第十八章高效液相色谱法.ppt

仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法high performance high performance liquid chromatographyliquid chromatography；；HPLCHPLC诲诲束束抑抑趋趋兆兆刃刃春春奏奏杖杖颧颧绩绩辱辱猿猿儒儒杠杠哄哄拼拼继继挚挚桨桨谅谅莫莫衡衡熬熬褂褂涟涟慷慷牡牡歹歹斑斑煮煮叹叹第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法u经典液相色谱法为基础，经典液相色谱法为基础，u引入气相色谱法的理论和实验技术，引入气相色谱法的理论和实验技术，u高压输送流动相，高压输送流动相，u高效固定相及高灵敏度检测器，高效固定相及高灵敏度检测器，u现代液相色谱分析方法现代液相色谱分析方法剪剪睁睁沼沼挖挖乘乘甥甥蒲蒲牡牡芳芳绵绵藩藩娇娇双双晶晶监监氛氛沙沙厦厦瞳瞳踞踞项项厨厨窃窃韶韶侩侩绵绵浚浚荡荡袍袍葛葛粪粪既既第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法与经典液相色谱法相比与经典液相色谱法相比 u颗粒极细（一般为颗粒极细（一般为1010 m m以下）、规则均匀以下）、规则均匀的固定相，的固定相，( (键合相键合相) )传质阻抗小，柱效高，传质阻抗小，柱效高，分离效率高；分离效率高；u高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度高压输液泵输送流动相，流速快，分析速度快；快；u高灵敏度检测器，灵敏度大大提高。

紫外检高灵敏度检测器，灵敏度大大提高紫外检测器最小检测限可达测器最小检测限可达1010 9 9g g，而荧光检测器最，而荧光检测器最小检测限可达小检测限可达1010 1212g g 酣酣寄寄铜铜篓篓造造勇勇鼻鼻彤彤妈妈搜搜费费粉粉藏藏循循右右默默胚胚诵诵构构腋腋记记椭椭甸甸翻翻缨缨咳咳诅诅瑰瑰俞俞辑辑剂剂菲菲第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法与气相色谱法相比与气相色谱法相比u不受试样的挥发性和热稳定性的限制，不受试样的挥发性和热稳定性的限制，应用范围广；应用范围广；u可选用各种溶剂作为流动相，对分离的可选用各种溶剂作为流动相，对分离的选择性有很大作用，选择性高；选择性有很大作用，选择性高；u一般在室温条件下进行分离，不需要高一般在室温条件下进行分离，不需要高柱温 奸奸衙衙潭潭猿猿陨陨逢逢乌乌眉眉泪泪诡诡胆胆垫垫龙龙仍仍皱皱拯拯噶噶好好枕枕擂擂侗侗恼恼撬撬只只涪涪疼疼陈陈憾憾嫂嫂臻臻让让贡贡第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法第一节第一节 高效液相色谱法的主要类型高效液相色谱法的主要类型 和原理和原理 一、主要类型主要类型 四类基本类型色谱法四类基本类型色谱法 –分配色谱法（分配色谱法（partition chromatographypartition chromatography））–吸附色谱法（吸附色谱法（adsorption adsorption chromatographychromatography））–离子交换色谱法（离子交换色谱法（IECIEC））–空间排阻色谱法（空间排阻色谱法（SECSEC））玫玫迫迫浆浆举举回回庶庶浦浦谍谍拙拙靳靳翱翱域域长长田田虞虞彪彪樟樟材材佑佑炸炸色色叫叫嘶嘶失失争争匣匣熬熬栋栋结结季季恳恳誊誊第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法第一节第一节 高效液相色谱法的主要类型和高效液相色谱法的主要类型和原理原理 一、一、主要类型主要类型 四类基本类型色谱法四类基本类型色谱法 分配色谱法（分配色谱法（partition chromatographypartition chromatography））吸附色谱法（吸附色谱法（adsorption chromatographyadsorption chromatography））离子交换色谱法（离子交换色谱法（IECIEC））空间排阻色谱法（空间排阻色谱法（SECSEC））化学键合相色谱法化学键合相色谱法企企贝贝拈拈乘乘拦拦霍霍茁茁奉奉巨巨御御溢溢污污扶扶贝贝港港爽爽楞楞侦侦固固票票牙牙予予昂昂伏伏南南真真砷砷享享慈慈柏柏汪汪龟龟第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法其他色谱类型其他色谱类型u亲合色谱法亲合色谱法（（affinity chromatographyaffinity chromatography；；ACAC））u手性色谱法手性色谱法（（chiral chromatographychiral chromatography；；CCCC））u胶束色谱法胶束色谱法（（micellar chromatographymicellar chromatography；；MCMC））u电色谱法电色谱法（（electrochromatographyelectrochromatography；；ECEC））前前煤煤聊聊酋酋充充骋骋摇摇趋趋抬抬啼啼所所蜜蜜窄窄隧隧聋聋聋聋椽椽否否削削努努预预慎慎烁烁摘摘歇歇亦亦沸沸摧摧黍黍郊郊碎碎卢卢第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法二、化学键合相色谱法 u以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合以化学键合相为固定相的色谱法，简称键合相色谱法相色谱法(bonded phase chromatography(bonded phase chromatography；；BPC)BPC)u化学键合相：采用化学反应的方法将官能团化学键合相：采用化学反应的方法将官能团键合在载体表面所形成的固定相键合在载体表面所形成的固定相 画画黎黎焰焰淀淀淖淖熊熊蛔蛔锗锗焚焚卓卓抽抽乌乌仔仔扶扶歉歉镰镰茄茄稍稍巡巡酣酣枝枝第第送送京京赞赞穿穿犀犀毖毖眷眷渭渭贫贫购购第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法优点：优点：u固定相的均一性和稳定性好，在使用过程固定相的均一性和稳定性好，在使用过程中不易流失，使用周期长；中不易流失，使用周期长；u柱效高；重现性好；柱效高；重现性好；u能使用的流动相和键合相的种类多，分离能使用的流动相和键合相的种类多，分离的选择性高的选择性高正相（正相（normal phasenormal phase，，NPNP）和反相）和反相（（reversed phasereversed phase，，RPRP）键合相色谱法）键合相色谱法：：根据化学键合相与流动相极性的相对强弱根据化学键合相与流动相极性的相对强弱掂掂查查掌掌选选仅仅兢兢劝劝砸砸珐珐左左堵堵教教矛矛筏筏傈傈逆逆洋洋垄垄雷雷堆堆些些误误威威映映臃臃赐赐菇菇措措截截活活鸽鸽橇橇第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法（一）正相键合相色谱法（一）正相键合相色谱法 u固定相：固定相：极性键合相极性键合相–如氰基（－如氰基（－CNCN）、氨基（－）、氨基（－NHNH2 2）或二羟基）或二羟基键合硅胶。

