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谈UPLC-MS/MS 法测定抗风湿中成药中非法添加8 种抗风湿性化学成分=“news_bd”> 借纯中药之名添加化学药物是近年来一些不法分子牟取利益常采用的手段，而患者在服用这些所谓的天然无副作用的中成药来治疗风湿性及类风湿性炎症的同时，不知不觉服用了添加的化学成分，长期服用这些违法添加的抗风湿中成药可能会引起严重的后果，如导致消化道溃疡、肝肾毒性和血液系统问题等已有很多报道讨论了中成药和保健食品中非法添加化学成分的测定液相色谱-串联质谱法既能定性分析能力，又能准确地定量分析，是这类非法添加化学药物检测有效方法之一本实验采用超高效液相色谱-串联四极杆质谱(UPLC-MS/MS)法检测抗风湿中成药中非法添加的8 种抗风湿性化学成分 1 仪器与材料 美国 Waters 公司超高效液相色谱-串联四级杆质谱联用仪，配Acquity UPLC 超高效液相色谱仪、Quattro Premier 串联四级杆质谱仪、电喷雾离子化源(ESI)、Masslynx 4.1 数据处理系统共测定22 批次抗风湿性中成药，均为杭州市食品药品监督管理局市场抽取样品对照品氢化可的松(批号100152-200206)、地塞米松(批号100129-201105)、醋酸泼尼松(批号100012-200706)、保泰松(批号100481-200601)、对乙酰氨基酚(批号100018-200408)、萘普生(批号100198-0002)、吡罗昔康(批号100177-200603)与甲氧苄啶(批号100031-200304)，均购自中国食品药品检定研究院。
甲醇为分析纯，乙腈为色谱纯 2 方法与结果 2.1 UPLC 色谱条件 色谱柱为BEH-C18 柱(100 mm×2.1 mm，1.7μm);流动相为0.02 mol/L 乙酸铵水溶液-乙腈，梯度洗脱：0～4 min，20%乙腈;4～4.5 min，20%～60%乙腈;4.5～5 min，60%～20%乙腈;柱温40 ℃;体积流量0.3 mL/min，进样量2 μL2.2 质谱条件毛细管电压3.0 kV;脱溶剂气(N2)流量550L/h;锥孔反吹气流量50 L/h;离子源温度120 ℃;脱溶剂气温度300 ℃;采用多反应监测(multiplereactionmonitoring，MRM)模式检测;离子模式：ES+8 种抗风湿性化学成分的其他质谱分析参数见表1，8 种抗风湿性化学成分的MRM 总离子流图 2.3 对照品溶液的制备 分别精密称取8 种抗风湿化学成分对照品约25mg，置25 mL 量瓶中，加甲醇配制成约1 mg/mL的对照品储备溶液分别精密吸取上述对照品储备溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL 于10 mL 量瓶中，加流动相稀释定容，作为对照品系列溶液。
2.4 供试品溶液的制备 胶囊剂取20 粒样品内容物，片剂和丸剂取20粒研细后，混匀，精密称取1 g，置25 mL 量瓶中，加甲醇约15 mL，超声30 min(100 W，56 kHz)，冷却，加流动相稀释至刻度用0.2 μm 滤膜滤过，备用 2.5 线性关系、检测限和定量限 取已制备的对照品系列溶液，分别进样2 μL，以定量监测离子对的离子流中谱峰峰面积(Y)为纵坐标，对照品质量浓度(X，μg/mL)为横坐标进行线性关系考察，结果见表2取 1 号样品(未检出8 种非法添加成分)1 g，加入适当稀释的混合对照品溶液，按2.4项方法制备供试品溶液，得信噪比为3 和10 时分别为8种抗风湿非法添加成分的检测限与定量限 2.6 重复性试验 取 1 号样品，加入适当稀释的混合对照品溶液，使样品中8 种对照品最终质量分数为10 mg/g，按供试品溶液制备方法重复制备6 份，测定这8 种成分的量，重复性结果 2.7 日内精密度和日间精密度 以20 μg/mL的8 种抗风湿性化学成分的混合对照品溶液1 日内5 次重复进样峰面积的RSD作为日内精密度，以同样浓度的8 种混合对照品溶液3 d重复进样(每天重复进样3 次)峰面积的RSD 作为日间精密度，考察方法的稳定性。
2.8 方法回收率试验 取 1 号样品，每份称取样品1 g，分别加入适量的混合对照品溶液，使供试品溶液加样浓度分别为低、中、高3 种约10、20、50 μg/mL，平行3 份，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，检测其量，计算回收率 2.9 样品定性检测 本方法采用多反应检测扫描(MRM)模式检测， 所示质谱分析方法，每个成分都有多个(地塞米松有3 个，其余成分2 个)检测通道，每1 通道对应1 个监测离子对样品检测时，若某一成分对应的多个通道中均出现与对照品保留时间一致的谱峰，并且这几个子离子的相对丰度与对照品一致，则可判定样品中检出该成分部分样品定性结果见表1，表中各成分的丰度数据均符合欧盟2002/657/EC 法规[9]关于定性判断时相对离子丰度的允许偏差范围，可判断这些子离子的相对丰度一致按上述法规的分值法(质谱分析方法鉴定点数)计算，上述定性过程已达到4 分、大于3 分的要求，可判断样品2 中检出醋酸泼尼松、吡罗昔康;样品4 检出醋酸泼尼松;样品6 中检出醋酸泼尼松、吡罗昔康、萘普生;样品7 中检出双氯芬酸钠、对乙酰氨基酚、吡罗昔康、萘普生、保泰松 2.10 样品定量检测 根据定量监测离子对的离子流图中谱峰峰面积外标法计算样品中8 种抗风湿性化学成分的量。
定量结果 3 讨论 3.1 定性与定量检测时注意进样针污染 由于串联四级杆质谱灵敏度高，在实践中发现定性与定量检测时，特别是进样浓度高时，会引起进样针的残留，进而引起假阳性，所以在2 个样品之间，特别是对照品与样品进样之间，最好进一针溶剂空白，确保进样系统没有残留时，再进下一个样品 3.2 方法的优缺点 本实验建立了抗风湿中成药中非法添加8 种化学成分的定性定量检测方法，简捷快速，灵敏度高，抗干扰能力强，可满足实际样品检测的需要由于采用了UPLC-MS/MS 作为分离手段，分析速度快，只需5 min 即可完成检测，在实际应用中，特别涉及公安部门需要尽快报告结果的检测时，效果很好采用串联四极杆的MRM 模式检测，可同时进行定性定量分析，利用化学成分的2 个子离子信息，已符合定性检测的判定要求。
