体外抑菌实验方案.docx

本文格式为Word版，下载可任意编辑体外抑菌实验方案 体外抑菌测验方案 体外测验室是筛选抗菌药物或测试新药抗菌性能的重要环节药物对细菌代谢的影响，可以使细胞呼吸量减低，或酶系统受到抑制等，因而展现细菌中断生长或片面抑制，借以判断药物对细菌有无抗菌作用或抗菌范围体外测验是细菌与药物直接接触，没有机体诸因素参与，故体外和体内测验的结果不确定完全一致，需两方面综合分析举行评价 一、体外测验的打定 （一）测验菌株的选择 一般使用测验室保存的典型菌株和临床分开菌株 （二）培养基的制备 选择适合细菌生长繁殖的养分物质的培养基 （三）测验器皿的打定 抗菌测验的步骤需用无菌操作，应用的试管、平皿、吸管等与细菌接触的器皿，均需经过高压灭菌后应用 （四）药物的打定 测验时称取确定量的药物，铵盐基折算成效价/mg，配成溶液或制成平匀的混悬液，pH调至中性 （五）菌液制备 抗菌药物测验是针对细菌的作用，测验菌株不能含其他杂菌 （六）细菌计数 将菌稀释至OD值为0.002（测验时1ml菌液加1ml药液OD值降为0.001） 二、体外抗菌测验（试管稀释法） （一）1ml药液采用8个梯度：500、100、50、25、10、5、2.5、1.25（ug）。

配置方法： 每个药液浓度为1ml，8个梯度总共694ug，取整700ug （1）称取700ug待测物，溶解在1.4ml溶剂中得到500ug/ml的药液 （2）从500mg/ml的药液中取0.4ml，参与1.6ml溶剂得到100ug/ml的药液 （3）从100mg/ml的药液中取1ml，参与1ml溶剂得到50ug/ml的药液 （4）从50mg/ml的药液中取0.5ml，参与0.5ml溶剂得到25ug/ml的药液 （5）从50mg/ml的药液中取0.5ml，参与2ml溶剂得到10ug/ml的药液 （6）从10mg/ml的药液中取1ml，参与1ml溶剂得到5ug/ml的药液 （7）从5mg/ml的药液中取1ml，参与1ml溶剂得到2.5ug/ml的药液 （8）从2.5mg/ml的药液中取1ml，参与1ml溶剂得到1.25ug/ml的药液 （图示如下图） （二）1ml菌液采用OD值0.002的菌液 配置方法：菌悬液在600nm波长下测定其OD值，根据概括的OD值按10倍稀释使菌悬液的OD值接近0.002，在接近0.002后缩小稀释倍数使菌悬液OD值为0.002。

（三）菌药混合培养 取稀释药液各1ml分装于小试管内（从稀到浓可不换吸管），做好标记，然后取经培养16-18h细菌培养液，每管1ml，每小试管总量为2ml，置37℃培养箱内培养16-18h，检查结果 （四）结果分析 如参与细菌的药液管仍未澄清，即说明无细菌生长，那么该管药物有抗菌作用；如为浑浊，即说明细菌已生长，该管药物无抗菌作用以完全无细菌生长的最低药物浓度作为细菌对药物的敏感度，即为该药物最小抑菌浓度 — 3 —。