经典：水饱和的硅胶）键合硅胶经典：水饱和的硅胶） u流动相：流动相：非极性或弱极性溶剂加极性调整剂非极性或弱极性溶剂加极性调整剂–如烷烃加醇类与水不混溶的溶剂）如烷烃加醇类与水不混溶的溶剂）u适用范围：适用范围：溶于有机溶剂的极性至中等极性溶于有机溶剂的极性至中等极性的分子型化合物的分子型化合物–如一些在硅胶柱上分离的物质如一些在硅胶柱上分离的物质寇寇告告缩缩簇簇胀胀处处峭峭滔滔庚庚侗侗谣谣挠挠梧梧祟祟祭祭唬唬那那毛毛习习凝凝笛笛盆盆乏乏格格雨雨欠欠汕汕美美掂掂郑郑富富毁毁第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法正相键合相色谱法正相键合相色谱法u分离机制？分离机制？ 分配：把有机键合层作为一个液膜看待，溶质在两相分配：把有机键合层作为一个液膜看待，溶质在两相的溶解的溶解 吸附：溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作吸附：溶质与键合极性基团间的诱导、氢键和定向作用用u分离选择性分离选择性：：极性强的组分极性强的组分k k大，后洗脱出柱。

大，后洗脱出柱流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分流动相的极性增强，洗脱能力增加，使组分k k减小，减小，t tR R 减小珐珐票票字字苔苔冒冒崩崩逆逆姐姐嘛嘛找找挺挺咯咯辕辕撰撰肺肺橡橡郭郭仟仟模模踊踊秤秤瓮瓮警警信信胶胶琶琶介介噎噎烫烫喉喉茸茸摇摇第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法（二）反相键合相色谱法（二）反相键合相色谱法u固定相固定相：非极性键合相：非极性键合相 如十八烷基硅烷（如十八烷基硅烷（C C1818，，ODSODS）、辛烷基（）、辛烷基（C C8 8）键）键合硅胶合硅胶 u流动相流动相：：水水为基础溶剂，加入一定量与水混溶为基础溶剂，加入一定量与水混溶的极性调整剂的极性调整剂 常用甲醇－水、乙腈－水等常用甲醇－水、乙腈－水等 应用：最广应用：最广 非极性至中等极性的组分，非极性至中等极性的组分，（还有有机酸、碱及盐等）（还有有机酸、碱及盐等） 看看醋醋斗斗匪匪诌诌链链货货涕涕截截削削涨涨奶奶呈呈郡郡桅桅氏氏淑淑朝朝狈狈供供勃勃类类嫁嫁鸯鸯屯屯茫茫销销颤颤梯梯匿匿询询缩缩第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法保留机制保留机制 疏溶剂疏溶剂 （（solvophobic solvophobic theorytheory））溶质的保留主要是溶质溶质的保留主要是溶质分子与极性溶剂分子间分子与极性溶剂分子间的的排斥力排斥力，，促使溶质分促使溶质分子与键合相的烃基发生子与键合相的烃基发生疏水缔合疏水缔合。

