6-1中药的含量测定.ppt

第六章第六章 中药的含量测定中药的含量测定反映其制剂中有效成分、指反映其制剂中有效成分、指标成分或毒性成分的含量标成分或毒性成分的含量衡量其制剂工艺的稳定性和衡量其制剂工艺的稳定性和中药制剂的质量优劣中药制剂的质量优劣 1常用定量分析方法常用定量分析方法方法学评价方法学评价2结果表示结果表示二丁颗粒二丁颗粒 本品每袋含紫花地丁以秦皮乙素（本品每袋含紫花地丁以秦皮乙素（C9H6O4））计，不得少于计，不得少于1.8mg 二至丸二至丸 本品每本品每1g含女贞子以齐墩果酸（含女贞子以齐墩果酸（C30H48O3）计，）计，不得少于不得少于8.0mg 十滴十滴水水 本品每本品每1ml含桉油以桉油精（含桉油以桉油精（C10H18O）计，不得）计，不得少于少于6.3mg 七七叶安神片叶安神片 本品每片含三七叶总皂苷以人参皂苷本品每片含三七叶总皂苷以人参皂苷Rg3（（C53H90O22）计不得少于）计不得少于5.0mg。

左金胶囊左金胶囊 本品每本品每1粒含黄连以盐酸小檗碱粒含黄连以盐酸小檗碱（（C20H18ClNO4）计，不得少于）计，不得少于5.5mg 红景天红景天 本品按干燥品计算，含红景天苷（本品按干燥品计算，含红景天苷（C14H20O3））不得少于不得少于0.50%3化学分析法紫外-可见分光光度法原子吸收光谱法薄层扫描法气相色谱法高效液相色谱4第一节第一节 化学分析法化学分析法n适用于含量较高的成分及无机成分的测定n包括：重量分析和滴定分析n无机药物、总生物碱、总皂苷等5 一、重量分析一、重量分析w挥发法：水分测定w萃取法：地奥心血康胶囊中甾体总皂苷测定w沉淀法：西瓜霜润喉片中西瓜霜测定例 西瓜霜润喉片中西瓜霜（以Na2SO4计）测定精密取约精密取约18g，加水，加水150ml，振摇，离心，滤过，水，振摇，离心，滤过，水50ml分次洗涤，合并滤液，加盐酸分次洗涤，合并滤液，加盐酸1ml，煮沸，缓缓加，煮沸，缓缓加热氯化钡试液水浴加热，静置，用无灰滤纸滤过，沉淀热氯化钡试液水浴加热，静置，用无灰滤纸滤过，沉淀用水洗涤，至洗液不再显氯化物的反应，干燥，并炽灼用水洗涤，至洗液不再显氯化物的反应，干燥，并炽灼至恒重，精密称定，与至恒重，精密称定，与0.6086相乘，计算，即得。

相乘，计算，即得 6 二、滴定分析：含量二、滴定分析：含量1%以上以上w酸碱滴定法酸碱滴定法：生物碱、有机酸、内酯类 w沉淀滴定法：沉淀滴定法：含朱砂、红粉中药制剂w配位滴定法：配位滴定法：含Ca2+、Mg2+等矿物药制剂w氧化还原滴定法氧化还原滴定法：       酚类、糖类及含Fe、雄黄等矿物药制剂71．滴定度（．滴定度（TT/A）计算）计算 滴定度（滴定度（TT/A）：）：每1ml某摩尔浓度的滴定液所相当的被测药物成分的质量（mg） 如：如：每1ml硫酸滴定液（0.01mol/L）相当于5.788mg的莨菪碱（C17H23NO3）（mg/ml） 82. 样品中被测成分的含量计算样品中被测成分的含量计算直接滴定法测定：直接滴定法测定： 返滴定法测定：返滴定法测定： 如：如：每每1ml1ml硫酸滴定液（硫酸滴定液（0.01mol/L0.01mol/L））相当于相当于5.788mg5.788mg的莨菪碱（的莨菪碱（C C1717H H2323NONO3 3））实际硫酸液浓度为实际硫酸液浓度为0.01023mol/L0.01023mol/L则F=0.010230.019例例 颠茄酊中生物碱的含量测定（酸碱滴定法）颠茄酊中生物碱的含量测定（酸碱滴定法） ◆◆精密取精密取100ml，蒸发至约，蒸发至约10ml，加乙醇适量使溶解，加，加乙醇适量使溶解，加0.1mol/L硫酸溶液硫酸溶液10ml，用三氯甲烷分次提取，合并三氯甲烷，用三氯甲烷分次提取，合并三氯甲烷液，用液，用0.1mol/L硫酸溶液硫酸溶液10ml洗涤，洗液并入酸液中。

