昆虫基因组DNA的提取.docx

昆虫基因组DNA提取方法一 CTAB法1. 将95%酒精浸泡过的标本取出，用吸水纸吸去标本表面的乙醇，用IXTE Buffer 浸泡两次，每次 20min；2. 解剖取个体胸部肌肉组织约0.02g，将组织转入1.5mL离心管加入ImL 液氮使其迅速冻结, 用玻璃棒迅速有力地将团状组织研磨成细粉末3. 然后加入600》L预热至60°C的2%CTAB提取缓冲液（2% CTAB,0.1mol/L Tris・C1 pH8.0, 0.02 mol/L EDTA, 1.4 mol/L NaCl）, 20mg/mLProK 2.5 M L（终浓度100mg/mL）,和0 -巯基乙醇溶液1.0》L,轻轻混匀，60C下恒温水 浴2.0-3.0 hr,不时加以轻轻混匀4. 水浴后取出，等体积氯仿/异戊醇（24： 1）混合液混匀，然后7,000 rpm 离心10min,取其上层清液，量体积；重复一次5. 在上层清液中加入2倍体积冷冻的无水乙醇于一20C沉降2小时（或1 倍体积异戊醇于一20C沉降1hr）4°C、10,000 rpm下离心15min,取沉淀 小心 弃上清6. 用500m L 70%预冷的乙醇洗涤沉淀，10,000 rpm下离心5min,弃上清; 重复一次。

7. 室温晾干或抽真空干燥；用40m L TE Buffer重溶8. 于基因组DNA中加入终浓度为50ug/mL的RNase （每次使用前90C灭 活 10min）,于 37C消化 1.0-1.5hr9. 用0.8%的琼脂糖凝胶检测，取3m L DNA样品及2》L Load-buffer （含溴 酚蓝和缓冲液），加入点样孔实验所用 Marker 是 DNA（EcoR/HindIII）， 100V 电压电泳90分钟凝胶成象分析仪进行检测10.用紫外可见分光光度计测定DNA的OD值，判定DNA纯度和浓度。