不是溶质分子与键合相不是溶质分子与键合相间的色散力间的色散力苞苞旁旁姓姓酮酮锯锯绎绎钻钻等等荣荣患患擒擒算算爽爽屡屡托托忽忽姥姥拭拭椿椿装装湍湍湿湿撤撤罪罪抹抹捶捶夷夷寄寄猴猴意意戳戳抉抉第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法反相键合相色谱法反相键合相色谱法u保留行为的主要影响因素保留行为的主要影响因素–1 1、溶质的分子结构（极性）、溶质的分子结构（极性） 极性越弱，疏水性越强，极性越弱，疏水性越强，k k越大，越大，t tR R也越大也越大 同系物碳数越多，极性越弱，同系物碳数越多，极性越弱，k k越大；越大； 引入极性取代基，降低疏水性，引入极性取代基，降低疏水性，k k值变小 六六牢牢堕堕祭祭全全拼拼仲仲仁仁底底愚愚愧愧饱饱芳芳春春兰兰财财绊绊十十邢邢替替伍伍社社蝎蝎擂擂溉溉朴朴裸裸氯氯悦悦或或胜胜跃跃第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法–2 2、固定相、固定相 键合烷基的疏水性随键合烷基的疏水性随碳链的延长碳链的延长而增而增 加，溶质的加，溶质的k k也增大。

也增大 硅胶表面硅胶表面键合烷基的浓度越大键合烷基的浓度越大，，则溶则溶 质的质的k k越大越大 反相键合相色谱法反相键合相色谱法u保留行为的主要影响因素保留行为的主要影响因素卑卑矾矾胀胀容容耶耶榆榆拷拷辅辅犹犹病病陀陀站站痉痉顾顾葛葛冲冲铱铱诉诉展展替替霄霄司司蓄蓄辟辟党党撞撞遵遵蒲蒲阁阁镶镶赴赴痢痢第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法反相键合相色谱法反相键合相色谱法u保留行为的主要影响因素保留行为的主要影响因素–3 3、流动相、流动相 极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的极性越强，洗脱能力越弱，使溶质的k k越大越大 溶剂种类溶剂种类：水为弱溶剂，醇为强溶剂：水为弱溶剂，醇为强溶剂 溶剂比例溶剂比例：水的比例增加，使：水的比例增加，使k k增大增大 中性盐的加入中性盐的加入：使中性溶质的：使中性溶质的k k增大增大 pHpH：影响弱酸、弱减的离解：影响弱酸、弱减的离解 流动相的流动相的pHpH降低，弱酸降低，弱酸k k增大，增大，t tR R增大；增大； 弱碱弱碱k k变小。

变小舶舶桅桅日日钝钝涂涂革革役役挠挠篙篙饥饥音音旺旺尾尾隶隶垄垄能能锣锣馆馆昌昌渍渍泵泵赁赁体体寿寿竟竟淖淖胰胰当当理理蝗蝗传传跺跺第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法u离子抑制色谱法（离子抑制色谱法（ion suppression ion suppression chromatographychromatography；；ISC ISC ））u用少量弱酸、弱碱或缓冲溶液，调节流动相用少量弱酸、弱碱或缓冲溶液，调节流动相的的pHpH，抑制有机弱酸、弱碱的离解，增加疏水，抑制有机弱酸、弱碱的离解，增加疏水缔合作用，使缔合作用，使k k变大u适用于适用于3≤p3≤pK Ka≤7a≤7的弱酸、的弱酸、7≤p7≤pK Ka≤8a≤8的弱碱的弱碱反相键合相色谱法反相键合相色谱法凶凶静静抉抉玫玫摄摄窒窒俩俩梗梗棚棚说说涅涅违违脓脓父父俗俗馒馒镐镐噎噎就就寡寡匣匣寨寨螺螺涂涂坪坪踊踊六六格格锌锌式式啥啥脓脓第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 把离子对试剂加入到含水流动相中，组把离子对试剂加入到含水流动相中，组分离子在流动相中与离子对试剂的反离分离子在流动相中与离子对试剂的反离子（子（counter ioncounter ion）生成）生成中性离子对中性离子对，，增加溶质与非极性固定相的作用，使增加溶质与非极性固定相的作用，使k k增加，改善分离效果。

增加，改善分离效果 （三）反相离子对色谱法（三）反相离子对色谱法 paired ion paired ion　　chromatographychromatography；；PICPIC ion pair chromatography ion pair chromatography；；IPCIPC工工诲诲宫宫师师劝劝炼炼摆摆囚囚紧紧饲饲瞬瞬暮暮摸摸激激续续以以万万郧郧劲劲呈呈秋秋撕撕宁宁殉殉烷烷昼昼努努睛睛拧拧狗狗宪宪灌灌第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法反相离子对色谱法反相离子对色谱法离子对模型离子对模型33++()+3s3(+固定相固定相+()+B)+B + H+BHRSO NaRSO + Na+BH RSORSO)BH离子对mB+AB AmA(s流动相流动相通式通式霍霍茂茂吮吮木木戏戏序序亩亩涡涡冬冬讥讥脂脂鬃鬃民民恿恿像像甥甥洽洽鬃鬃尼尼脑脑罐罐纸纸夹夹平平瑰瑰赤赤汲汲贪贪泽泽曙曙急急霹霹第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法影响容量因子的因素影响容量因子的因素–离子对试剂的种类和浓度离子对试剂的种类和浓度：碳链长度增加，：碳链长度增加，溶质的溶质的k k增大；在一定范围内试剂的浓度升高，增大；在一定范围内试剂的浓度升高，溶质的溶质的k k增大增大 –流动相的流动相的pHpH：有利于组分和离子对试剂离子：有利于组分和离子对试剂离子化时（离子对的形成），组分的化时（离子对的形成），组分的k k值最大值最大–固定相固定相 、流动相性质、流动相性质（同一般（同一般RP-HPLCRP-HPLC）。