洗涤，洗液并入酸液中 ◆◆加浓氨试液使呈碱性，用三氯甲烷分次提取三氯甲烷液加浓氨试液使呈碱性，用三氯甲烷分次提取三氯甲烷液用同一水用同一水10ml洗涤，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇洗涤，合并三氯甲烷液，蒸干，加乙醇3ml，蒸，蒸干，干，80℃℃干燥干燥2小时，残渣加三氯甲烷小时，残渣加三氯甲烷2ml微热使溶解微热使溶解 ◆◆精密加硫酸滴定液（精密加硫酸滴定液（0.01mol/L））20ml，水浴加热，除去，水浴加热，除去三氯甲烷，放冷，加甲基红指示液三氯甲烷，放冷，加甲基红指示液1～～2滴，用氢氧化钠滴定液滴，用氢氧化钠滴定液（（0.02mol/L）滴定 ◆◆每每1ml硫酸滴定液（硫酸滴定液（0.01mol/L）相当于）相当于5.788mg的莨菪的莨菪碱（碱（C17H23NO3）10试样试样100ml提取和纯化提取和纯化游离生物碱游离生物碱RN精密加硫酸滴定液（精密加硫酸滴定液（0.01mol/L））20mlRN+-SO4和剩余和剩余H2SO4用氢氧化钠滴定液（用氢氧化钠滴定液（0.02mol/L）滴定）滴定RN+-SO4和和Na2SO4甲基红指示液甲基红指示液11例：马应龙麝香痔疮膏中炉甘石粉测定（配位滴定法）例：马应龙麝香痔疮膏中炉甘石粉测定（配位滴定法）试样约试样约2g→加三氯甲烷溶散加三氯甲烷溶散→稀盐酸提取稀盐酸提取→加加缓冲溶液缓冲溶液→加铬黑加铬黑T指示剂指示剂→用用EDTA溶液滴定溶液滴定例：小儿金丹片中朱砂测定（沉淀滴定法）例：小儿金丹片中朱砂测定（沉淀滴定法）试样约试样约0.5g→加硫酸、硝酸钾加硫酸、硝酸钾→加热至乳白色加热至乳白色→ 加加水水→加高锰酸钾溶液至红色加高锰酸钾溶液至红色→加硫酸亚铁至红色消加硫酸亚铁至红色消失失→加硫酸铁铵指示剂加硫酸铁铵指示剂→用硫氰酸铵滴定液用硫氰酸铵滴定液12二、可见－紫外分光光度法二、可见－紫外分光光度法◆◆ 较高灵敏度、准确、价廉、简单。

较高灵敏度、准确、价廉、简单 ◆◆ 成分复杂，干扰多成分复杂，干扰多 ◆◆ 提取、净化、显色提取、净化、显色 ◆◆ 总成分测定：总黄酮、总多糖、总蒽醌等总成分测定：总黄酮、总多糖、总蒽醌等         131．比耳定律．比耳定律摩尔吸光系数摩尔吸光系数ε ：：λ一定，溶液为一定，溶液为1mol/L，厚度为，厚度为1cm时的吸光度时的吸光度 百分吸光系数百分吸光系数 ：：λ一定，溶液为一定，溶液为1%，厚度为，厚度为1cm时的吸光度时的吸光度 2．仪器校正和检定．仪器校正和检定◆ 波长校正波长校正                  ◆ 吸收度的准确度校正吸收度的准确度校正◆ 杂散光检查杂散光检查 143．对溶剂的要求．对溶剂的要求溶剂截止波长：溶剂在1cm光径中透光率＜25%的波长溶剂试样的溶解性、安全性溶剂的最大使用波长即截止波长15164．测定法．测定法● 参比溶液的选择参比溶液的选择 ● λmax，，±2nm ● 吸吸光度在光度在0.3～～0.7间间 ⑴⑴ 对照品比较法对照品比较法 ●  cx为供试品溶液浓度为供试品溶液浓度 ● cR对照品溶液浓度对照品溶液浓度 ● cR=(100%±10%)cx ●  cx=(Ax/AR)cR17例例 黄杨宁片中环维黄杨星黄杨宁片中环维黄杨星D测定测定对照品溶液：对照品溶液：每1ml含环维黄杨星D 10μg供试品溶液制备：供试品溶液制备：取样，置50ml量瓶，加0.05mol/LNaH2PO4至近刻度，80℃水浴温浸，放冷，加缓冲液至刻度，离心，取上清液测定法：测定法：精密量取二种溶液各5ml，置分液漏斗，各精密加溴麝香草酚蓝溶液5ml，摇匀，各精密加三氯甲烷10ml提取，取三氯甲烷液，加0.5g无水硫酸钠，振摇，静置，取上清液，以试剂空白为参比，在410nm处分别测定吸光度18⑵⑵ 