高中生物选修三《现代生物科技专题》经典知识点汇总.doc

高中生物记忆材料《现代生物科技专题》经典知识点班级：姓名：诸城繁华中学★考点1、〔Ⅰ基因工程的诞生——基因工程的概念基因工程是指按照人们的愿望.进行严格的设计.通过体外DNA重组和转基因技术.赋予生物以新的遗传特性.创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品基因工程是在DNA分子水平上进行设计和施工的.又叫做DNA重组技术★考点2、〔Ⅱ基因工程的原理及技术原理：基因重组技术：〔一基因工程的基本工具1."分子手术刀"——限制性核酸内切酶〔限制酶〔1来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的〔2功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列.并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开.因此具有专一性〔3结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端2."分子缝合针"——DNA连接酶<1>两种DNA连接酶〔E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶的比较：①相同点：都缝合磷酸二酯键②区别：E·coliDNA连接酶来源于T4噬菌体.只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来；而T4DNA连接酶能缝合两种末端.但连接平末端的之间的效率较低<2>与DNA聚合酶作用的异同:DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端.形成磷酸二酯键。

DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端.形成磷酸二酯键3."分子运输车"——载体〔1载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存②具有一至多个限制酶切点.供外源DNA片段插入③具有标记基因.供重组DNA的鉴定和选择〔2最常用的载体是质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外.并具有自我复制能力的双链环状DNA分子〔3其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒<二>基因工程的基本操作程序第一步：目的基因的获取1.目的基因是指： 编码蛋白质的结构基因 2.原核基因采取直接分离获得.真核基因是人工合成直接分离基因最常用的方法是"鸟枪法".又叫"散弹射击法"具体做法是：用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段.将这些片段分别载入运载体.然后通过运载体分别转入不同的受体细胞.让供体细胞所提供的DNA<外源DNA>的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制<在遗传学中叫做扩增>.从中找出含有目的基因的细胞.再用一定的方法把带有目的基因的DNA片段分离出来如许多抗虫、抗病毒的基因都可以用上述方法获得用"鸟枪法"获取目的基因的缺点是工作量大.具有一定的盲目性人工合成目的基因的常用方法有反转录法〔以目的基因转录成的信使RNA为模板.反转录成互补的单链DNA.然后在酶的作用下合成双链DNA.从而获得所需要的基因和化学合成法〔根据已知的蛋白质的氨基酸序列.推测出相应的信使RNA序列.然后按照碱基互补配对原则.推测出它的结构基因的核苷酸序列.再通过化学的方法.以单核苷酸为原料合成目的基因。

如人的血红蛋白基因、胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得3.PCR技术扩增目的基因〔1原理：DNA双链复制〔2过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链；第二步：冷却到55～60℃.引物结合到互补DNA链；第三步：加热至70～75℃.热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成第二步：基因表达载体的构建——是基因工程的核心1.目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在.并且可以遗传至下一代.使目的基因能够表达和发挥作用2.组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因〔1启动子：是一段有特殊结构的DNA片段.位于基因的首端.是RNA聚合酶识别和结合的部位.能驱动基因转录出mRNA.最终获得所需的蛋白质〔2终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 .位于基因的尾端〔3标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因.从而将含有目的基因的细胞筛选出来常用的标记基因是抗生素基因第三步：将目的基因导入受体细胞_1.转化的概念：是目的基因进入受体细胞内.并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程2.常用的转化方法：将目的基因导入植物细胞：采用最多的方法是农杆菌转化法.其次还有 基因枪法和花粉管通道法等将目的基因导入动物细胞：最常用的方法是显微注射技术。

此方法的受体细胞多是受精卵将目的基因导入微生物细胞：最常用的受体细胞是大肠杆菌3.重组细胞导入受体细胞后.筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是标记基因是否表达第四步：目的基因的检测和表达——是检查基因工程是否成功的一步1.首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因.方法是采用 DNA分子杂交技术2.其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA.方法是采用用标记的目的基因作探针与mRNA杂交3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质.方法是从转基因生物中提取蛋白质.用相应的 抗体进行抗原－抗体杂交4.有时还需进行 个体生物学水平的鉴定如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状如大肠杆菌的某种质粒具有青霉素抗性基因.当这种质粒与外源DNA组合在一起形成重组质粒.并被转入受体细胞后.就可以根据受体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了目的基因重组的DNA分子进入受体细胞后.受体细胞必须表现出特定的性状.才能说明目的基因完成了表达过程如科学家最初做抗虫棉试验时.虽然已经检测出棉的植株中含有抗虫的基因.但让棉铃虫食用棉的叶片时.棉铃虫并没有被杀死.这说明抗虫基因还不能在高等植物中表达科学家在研究的基础上.又一次对棉植株中的抗虫基因进行了修饰.然后再让棉铃虫食用棉的叶片.结果食用的第二天棉铃虫就中毒死亡了。

这说明抗虫基因在棉植株中得到了表达例如：用基因工程的方法.使大肠杆菌生产出鼠的β-珠蛋白〔1从小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的编码序列〔cDNA注：鼠是真核生物因此用人工合成的方法来获得目的基因〔2将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子.另外加上抗四环素基因〔为了在受体细胞中筛选出含有目的基因的细胞.构建成一个表达载体〔3将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中.然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌如果表达载体未进入大肠杆菌中.大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如果培养基上长出大肠杆菌菌落.则表明β-珠蛋白基因已进入其中〔4培养进入了β-珠蛋白基因的大肠杆菌.收集菌体.破碎后从中提取β-珠蛋白★考点3、〔Ⅱ基因工程的应用1.植物基因工程：抗虫、抗病、抗逆转基因植物.利用转基因改良植物的品质2.动物基因工程：提高动物生长速度、改善畜产品品质、用转基因动物生产药物3.基因治疗：把正常的外源基因导入病人体内.使该基因表达产物发挥作用〔从根本上治疗遗传病.不能治疗传染病注：如果工程菌为原核生物.因其没有内质网、高尔基体.所以不能生产糖蛋白类物质★考点4、〔Ⅰ蛋白质工程〔1蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础.通过基因修饰或基因合成.对现有蛋白质进行改造.或制造一种新的蛋白质.以满足人类的生产和生活的需求。