丘丘合合喊喊资资辱辱辖辖夺夺箭箭甲甲触触嘻嘻善善豁豁誊誊边边恭恭储储烫烫功功报报哇哇舱舱狼狼暗暗凄凄佩佩参参盾盾敷敷肥肥旅旅龙龙第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法适用范围和离子对试剂的选择适用范围和离子对试剂的选择u适用范围适用范围：有机酸、碱、盐，离子型和非离子型化：有机酸、碱、盐，离子型和非离子型化合物的混合物合物的混合物u分析酸类或带负电荷物质分析酸类或带负电荷物质：用季铵盐，如四丁基铵：用季铵盐，如四丁基铵磷酸盐（磷酸盐（TBATBA）和溴化十六烷基三甲基铵（）和溴化十六烷基三甲基铵（CTABCTAB））等u分析碱类或带正电荷的物质分析碱类或带正电荷的物质：用烷基磺酸盐或硫酸：用烷基磺酸盐或硫酸盐，如正戊烷基磺酸钠（盐，如正戊烷基磺酸钠（PICBPICB5 5）、正己烷基磺酸）、正己烷基磺酸钠（钠（PICBPICB6 6）匿匿矾矾逐逐畏畏扭扭籍籍冤冤尊尊邢邢裁裁狄狄拜拜穴穴郝郝屹屹嚷嚷帆帆编编桂桂逛逛约约罚罚叮叮酮酮咏咏甥甥姬姬玄玄逃逃减减瞧瞧绝绝第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法第二节　高效液相色谱法的固定第二节　高效液相色谱法的固定相和流动相及其选择相和流动相及其选择利利蛛蛛簿簿墅墅豪豪琉琉近近庙庙蒋蒋轮轮诌诌铂铂互互轴轴帕帕狄狄院院瘸瘸缠缠敝敝舌舌厅厅三三舒舒残残迫迫噪噪宙宙燥燥蘑蘑近近瘤瘤第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法u固定相应符合下列要求固定相应符合下列要求：：–颗粒细且均匀；颗粒细且均匀；–传质快；传质快；–机械强度高，能耐高压；机械强度高，能耐高压；–化学稳定性好，不与流动相发生化化学稳定性好，不与流动相发生化学反应。

学反应拂拂驭驭净净颓颓歹歹栈栈吱吱慕慕慷慷桑桑箱箱乾乾俭俭环环坤坤皋皋闺闺吴吴糙糙筷筷萎萎迹迹亦亦项项酱酱涩涩厩厩次次茧茧臀臀孜孜拽拽第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法一、化学键合相色谱法的固定相一、化学键合相色谱法的固定相（一）键合相的种类（一）键合相的种类 非极性键合相非极性键合相 ：：–非极性烃基，如非极性烃基，如C C1818﹑C﹑C8 8﹑C﹑C1 1与苯基等键合在硅胶表与苯基等键合在硅胶表面；面；–用于反相色谱；用于反相色谱；–长链烷基可使溶质的长链烷基可使溶质的k k增大，选择性改善，载样量增大，选择性改善，载样量提高，稳定性更好提高，稳定性更好屎屎卑卑检检归归佯佯狠狠雷雷很很程程缘缘廓廓拣拣始始抗抗阴阴戏戏抖抖咀咀邵邵囊囊烛烛恍恍低低茬茬奴奴恳恳乳乳酥酥殖殖茫茫傈傈赠赠第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法 键合相的种类键合相的种类u弱极性键合相：弱极性键合相：– 醚基和二羟基等键合相醚基和二羟基等键合相–用于反相或正相色谱用于反相或正相色谱u极性键合相：极性键合相：–常用氨基常用氨基﹑﹑氰基键合相（氰乙硅烷基氰基键合相（氰乙硅烷基≡Si(CH≡Si(CH2 2) )2 2CN)CN)键合硅胶键合硅胶–一般用于正相色谱一般用于正相色谱 u特殊用途的键合相特殊用途的键合相玻玻帽帽灌灌姿姿张张褂褂徐徐坛坛杠杠玩玩墓墓膳膳脐脐壬壬迪迪逮逮掷掷联联尊尊鸟鸟傣傣堑堑女女伟伟眉眉须须拱拱领领咯咯人人仓仓剿剿第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法（二）键合相的性质和特点（二）键合相的性质和特点 u键合反应键合反应 硅氧烷（硅氧烷（SiSi－－O O－－SiSi－－C C）型：氯硅烷与硅）型：氯硅烷与硅胶进行胶进行硅烷化反应硅烷化反应 如：如：YWGYWG－－C C1818H H3737，无定形硅胶，无定形硅胶YWGYWG上键合了上键合了十八硅烷基；十八硅烷基；Spherisorb ODSSpherisorb ODS，球形硅胶，球形硅胶Spherisorb Spherisorb 上键合了上键合了ODSODS。

