吖啶橙荧光染色试剂盒.docx

吖啶橙荧光染色试剂盒产品简介：卩丫啶橙（Acridine Orange,AO）属于三环杂芳香燃料，可以标记DNA、RNA,属于异染性 荧光染料该染料具有膜通透性，能透过细胞膜，使核DNA和RNA染色因此AO常用 于细胞内DNA和RNA进行检测AO与核酸结合方式主要有：1、插入性结合，AO嵌入 核酸双链的碱基对之间，这种结合方式主要为AO与DNA的结合，其荧光发射峰为530nm, 激发后呈绿色荧光；2、静电吸引，带正电荷的AO与单链核酸的磷酸根（带负电荷）产生 静电间的吸引结合，这种结合方式主要为AO与RNA的结合，其荧光发射峰为640 nm,激 发后呈红色荧光，少量结合会呈桔黄色或桔红色荧光因此，丫丫啶橙嵌合到双链DNA分子 中显绿色，与DNA单链或RNA结合时发桔黄色或橙红色荧光Jimei 丫丫啶橙染色试剂盒（Acridine Orange Detection Kit）主要由 AO Stain、AO Stain Buffer组成，常用于细胞凋亡的检测染色后在荧光显微镜下观察，卩丫啶橙可透过正常细胞 膜，使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光；而在凋亡细胞中，因染色质固缩或断裂为大小不等 的片断，形成凋亡小体。

卩丫啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光或黄绿色碎片颗粒；而坏死 细胞黄荧光减弱甚至消失卩丫啶橙染色常与EB染色合用双染，EB只染死细胞使之产生桔 黄荧光，由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞产品组成:编号名称 JC2264100Tstorage试剂(A)： AO Stain500 卩 l4.C避光试剂(B)： AO Stain Buffer (10X)10ml4C使用说明书1份自备材料：1、荧光显微镜2、低速离心机3、PBS4、细胞计数板5、载玻片、盖玻片操作步骤（仅供参考）：（一） AO单独染色1、 收集细胞（采用流式细胞仪检测时，应先固定细胞），用AO Stain Buffer （1X ）清 洗细胞1次，加入适量的AO Stain Buffer （1 X ）重悬细胞，计数并调节细胞浓度至 106ml2、 取适量的细胞悬液和AO Stain，按照细胞悬液和5ul AO Stain=19： 1的比例混合， 轻轻混匀3、 室温避光染色15 min，滴加于载玻片上并加盖玻片或上流式细胞仪分析4、 荧光显微镜下观察（激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515 nm），计数并拍 照JIMEI吉美壬染色结果:正常细胞细胞被均匀染成黄绿色荧光凋亡细胞染色质浓缩，细胞核碎裂成点状，被染成大小不 一、致密浓染的绿色颗粒(二) AO/EB双染色1、 收集细胞，用AO Stain Buffer (IX )清洗细胞1次，加入适量的AO Stain Buffer(IX )重悬细胞，计数并调节细胞浓度至106ml。

2、 取适量的细胞悬液和AO Stain,按照细胞悬液和5ul AO Stain=19： 1的比例混合， 并加入适量EB染色液，轻轻混匀如果采用荧光显微镜下观察，一般取95卩l细 胞悬液和5 U l AO Stain混合即可3、 室温避光染色15 min，滴加于载玻片上并加盖玻片4、 荧光显微镜滤光片515 nm观察，计数并拍照染色结果：正常细胞均匀染成绿色荧光坏死细胞细胞桔黄色荧光凋亡细胞染色质浓缩，细胞核碎裂，被染成大小不一、致 密浓染的黄绿色颗粒或见胞质芽状突起计算细胞凋亡率和死亡率:，“-、E、亠 凋亡细胞,, 壬 坏死细胞细胞凋亡率=细胞总数X100%细胞坏死率=细胞总数X100%注意事项：1、 吖啶橙染色常与EB染色合用，可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞2、 如有低温离心机进行离心效果更佳，同时应注意减少试剂暴露于强光下的时间3、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作有效期：6个月有效。