Q24焦磷酸测序操作流程.docx

1、 开机前检査：(1) 检查过滤探针：确保过滤探针不发生堵塞，否则更换2) 检查废液桶：必要时清除废液3) 检查卡夹(Cartridge)：确保Cartridge已经在上次使用过后检查过未发生堵塞，并且 已经晾干，否则更换4) 检查真空系统：确保真空系统的压力正常2、 开机程序：打开机器电源T |等待约1分钟进入主界面T插入带有程序的〒盘3、 标本检测程序将 PCR 产物加入至U预先准备好的 2ul Beads及 40ul Binding Buffer混合液中 f 放置在 平板振荡仪上 1400rpm 混合 5T0 分钟 f 准备测序引物与 Annealing Buffer 混合液 25ul f 根据实验设计分配至U对应的24孑L板孑L位上 f 准备 work station上的各种缓冲液 f 将 PCR 产物混合液转移至U work station 上 f 在 work station 上进行 DNA 链的分离 f 将 24孑L板放置在 80 度上温浴 2min 后在室温放置 5 分钟 f 根据 pre run information力口入 相应体积的酶、底物和dNTP 至试剂仓(Cartridge) 中 f 将试剂仓放进 Q24 设备中 f 将 24孔板放进Q24设备中|一从屏幕上选择需要运行的程度f |再次确认后设备开始运行f 结 束后数据自动保存在U盘上|一 |将U盘上数据拷贝回电脑上进行分析4、关机程序 4.1关闭真空工作站打开真空开关，将真空抽滤工具放置在高纯水中清洗约10秒f 将真空抽滤工具以垂直90度竖值约10秒f关闭真空抽滤工具的开关f放置在Park位置上f关闭真空泵电源f清洗work station上的各缓冲液槽后晾干 4.2 关闭 PyroMark Q24选择屏幕上的Shutdown选项f 确认后等待屏幕上显示“It is now safe to turn off theinstrument "关闭仪器电源f丢弃测序24孔板，取出仪器内的试剂仓用高纯水清洗试剂仓，确认无堵塞后室温晾干或37度烘干。