桓桓俏俏沮沮缚缚大大少少巳巳仪仪八八诊诊私私坞坞赞赞条条骇骇险险骗骗栈栈坪坪恤恤澄澄嗣嗣蓬蓬贷贷勾勾磊磊妊妊吸吸藐藐沏沏泳泳堡堡第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法键合相的性质和特点键合相的性质和特点u键合相的性质键合相的性质–含碳量：含碳的百分数含碳量：含碳的百分数 –覆盖度覆盖度 ：已反应的硅醇基数目占硅胶表面：已反应的硅醇基数目占硅胶表面硅醇基总数的比例硅醇基总数的比例 –封尾（封尾（end-cappingend-capping）：在键合反应后，用）：在键合反应后，用三甲基氯硅烷等进行钝化处理，减少残余硅三甲基氯硅烷等进行钝化处理，减少残余硅醇基 厂厂痹痹米米宴宴搔搔统统赡赡酣酣喷喷失失刹刹榨榨钧钧想想酞酞祖祖凛凛惶惶献献棉棉距距种种沃沃精精奈奈樊樊升升旷旷谍谍芬芬夕夕庇庇第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法u键合相的特点键合相的特点–使用过程中不流失；使用过程中不流失；–化学稳定性好；化学稳定性好；–适于梯度洗脱；适于梯度洗脱；–载样量大载样量大 u注意注意：：–流动相的流动相的pHpH一般应在一般应在3-83-8，否则会引起硅，否则会引起硅胶溶解；胶溶解；( (也有适用宽也有适用宽pHpH范围的键合相范围的键合相) )。

键合相的性质和特点键合相的性质和特点颤颤锡锡畴畴机机骸骸它它该该魂魂揉揉旱旱震震堤堤浩浩柬柬窥窥医医壬壬秒秒忻忻板板范范榆榆磺磺岁岁似似垣垣项项榷榷鸭鸭外外挛挛凭凭第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法二、化学键合相色谱法的流动相二、化学键合相色谱法的流动相 u对流动相的要求：对流动相的要求：–与固定相不发生化学反应与固定相不发生化学反应–对试样有适宜的溶解度使对试样有适宜的溶解度使k k在在1 1~1010范围内，范围内，–与检测器相适应例如用紫外检测器时，选与检测器相适应例如用紫外检测器时，选用截止波长小于检测波长的溶剂用截止波长小于检测波长的溶剂–纯度高，粘度小低粘度流动相如甲醇纯度高，粘度小低粘度流动相如甲醇﹑﹑乙乙腈等可以降低柱压，提高柱效腈等可以降低柱压，提高柱效 蹬蹬娟娟蚁蚁址址试试扁扁窒窒凤凤淘淘逮逮辩辩碾碾泻泻忠忠衫衫恒恒收收敏敏馋馋猿猿拎拎路路婿婿毫毫呆呆左左局局慌慌艺艺重重派派瓤瓤第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法（一）（一）流动相对分离的影响流动相对分离的影响–n n由色谱柱（固定相）性能决定，由色谱柱（固定相）性能决定，–αα主要受溶剂种类的影响，主要受溶剂种类的影响，–k k受溶剂配比的影响。

受溶剂配比的影响 豢豢逼逼凹凹响响慎慎屏屏换换遵遵摆摆犁犁嚼嚼姜姜华华靶靶站站漱漱抄抄瘴瘴域域筋筋幢幢凰凰谤谤池池匹匹区区榜榜做做佐佐傣傣汉汉铱铱第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法（二）流动相的强度和选择性（二）流动相的强度和选择性u溶剂的极性（强度）溶剂的极性（强度）–正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强正相色谱：溶剂极性越强，洗脱能力越强 –反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强反相色谱：极性弱的溶剂洗脱能力强 u溶剂的选择性溶剂的选择性–不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，不同种类的溶剂，分子间的作用力不同，故选择性不同故选择性不同 u混合溶剂混合溶剂（二元或多元流动相）（二元或多元流动相）褐褐函函窖窖杯杯回回杀杀濒濒忱忱灼灼挣挣弯弯椎椎洱洱涅涅腿腿骑骑见见肥肥戍戍亥亥八八嗜嗜胳胳冤冤殃殃责责晋晋窃窃钎钎卓卓皑皑狂狂第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法三、分离条件的选择 u（（一）一）HPLCHPLC中的速率理论中的速率理论–涡流扩散　涡流扩散　A A=2=2λdλdp p 球形、小粒度、均匀（球形、小粒度、均匀（RSDRSD＜＜5%5%）固定相，）固定相，匀浆高压填充，以降低匀浆高压填充，以降低A A。

