血清蛋白（mg/ml）0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0蒸馏水（ml） 1 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 0考马斯亮蓝试剂（ml）5 5 5 5 5 5 52.称取果肉样品 2g 放入研钵中，加 2ml 蒸馏水研磨成匀浆，移到离心管中，用 6ml 蒸馏水分次洗涤研钵，转移至离心管中，4000r/min 离心 15min，上清液转入容量瓶，蒸馏水定容至 10ml，摇匀后待测3.吸取样品提取液 1ml，放入带塞的试管中，加入 5ml 考马斯亮蓝 G-250 溶液，充分混合，放置 5-20min 后，在 595nm 处，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量结果计算】蛋白质含量（mg/g）=C×V T÷（1000V 1×W）C 为查标准曲线值（µg） ；VT 为提取液体积（ml） ；V1 为测定时加样量（ml） ；W 为样品鲜重（g） 5.整体比较分析对上述实验所得数据进行整体的比较分析。