实验7维生素类药物鉴别三点校正法测定维生素A含量(学生).docx

ch2SbCl5实验7 维生素类药物鉴别、三点校正法测定维生素A的含量第一部分维生素类药物鉴别一、 目的要求：掌握维生素类药物的鉴别反应的原理及其实验操作二、 实验原理（一）、维生素A的鉴别原理：结构为含共轨多烯醇或酯结构，维生素A和氯化锂（III）中存在的亲电试剂氯化高篠（V）作用形成不稳 定的蓝色碳正离子0II0——C——R（二）、维生素B|的鉴别原理：维生素B1在碱性溶液中,可被铁氧化钾氧化成硫色素硫色素溶于止丁醇中,显蓝色荧光SNaCH3（（））-2HCH2CHoOH（三）、维生素c的鉴别原理：维生素C分子中有二烯醇基，具有强还原性，可被硝酸银氧化为去盘抗坏血酸，同吋产生黑色银沉淀AgNO3（四）、维生素E的鉴别原理：维生素E （Vitamin E）是一类与生殖功能有关的维生素，化学结构均为苯并二氢毗喃衍生物，结构中有酚 轻基，故亦称生育酚药用的是其醋酸酯结构维生素E在硝酸酸性条件下，水解生成生育酚，生育酚被硝酸 氧化为邻醍结构的生育红而显橙红色五）、维生素D的鉴别原理：维生素D （Vitamin D）又叫骨化醇或麦角骨化醇，是一类抗佝偻病维生素的总称，化学结构均为苗醇的 衍生物，遇醋酹浓硫酸显色反应。

三、 操作步骤1. 维生素A 1滴一溶于10滴氯仿中一加三氯化锐饱和氯仿溶液一即显蓝色、逐渐变成紫红色（紫红基本看 不到）2. 取维生素B|约5mg （绿豆大小）一溶于2.5mLNaOH试液中一加铁氧化钾试液0.5mLf 正丁醇3mLf 强力振摇2min,放置分层一醇层即显强烈的蓝色荧光一加盐酸试液，荧光即消失一加NaOH试液后，荧光 又出现3. 収维生素C溶液5滴一加AgNO3试液0.5mL-＞即发生银的黑色沉淀4. 取维生素E1滴-＞ 加无水乙醇10 mL溶解一加硝酸2mL-＞摇匀，75C水浴加热15min-＞溶液显橙红色5. 取维生素D 1滴一加氯仿5mL溶解一加醋酊0.3mLf 加浓硫酸0.1 mL-振摇一显黄色一渐变为红色一迅即变为紫色一最后呈绿色四、 现象记录：如实记录鉴别实验中的现象第二部分三点校正•紫外分光光度法测定维生素A的含量一、目的要求：掌握紫外分光光度法测定维生素A含量的基本原理与操作二、原理:维生素A分子中具有多烯共轨体系得结构在325〜328nm间有选择性的吸收，故可用紫外分光光度法测定含 量由于维生素A中加入植物油和混有其他杂质，所测得的吸收度不是维生素A独有的吸收，非维生素A物质 的无关吸收所引起的误差应用校正公式校正，才能得到正确结果。

本法是在三个波长岀测得吸收度，根据校正公式计算吸收度A校正值后，再计算含量，故本法称为“三点 校正法“，其原理主要基于以下两点：（1） 杂质的吸收在310-340nm的波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度变小即A杂二ax+b（2） 物质对光吸收呈加和性即在某一样品的吸收曲线上，各波长的吸收度是维生素A与杂质吸收度的代数和，而吸收曲线也是它们吸收曲线的龛加即A总二人纯+A杂三、 操作步骤：精密吸取维生素A供试液l.OmL-置10mL容量瓶中一加环己烷定容到刻度一摇匀一以环己烷为空白， 分别在300、316、328、340和360nm处测定吸收度每人做两份样品，即用两个容量瓶稀释供试液）四、 数据记录五、 计算：1、 计算各波长下的吸收度与328nm波长下的吸收度比值波长（nm） 300 316 328 340 360吸收度比值 0.555 0.907 1.000 0.811 0.2992、 如果最大吸收波长在326nm-329nm之间，且所测得各波长吸收度比值不超过以上规定的0.02,直接用328nm 波长出测得的吸收度A328求得打為o3、 如所测得各波长吸收度比值超过以上规定土0.02,则按下式求出校正后的吸收度，再判断：A328= 3.52（2 A328 -A316 -A340）（1） 若冬呼仝S<100%所得的数值在3%以内，则仍然直接用A328求得ESn ；“3284 -A 0（2） 若 ~~ X100%所得的数值在一15〜-3%Z间，贝懦用A328吨 求得耳為;A —A（3） 若 一 XI00%所得的数值小于.15%或大于+3%,或者吸收峰波长不在326〜329nm之间，则不能“328用本法进行测定，必须采用第二法（皂化法）进行含量测定。

E驚:由公式A= E驚・C・L得耳爲二右即可求得耳為值I III•15% -3% 0 3%5、求效价（IU/g ）效价系指每克供试品中所含维生素A的国际单位数（lU/g ）o 1900为维生素A醋酸酯在环 己烷溶液中测定时的换算因数1 0/每lg供试品中维生素A的单位数（IU/g ） = E\cm x 1900六、结论与讨论。