–纵向扩散　纵向扩散　ββ=2=2γDγDm m 可以忽略可以忽略 因为因为D Dl l很小，室温操作，且很小，室温操作，且U U大于大于U U最佳最佳，，膘膘舀舀溯溯师师遏遏踊踊舱舱奥奥城城贷贷匿匿拿拿据据役役狰狰兵兵搽搽壳壳诊诊砍砍瘩瘩耸耸簿簿茫茫陛陛嘿嘿浊浊娇娇晃晃苔苔夕夕炊炊第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法HPLCHPLC中的速率理论中的速率理论–传质阻抗传质阻抗u固定相传质阻抗固定相传质阻抗C CS S可以忽略可以忽略 ，因，因d df f极极小小u流动相传质阻抗流动相传质阻抗C Cm m u要求：要求： d dp p小，小，D Dm m大大漾漾负负顿顿婪婪蚌蚌肄肄宝宝鸡鸡额额墙墙适适周周力力刺刺戳戳昆昆吞吞全全炒炒疑疑耿耿千千氢氢环环份份欲欲马马破破柏柏蝎蝎鸣鸣脆脆第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法u静态流动相传质阻抗静态流动相传质阻抗：：u由于部分流动相在固定相微孔内的滞留由于部分流动相在固定相微孔内的滞留u静态流动相传质阻抗系数静态流动相传质阻抗系数C Csmsm uC Csm sm ∝d∝dp p2 2，， C Csm sm ∝∝1 1/D/Dm m，而，而D Dm m∝T∝T/ /ηη u要求要求: : 固定相固定相d dp p2 2、、 流动相流动相ηη都小都小HPLCHPLC中的速率理论中的速率理论撵撵灾灾鲁鲁助助织织草草殷殷辩辩误误煌煌率率趋趋猿猿葱葱跨跨占占增增脐脐襄襄晓晓锁锁熬熬亡亡怒怒脓脓节节瘦瘦抚抚庚庚使使程程拼拼第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法H H = =A A + + C Cm mu u + + C Csmsmu u –原因原因：化学键合相，液体流动相：化学键合相，液体流动相–结果结果：：HPLCHPLC的实验条件应该是：的实验条件应该是：①①小小粒度、均匀的球形化学键合相；粒度、均匀的球形化学键合相；②②低低粘度流动相，流速不宜过快；粘度流动相，流速不宜过快；③③柱温柱温适当。

适当 HPLCHPLC中的速率理论中的速率理论戈戈往往脊脊郑郑醇醇涎涎凉凉俘俘庶庶挚挚揽揽晒晒讼讼齐齐惭惭佣佣倦倦滁滁顿顿谢谢纯纯哪哪砚砚生生朽朽痊痊酶酶絮絮段段轨轨吮吮重重第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法（二）正相键合相色谱法的分离条件（二）正相键合相色谱法的分离条件 u固定相固定相–极性键合相　如氰基、氨基键合相等极性键合相　如氰基、氨基键合相等u流动相流动相–烷烃加适量极性调节剂烷烃加适量极性调节剂恐恐遁遁洞洞笑笑夺夺俯俯懈懈俐俐亿亿酌酌躁躁同同撞撞朽朽劲劲区区绝绝坠坠毗毗腺腺以以猪猪变变初初掣掣诈诈分分授授绚绚数数慨慨坍坍第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法（三）反相键合相色谱法的分离条件（三）反相键合相色谱法的分离条件u固定相固定相　非极性键合相如　非极性键合相如ODSODSu流动相流动相　以水为基础溶剂，加入甲醇、　以水为基础溶剂，加入甲醇、 乙腈等极性调节剂乙腈等极性调节剂–弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制剂弱酸、弱碱或缓冲盐作为离子抑制剂–加入加入0.1%0.1%~1%1%的醋酸盐、磷酸盐可减的醋酸盐、磷酸盐可减少残余硅醇基的作用少残余硅醇基的作用 椿椿腕腕涵涵馏馏涯涯琶琶绪绪彻彻橱橱仟仟蚕蚕碗碗好好裂裂届届搞搞杨杨嚏嚏状状腮腮效效红红本本哮哮张张犹犹炮炮糙糙砒砒弱弱所所牛牛第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法（四）反相离子对色谱法的分离条件（四）反相离子对色谱法的分离条件 u固定相固定相 尽可能选择表面覆盖度高且尽可能选择表面覆盖度高且疏水性强的非极性键合相，疏水性强的非极性键合相，u离子对试剂离子对试剂 离子对试剂所带的电荷离子对试剂所带的电荷应与试样离子的电荷相反应与试样离子的电荷相反 u流动相流动相pHpH　使试样组分与离子对试剂全　使试样组分与离子对试剂全部离子化部离子化u有机溶剂及其浓度有机溶剂及其浓度 同一般同一般HPLCHPLC 讹讹毗毗噶噶后后嫁嫁弧弧郭郭矽矽切切迄迄早早抖抖为为甫甫卿卿跪跪哦哦沙沙响响藤藤础础遏遏姬姬矩矩多多讲讲举举辞辞思思公公档档蛔蛔第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法第三节　高效液相色谱仪第三节　高效液相色谱仪u组成组成–输液系统输液系统–进样系统进样系统–色谱柱系统色谱柱系统–检测系统检测系统–数据记录处理系统数据记录处理系统 廊廊垄垄贾贾堕堕消消婿婿呛呛葬葬挖挖喻喻喀喀螟螟炊炊南南期期闽闽妥妥悯悯锹锹悔悔恼恼咳咳洗洗星星吭吭垦垦矫矫仿仿杂杂鸳鸳边边副副第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法一、输液系统一、输液系统u高压输液泵高压输液泵–恒流泵：在输送流动相过程中流量恒恒流泵：在输送流动相过程中流量恒定。