〔基因工程在原则上只能生产自然界已存在的蛋白质〔2蛋白质工程崛起的缘由：基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质〔3蛋白质工程的基本原理：它可以根据人的需求来设计蛋白质的结构.又称为第二代的基因工程基本途径：从预期的蛋白质功能出发.设计预期的蛋白质结构.推测应有的氨基酸序列.找到相对应的脱氧核苷酸序列〔基因以上是蛋白质工程特有的途径；以下按照基因工程的一般步骤进行〔注意：目的基因只能用人工合成的方法设计中的困难：如何推测非编码区以及内含子的脱氧核苷酸序列★考点5、〔Ⅰ植物的组织培养1、克隆的含义：克隆〔clone是指通过无性生殖而产生的遗传上均一的生物群.即具有完全相同的遗传组成的一群细胞或者生物的个体现在则指个体、细胞、基因等不同水平上的无性增殖物〔1个体水平：在植物的无性增殖中.植物的发芽、插条等由同一个体通过无性生殖而增长的个体群均被视为克隆采用组织培养方法可使植物细胞培养发育成完全的个体〔愈伤组织.采用这种方法得到的具有相同基因型的个体群.也被称为克隆；在动物的无性增殖中.典型的例子是采用核移植实验方法.把分化细胞的核移植到一个事先去核的蛙卵中.让其发育并得到克隆蛙克隆动物具有均一遗传性质.在研究环境条件对发育、分化的影响以及药物的检测方面都是重要的实验材料。

〔2细胞水平：由一个细胞经过有丝分裂生成的细胞群叫克隆但如果培养细胞发生转化.则很容易引起染色体变异〔3基因水平：利用基因重组操作技术.使特定的基因与载体结合.在细菌等宿主中进行增殖.有可能得到均匀的基因群克隆是重组DNA技术的核心部分事实上.克隆技术现已被人们用来通过营养方式繁殖病毒等微生物和植物的纯种.从而保证了这些生物基因组的准确连续性细胞生物的克隆只需要营养培养基.而基因的克隆则需要某种载体复制子、特定的寄主细胞和营养培养基2、植物细胞全能性的含义：生物的任何一个细胞都具有发育成完整植株的潜力原因：细胞中含有本物种全部的遗传信息植物细胞全能性是植物组织培养的理论基础3、植物组织培养的概念：从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞.原生质体等.通过无菌操作.在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术4、植物组织培养过程：取外植体〔离体的器官、组织、细胞.注意要消毒〔可用次氯酸钠、无菌水处理.在超净工作台上操作；将外植体接种到培养基.并封口〔培养基成分：有机物、生长素、细胞分裂素、水、矿质元素、琼脂；通过脱分化.形成愈伤组织〔挑选出没有被污染的；进行转接到分化培养基上.进行再分化〔生长素浓度较高利于生根.细胞分裂素浓度较高利于生芽；一段时间后诱导出试管苗；移栽到大田。

注意：整个过程要进行无菌操作愈伤组织细胞的特点：排列疏松无规则.是一种高度液泡化的薄壁细胞脱分化：由高度分化的植物器官、组织或细胞产生愈伤组织的过程再分化：产生的愈伤组织继续进行培养.又可以重新分化成根、芽等器官5、植物组织培养的实际应用：微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物的工厂化生产〔1 植物繁殖微型繁殖：可以高效快速地实现种苗的大量繁殖作物脱毒：采用茎尖组织培养来除去病毒〔因为植物分生区附近的病毒极少或没有人工种子：以植物组织培养得到的胚状体、不定芽、顶芽和腋芽等为材料.经人工薄膜包装得到的种子优点：完全保持优良品种的遗传特性.不受季节的限制；方便储藏和运输〔2作物新品种培育单倍体育种：a过程：植株〔AaBb通过减数分裂得到花粉〔AB、Ab、aB、ab四种类型；对花粉进行花药离体培养〔技术是植物组织培养；得到单倍体植株；对其幼苗时期进行秋水仙素处理；得到了正常的纯合二倍体植株〔AABB、AAbb、aaBB、aabb四种类型b 优点：明显缩短育种年限C 突变体利用：在组织培养中会出现突变体.通过从有用的突变体中选育出新品种〔如筛选抗病、抗盐、含高蛋白的突变体〔3细胞产物的生产：通过能够产生对人们有利的产物的细胞进行组织培养.从而让它们能够产生大量的细胞产物。

★考点6、〔Ⅰ动物的细胞培养与体细胞克隆1、动物的细胞培养〔1动物细胞培养概念：动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织.将它分散成单个细胞.然后放在适宜的培养基中.让这些细胞生长和繁殖〔2动物细胞培养的流程：取动物组织块〔动物胚胎或幼龄动物的器官或组织→剪碎→用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞→制成细胞悬液〔含有糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素、血清、血浆；注意与植物培养基成分的区别→转入培养瓶中进行原代培养。