吸收系数法吸收系数法 ● 百分吸收系数百分吸收系数 ＞＞100 ● 无需对照品无需对照品 ● 方法简便方法简便 ● 仪器的校正和检定仪器的校正和检定 例例 岩白菜素含量测定岩白菜素含量测定取约取约20mg，置，置50ml量瓶，加甲醇溶解至量瓶，加甲醇溶解至刻度，摇匀，精密量取刻度，摇匀，精密量取1ml，加甲醇稀释至，加甲醇稀释至25ml，以试剂为空白，在，以试剂为空白，在275nm测吸光度，测吸光度，按岩白菜素吸收系数按岩白菜素吸收系数248计算。

计算19⑶⑶ 标准曲线法标准曲线法 ● 标准系列一般要求标准系列一般要求5～～7个点个点 ● 相关系数（相关系数（r）不得小于）不得小于0.999 ● 供试品溶液的吸光度性范围中部供试品溶液的吸光度性范围中部 例例 排石颗粒中总黄酮测定排石颗粒中总黄酮测定对照品溶液：对照品溶液：每1ml含无水芦丁0.2mg标准曲线：标准曲线：精密取对照品液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分别置10ml量瓶，加50%甲醇至5ml，加5%亚硝酸钠0.3ml，放置6min，加10%硝酸铝0.3ml，加氢氧化钠试液4ml，加50%甲醇至刻度摇匀，以试剂为空白，在510nm测定吸光度                                         样品测定：样品测定：···20三、原子吸收分光光度法三、原子吸收分光光度法◆◆ 准确度高准确度高 ◆◆ 灵敏度高灵敏度高 ◆◆ 选择性好选择性好 ◆◆ 抗干扰能力强抗干扰能力强 ◆◆ 分析速度快分析速度快 含量测定：龙牡壮骨颗粒中钙含量测定：龙牡壮骨颗粒中钙四、荧光分析法四、荧光分析法有害元素的检查：有害元素的检查：Pb、、Cd、、As、、Hg、、Cu 共共17个品种项个品种项21薄层洗脱定量薄层上直接定量n薄层扫描n扫描方式n测定方式五、薄层扫描法五、薄层扫描法22六、气相色谱法六、气相色谱法● 以气体为流动相。

以气体为流动相 ● 分离效能高、样品用量少、分析速度快分离效能高、样品用量少、分析速度快 ● 适合于含挥发性成分的中药鉴别和含量测定适合于含挥发性成分的中药鉴别和含量测定 ● 可与可与MS、、IR联用23农药残留量的检查：农药残留量的检查：六六六、六六六、DDT、、PCNB 甘草、黄芪、人参茎叶总皂苷、人参总皂苷甘草、黄芪、人参茎叶总皂苷、人参总皂苷 树脂残留溶剂检查树脂残留溶剂检查 ：：正己烷正己烷 、甲苯、甲苯 、对二甲苯、对二甲苯 、邻二甲苯、邻二甲苯 、苯乙烯、苯乙烯 、二乙基苯、二乙基苯 、二乙烯苯、二乙烯苯 、、苯三七三醇皂苷、三七皂苷、灯盏花素苯三七三醇皂苷、三七皂苷、灯盏花素 24（一）基本原理（一）基本原理1．塔板理论．塔板理论 H越小，越小，n越大，柱效越高，分离性能越好越大，柱效越高，分离性能越好 2．速率理论．速率理论  H=A+B/U+CU 指导分离条件选择：载体粒度和分布、填充均匀指导分离条件选择：载体粒度和分布、填充均匀度、载气种类和流速、柱温、固定液液膜厚度度、载气种类和流速、柱温、固定液液膜厚度 25（二）系统适用性试验（二）系统适用性试验 1．色谱柱的理论板数（．色谱柱的理论板数（n）：规定最低板数）：规定最低板数 2.分离度分离度(R)：：R≥1.53．重复性：连续．重复性：连续5次，次，RSD≤2.0% 4．拖尾因子（．拖尾因子（T ）） T应在应在0.95～～1.05之间之间 26（三）仪器一般要求与条件选择（三）仪器一般要求与条件选择 1．载气源与载气的选择．载气源与载气的选择 ：一般用一般用N2作载气作载气 2．进样系统．