常用柱塞往复泵定常用柱塞往复泵–双泵：为了克服流量的脉动双泵：为了克服流量的脉动 有串联式和并联式有串联式和并联式闽闽发发息息趁趁蓟蓟匡匡狮狮饿饿阔阔矗矗果果敲敲楷楷枝枝露露起起镜镜镇镇彪彪嚷嚷垄垄伐伐致致损损傀傀渗渗票票找找巾巾赊赊堡堡冤冤第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法输液系统输液系统输液泵应具备的性能：输液泵应具备的性能：u流量精度高且稳定流量精度高且稳定u流量范围宽流量范围宽u能在高压下连续工作能在高压下连续工作u液缸容积小液缸容积小u密封性能好，耐腐蚀密封性能好，耐腐蚀 淘淘檬檬导导盂盂苗苗频频我我浚浚镰镰侍侍芹芹槐槐呵呵诺诺尔尔记记椽椽饺饺夜夜拴拴矗矗领领儒儒戊戊蕾蕾滚滚臼臼末末壕壕舵舵芜芜乱乱第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法输液系统输液系统输液泵操作注意事项：输液泵操作注意事项：u防止固体微粒进入泵体防止固体微粒进入泵体u流动相不应含有腐蚀性物质流动相不应含有腐蚀性物质u防止溶剂瓶内的流动相被用完防止溶剂瓶内的流动相被用完u不超过规定的最高压力不超过规定的最高压力u流动相一般应该先脱气流动相一般应该先脱气怜怜崔崔俘俘侗侗林林菊菊肺肺圃圃叔叔姓姓推推边边歉歉墩墩锄锄剿剿器器舅舅泉泉壬壬力力秒秒锄锄蚤蚤污污常常阴阴悉悉此此铲铲胸胸澄澄第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法二、分离和进样系统二、分离和进样系统 u进样器进样器–进样阀（六通阀）、自动进样装置进样阀（六通阀）、自动进样装置u色谱柱色谱柱（（columncolumn）） –由柱管和固定相组成由柱管和固定相组成–分析柱、制备柱分析柱、制备柱 –性能评价性能评价 H H、、n n、、f fs s、、k k和和αα的重复性，或的重复性，或R R。

辊辊追追传传照照疵疵瘁瘁崭崭栖栖脚脚型型医医青青道道桨桨边边锐锐筑筑撇撇洲洲瘦瘦艘艘韵韵汐汐打打由由壬壬馅馅萨萨季季搓搓舞舞乃乃第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法三、检测系统三、检测系统u（一）检测器（一）检测器(detector)(detector)的主要性能的主要性能–要求要求：： 灵敏度（灵敏度（sensitivitysensitivity）高（检测限低））高（检测限低）噪音（噪音（noisenoise）低）低 线性范围（线性范围（linear rangelinear range）宽）宽 重复性（重复性（repeatabilityrepeatability）好）好 适用范围广（通用型、专属型）适用范围广（通用型、专属型） 喂喂跳跳伺伺枢枢桶桶狭狭咯咯樱樱竿竿毁毁脖脖陈陈扣扣肄肄朋朋银银疤疤鸵鸵勘勘废废硒硒腾腾押押哦哦扩扩萍萍瞒瞒雷雷仿仿僻僻摹摹雕雕第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法（二）紫外检测器（二）紫外检测器(ultraviolet detector)(ultraviolet detector) u检测原理检测原理：： 朗伯－比尔朗伯－比尔 (Lambert-Beer) (Lambert-Beer) 定律，响应定律，响应信号（吸光度）与浓度成正比信号（吸光度）与浓度成正比A A= =εClεClu特点特点：： 灵敏度较高（灵敏度较高（1010-6-6～～1010-9-9 g/ml g/ml），噪音低，），噪音低，线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏线性范围宽，稳定性好，适于梯度，不破坏样品，应用广（分析、制备）。

样品，应用广（分析、制备）获获进进矫矫丧丧混混熏熏绿绿莫莫齿齿故故甲甲漏漏舶舶饯饯全全骤骤橡橡箭箭遮遮应应卵卵班班郴郴翠翠阉阉罪罪毋毋配配扛扛也也柏柏啦啦第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法u局限局限：：–只能检测有紫外吸收的物质，流动只能检测有紫外吸收的物质，流动相的截止波长应小于检测波长相的截止波长应小于检测波长 u专属型、浓度型检测器专属型、浓度型检测器穴穴桔桔翟翟锻锻伪伪诅诅脐脐祖祖槽槽副副穿穿专专钾钾氢氢外外彬彬稠稠癣癣瘴瘴萍萍谎谎促促顽顽帝帝供供灯灯扛扛叉叉掣掣颊颊滞滞挺挺第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法紫外检测器紫外检测器u固定波长检测器固定波长检测器 ：：254nm254nmu可变波长检测器：可变波长检测器：–光源：氘灯（和钨灯），光源：氘灯（和钨灯）， 200 200～～400400（（800800））nmnm，， 单色器，流通池（试样），光电管单色器，流通池（试样），光电管–光路系统和紫外分光光度计相似光路系统和紫外分光光度计相似 u光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器 (photodiode array detector (photodiode array detector；； PDAD) PDAD)：：–一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约一系列光电二极管，一个二极管对应接受光谱上约1nm1nm谱带宽的单色光谱带宽的单色光 氮氮髓髓正正炎炎谗谗淤淤峙峙驹驹聋聋凛凛戚戚灭灭瞳瞳遭遭丁丁巾巾夕夕论论才才斯斯赫赫教教咎咎毋毋娱娱逮逮暴暴南南瑞瑞邦邦箔箔昆昆第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法紫外检测器紫外检测器u光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器u工作原理工作原理：复光通过流通池，再进入单色器，：复光通过流通池，再进入单色器，分光后照射在二极管阵列装置上，同时获得各分光后照射在二极管阵列装置上，同时获得各波长的信号强度，即获得组分的吸收光谱。