进样系统 ：直接进样或顶空进样直接进样或顶空进样 ；分流比；；分流比； 进样口温度高于柱温进样口温度高于柱温30～～50℃℃；；3．色谱柱：填充柱或毛细管柱．色谱柱：填充柱或毛细管柱 ；常用固定液：；常用固定液：甲基聚硅氧烷、苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等甲基聚硅氧烷、苯基甲基聚硅氧烷、聚乙二醇等 274．柱温的选择．柱温的选择 ：恒温和程序升温：恒温和程序升温 ；柱；柱温低于固定液最高使用温度；合符要求温低于固定液最高使用温度；合符要求的前提下，尽可能采用较低柱温的前提下，尽可能采用较低柱温 5．检测器．检测器 ：FID ；温度应高于柱温，＞；温度应高于柱温，＞150℃℃ 28（四）定量分析方法（四）定量分析方法● 内标法内标法 ● 外标法外标法 ● 归一化法归一化法 ● 内加法内加法 291、内标法、内标法内标物溶液：内标物溶液：如水杨酸甲酯，加乙酸乙酯溶解如水杨酸甲酯，加乙酸乙酯溶解对照品溶液：对照品溶液：如龙脑，加内标溶液溶解如龙脑，加内标溶液溶解供试品溶液：供试品溶液：如冰片，加内标溶液溶解如冰片，加内标溶液溶解取样量取样量 m 定容体积如：定容体积如：50mlcsmg/mlcs cimg/mlmg/mlcs cxmg/mlmg/ml30进样体积进样体积V，如，如1μltmVtmVtmVAsAiAs/Ax内标液内标液对照品对照品供试品供试品则求出则求出cx31 内标物须为原样品中不含有的组分内标物须为原样品中不含有的组分ü 对内标物要求：对内标物要求： 内标物与待测物保留时间应接近，且内标物与待测物保留时间应接近，且R>1.5 内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质内标物为高纯度标准物质，或含量已知物质 内标物与待测组分的理化性质相似内标物与待测组分的理化性质相似 32● 消除进样体积的误差。

消除进样体积的误差● 只需待测组分和内标物出峰只需待测组分和内标物出峰 ● 适合测定微量组分适合测定微量组分优点：优点：  制样要求高制样要求高  找合适内标物困难找合适内标物困难  已知校正因子已知校正因子缺点：缺点：33例：丁香罗勒油（丁香酚测定）例：丁香罗勒油（丁香酚测定）固定相：二甲基聚硅氧烷（SE-30），浓度为10%柱温：110℃内标溶液：每1ml含20mg水杨酸甲酯的无水乙醇溶液校正因子测定：精密取约50mg对照品，置10ml量瓶，精密加内标溶液2ml，加无水乙醇稀释至刻度吸取2μl进样测定供试品溶液制备和测定：精密取约50mg，置10ml量瓶，精密加入内标液2ml，加无水乙醇至刻度，吸取2μl进样测定34a．．工作曲线法：工作曲线法：c．．外标两点法：外标两点法：前提：前提：各次进样量要很准确各次进样量要很准确 操作条件要十分稳定操作条件要十分稳定b．．外标一点法：外标一点法：sisiAACC=2、、 外标法外标法35例：冠心苏合丸（含土木香）例：冠心苏合丸（含土木香）固定相：聚乙二醇20000（PEG-20M；柱长30m）柱温：190℃（30分钟），120℃/分钟升至240℃对照品溶液：每1ml各含0.2mg土木香内酯和异土木香内酯的乙酸乙酯溶液供试品溶液制备：精密取约8g，精密加硅藻土8～12g，研匀，精密取约6～8g，精密加水饱和的乙酸乙酯25ml，称重，超声处理，补重，滤过363 3、归一化法、归一化法′37应用：应用：药物中杂质和杂质总量限量检查药物中杂质和杂质总量限量检查前提：前提：● 试样中所有组分都产生信号试样中所有组分都产生信号 并能检出色谱峰并能检出色谱峰 ●38七、高效液相色谱法七、高效液相色谱法● 仪器性能稳定仪器性能稳定 ● 灵敏准确灵敏准确 ● 分离模式多分离模式多 ● 检测手段多检测手段多 ● 应用最多应用最多391、色谱柱、色谱柱C18柱：柱：（（octadecylsilane ODS柱）柱）C8柱：柱：－－(CH2)7－－CH3，罂粟壳、，罂粟壳、辛夷辛夷 、地奥心血康、地奥心血康 苯基柱：苯基柱：－－(CH2)3－－ C6H5 ，，莱菔子、忍冬藤莱菔子、忍冬藤 氰基柱：氰基柱：－－(CH2)3－－CN 氨基柱：氨基柱：－－(CH2)3－－N H2 ，苦参、，苦参、湿毒清胶囊湿毒清胶囊 （一）仪器一般要求与实验条件选择（一）仪器一般要求与实验条件选择402．