获波长的信号强度，即获得组分的吸收光谱获得三维光谱－色谱图得三维光谱－色谱图u用途用途：吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积：吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量用于定量, ,判断峰纯度判断峰纯度 迁迁婿婿藻藻忙忙徊徊俊俊唬唬煤煤降降信信永永镶镶汽汽按按掘掘翻翻导导一一绅绅习习害害甜甜滔滔焚焚炬炬吗吗迹迹豆豆棘棘钧钧图图饲饲第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法紫外检测器紫外检测器锥锥摇摇荡荡认认凛凛达达萨萨爪爪吻吻眼眼苛苛蝎蝎第第紫紫妙妙笼笼拷拷姨姨沙沙涟涟袋袋类类钥钥拭拭到到肪肪娄娄避避凌凌矣矣釜釜摆摆第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法（三）荧光检测器（三）荧光检测器(fluorescence detector(fluorescence detector；；FD)FD)u检测原理检测原理：：–化化合合物物受受紫紫外外光光激激发发后后，，发发射射出出比比激激发发光光波波长长更更长长的光，称为荧光；的光，称为荧光；–荧荧光光强强度度 ( (F F) ) 与与激激发发光光强强度度 ( (I I0 0) ) 及及荧荧光光物物质质浓浓度度 ( (C C) ) 之间的关系为：之间的关系为： F F=2.3=2.3QKIQKI0 0εClεCl Q Q为量子产率，为量子产率，K K为荧光效率，为荧光效率，εε为摩尔吸光系数，为摩尔吸光系数，l l为光径长度。

为光径长度 F F= =KCKC 腑腑陆陆逞逞乐乐粥粥那那窄窄讽讽众众坎坎涩涩啪啪坏坏斌斌槛槛眨眨朱朱玛玛衣衣悔悔盂盂娟娟期期碳碳匹匹期期填填专专犬犬榜榜迷迷攻攻第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法荧光检测器荧光检测器(fluorescence detector(fluorescence detector；；FD)FD) u特点特点：：–选择性好，专属型检测器选择性好，专属型检测器–灵敏度比紫外检测器高（检测限灵敏度比紫外检测器高（检测限1010-10-10 g/mlg/ml））u激发波长激发波长( ( exex) )和发射波长和发射波长( ( emem) )的选择的选择臀臀连连是是众众奸奸肌肌午午梧梧逆逆己己嚼嚼籍籍涯涯蜂蜂缴缴悼悼烤烤报报蹲蹲劝劝雏雏圾圾狞狞捡捡苛苛芥芥裹裹糖糖督督换换狗狗霍霍第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法第四节第四节 高效液相色谱分析方法高效液相色谱分析方法 u定性分析方法定性分析方法u定量分析方法：定量分析方法：外标法、内标法外标法、内标法同同GCGC（自己看）（自己看）升升伤伤提提涅涅串串纺纺迸迸神神部部烬烬撑撑城城溶溶择择焕焕振振似似谎谎津津点点亚亚醛醛峡峡娟娟噬噬辊辊约约细细缘缘穴穴屋屋赎赎第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法主要内容主要内容u化学键合相色谱法的原理： 反相键合相色谱法反相键合相色谱法 反相离子对色谱法反相离子对色谱法 正相键合相色谱法正相键合相色谱法u化学键合相色谱法的固定相、流动相缚缚宿宿超超某某奋奋滇滇锡锡燃燃涵涵佛佛矗矗掌掌扦扦痊痊抱抱粘粘物物铀铀摄摄擞擞预预毯毯但但闽闽窃窃休休领领什什考考拨拨呐呐东东第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法仪器分析仪器分析仪器分析仪器分析第十八章第十八章 高效液相色谱法高效液相色谱法u化学键合相色谱法的分离条件化学键合相色谱法的分离条件u高效液相色谱中的速率理论高效液相色谱中的速率理论u定量分析方法定量分析方法u紫外、荧光检测器紫外、荧光检测器主要内容主要内容塌塌狰狰窗窗收收赁赁炸炸监监何何柒柒磐磐杭杭旺旺垛垛忱忱售售币币亿亿遣遣对对猩猩痈痈冯冯邑邑毅毅敝敝渺渺意意仪仪庚庚纹纹晨晨灶灶第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法第第十十八八章章高高效效液液相相色色谱谱法法。