流动相．流动相 ● 溶剂种类溶剂种类 ：甲醇、水、乙腈：甲醇、水、乙腈 ● 配比配比 ●  pH值：乙酸、磷酸值：乙酸、磷酸 、氨水、三乙胺、氨水、三乙胺 ● 添加剂添加剂 ：辛烷、庚烷和十二烷基磺酸钠辛烷、庚烷和十二烷基磺酸钠 平消片平消片 中士的宁测定：中士的宁测定： 流动相：乙腈流动相：乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾与磷酸二氢钾与0.01mol/L庚烷磺酸钠等量混合液（用庚烷磺酸钠等量混合液（用10%磷酸调节磷酸调节pH2.8）（）（21∶ ∶79）） 41天麻首乌片（二苯乙烯苷）天麻首乌片（二苯乙烯苷）固定相：ODS流动相：乙腈-水（22∶78）检测器：UVD320nm对照品溶液：每1ml含40μg的甲醇溶液供试品溶液制备：精密取约2片，精密加甲  醇25ml，称重，加热回流，补重，滤过测定法：精密吸取二种溶液各10μl进样测定规格：不得少于0.20mg/片42蒸发光散射检测器（蒸发光散射检测器（ELSD））  ◆◆◆◆线性不过零点线性不过零点线性不过零点线性不过零点 ◆◆◆◆线性范围较窄线性范围较窄线性范围较窄线性范围较窄 ◆◆◆◆低浓度非线性低浓度非线性低浓度非线性低浓度非线性 ◆◆◆◆二点对数方程法二点对数方程法二点对数方程法二点对数方程法43I＝kmb定量关系：定量关系：logI＝blogm＋logkI 为散射光强度，为散射光强度， m 为组分质量为组分质量44例例 金贝痰咳清颗粒（贝母素甲和贝母素乙）金贝痰咳清颗粒（贝母素甲和贝母素乙）固定相：ODS流动相：乙腈-二乙胺-水（63:0.03:37）检测器：ELSD对照品溶液：每1ml各含0.25mg和0.15mg的甲醇液供试品溶液制备：精密取约2.5g，加氨试液4ml，浸润1小时，精密加三氯甲烷-甲醇（4:1）混合液50ml，称重，80℃水浴加热回流，补重，静置，取下层溶液，无水硫酸钠脱水，滤过，精取续滤液25ml，蒸干，残渣甲醇溶解至2ml，滤过测定法：精密吸取对照品液8μl、20μl，供试品液20μl，进样测定，外标两点法对数方程计算45质谱检测器（质谱检测器（MS）：）：川楝子中川楝素测定：川楝子中川楝素测定：含量：含量：0.060%～～0.20%46一测多评法一测多评法 测定黄连（味连）中生物碱的含量测定黄连（味连）中生物碱的含量 对照品溶液的制备：对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含90.5μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备：供试品溶液的制备：-----取续滤液，即得 测定法：测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，以盐酸小檗碱对照品的峰面积为对照，分别计算小檗碱、表小檗碱、黄连碱和巴马汀的含量，用待测成分色谱峰与盐酸小檗碱色谱峰的相对保留时间确定47（二）系统适用性试验（二）系统适用性试验（三）定量分析方法（三）定量分析方法外标一点法外标一点法外标两点法对数方程计算外标两点法对数方程计算内标法：香加皮（内标法：香加皮（4-甲氧基水杨酸测定）甲氧基水杨酸测定）48。