口服维生素A对哮喘大鼠气道炎症细胞及肺组织中TNF-α的影响.pdf

3 7 6 床肺科杂志2 0 1 1 年 3月 第 1 6卷第 3期 口服维生素 A对 哮喘大 鼠气道炎症细胞及肺组织 中 T NF ． 的影响 罗明鑫 楼皖玲 潘家华 李晓红 【 摘 要】 目的通过观察口服维生素 A对大 鼠哮喘模型 的气道炎症细胞及 肺组 织中 T N F ． 的影响 ， 初 步判定 口服维生素 A对哮喘 的治疗效果及作用机制 方法将 实验动物随机分成两组 ： 哮 喘组 、 维生素 A口服组以卵清蛋 白( O VA) 致敏激发建 立哮喘模型维生素 A 1： 3 服组在实验第 2 1 d行维生素 A 口服治疗一周实验第 2 8 d和第 3 5 d收集大 鼠 B A L F ， 进行 B A L F中 细胞总数及嗜酸性粒 细胞 (E O S ) 计数， 并用酶联免疫吸附(E L I S A) 法检测各组肺组织中 T N F ， 水平结果与哮喘组相 比， 维 生素 A El服组炎症 细胞数和嗜酸性粒细胞 明显下 降， 但淋 巴细胞 及巨噬细胞 比例增加 ， 第 一周肺组织 中 T N F — a含 量无明显改 变 ， 第二周则下降明显 ， 具有统计学意义。

结论 口服维生素 A在治疗哮喘时有一定 的疗效 ， 它可能在 治疗哮喘初期 加重肺部 炎症反应 ， 但在恢 复期可使肺部的炎症较早消退 ， 病程大大缩短 【 关键词】 哮喘 ； 维生素 A； 炎症 细胞 ； T N F — Ef f e c t s o f v i t ami n A o n Ai r way i nflamm a t or y c e l l s an d TNF· 伐 of l un g t i s s ue i n r a ts wi t h a s t hma LUO M g — x i n ， L O U耽 n — l i n g ， ⅣJ i a — h u a ， L 1 X i a o — h o n g J ． D e p t o fP e d i a t r i c s ， A n h u i P r o v i n c i a l H o s p i t a l ； 2 ． A n h u i M e d i c a l U - n i v e r s i t y ． H e f e i 2 3 O o o j ． C h i n a 【 Ab s t r a c t 】 0b j e c fi v e T o o b s e r v e t h e e f f e c t o f v i t a mi n A o n a i r w a y i n f l a m ma t o r y c e ll s a n d T N F — O t o f l u n g t i s s u e i n r a t s w i t h a s t h - ma a n d t o d i s c u s s t h e e ff e c t o f Vit a mi n A i n a s t h ma c u r e a n d i t s me c h a n i s m． M e t ho d s T o d i v i d e 3 2 f e ma l e S D r a t s i n t o 2 g r o u p s a s f o l - l o wi n g： As t h ma g r o u p a n d Vi t a mi n A gro u p ． T h e S e v e n t h d a y a n d 1 4t h d a y e a c h e x e c u t e d 1 ／ 2 a mo u n t o f a n i mals a f t e r Vi t a mi n A i n t e r v e n — t i o n ． Th e l e v e l o f TNF — d i n l u n g t i s s u e w a s me a s u r e d b y e n z y me — l i n k e d i mmu n o s o r b e n t a s s a y ． Th e c e l l n u mb e m i n BAL F we r e c o u n t e d a s t o t al c e l l s ， e o s i n o p h i l s 、 L y mp h o c y t e s a n d ma c r o p h a g e s ． Re s ul t s C o mp a r e d wit h As t h ma g r o u p， Vi t a mi n A g r o u p c a n d e c r e a s e t h e a mo u n t o f t h e t o t a l c e l l s a n d EOS， Bu t i n c r e a s e d t h e l y mp h o c y t e a n d ma c r o p h a g e ， i n t h e fi r s t we e k， t h e a mo u n t o f TNF - o 【i n l u n g t i s s u e d i d n o t c h an g e s i g n i fic an t l y。

i n T h e s e c o n d w e e k t h e a mo u n t o f T NF一 o b v i o u s l y d e c r e ase d ． Co nc l u s i o n Vi t a mi n A i n t h e t r e a t me n t o f asthma h a v e c e r t a i n c u r a t i v e e ffe c t ， Ea r l y i n t h e t r e a t me n t o f a s t h ma， I t ma y b e a g g r a v a t e d l u n g i n f l a mma t i o n， b u t I t c a n ma k e t h e l u n g i n flam ma t i o n t o s u b s i d i s e e a r l i e r i n l ast p h a s e a n d s h o rte n t h e d u r a t i o n Gr e a t l y ． 【 K e y w o r d s 】 as t h m a ； v i t ami n A ； i n f l a m m a t o r y c e l l s ； T N F ． 0 【 支气管哮喘是由多种细胞( 如嗜酸性粒细胞、 肥大细胞、 T细胞 、 中性粒细胞 、 气 道上皮细胞 等 ) 和细胞 组分参 与的气 道慢性炎症性疾病 。

哮喘发病的机制很 复杂 ， 尚未完全明 了， 近年来多项研究 显示维生素 A缺乏是哮喘的危险因素之 一，由于目前国内对哮喘人群予维生素 A治疗的相关病例极 少 ， 尚不明确本实验通过建立哮喘大 鼠模型， 以维生素 A 作为干预因素， 比较治疗后第7 d和第 1 4 d哮喘大鼠肺泡灌 洗 液中各类 细胞 数 ， 及 大 鼠肺组 织 中 T N F — O t 的变 化 ， 来 初 步 探讨维 生素 A治疗哮喘的疗效 ， 为以后的人群 营养干预提 供 理论依 据 材料与方法 一、动物3 6只成 年雌 性 ( S D) 大 鼠， 体 重约 1 8 0±2 0 g ( 均购于安徽 医科大学动物实验 中心) 试剂 ： 卵 白蛋 白购 自 美国 S i g ma 公司 ， 维生素 A为厦门鱼肝 油厂生产 ， T N F — d检 测 试剂盒购自武汉博： ￡ 德公司 二、 哮喘小鼠模型建立将 3 6只 S P F级大白鼠随机分成 两组， A组： 哮喘模型对照组( 1 2只) 和 B组 ： 维生素 A口服组 ( 1 2只) 两组于实验的第 1 、 7天各腹腔注射致敏液 1 ． 0 m l／ 只／ 次( 0 ． 0 8 ％ O V A和佐剂 1 0 ％明矾混合液) ； 实验第 1 4 d ， 作者单位 ： 1 ．2 3 0 0 0 1 安徽 ， 合肥 ， 安徽 医科大学附属省立医院儿科 2 ．2 3 0 0 3 2 安徽 ， 合肥 ， 安徽 医科大学生理教研 室 通讯作者 ： 李 晓红 ， E — ma i l ： l i w h l i x h @y a h o o ． c o n ． c n 两组大 鼠各 自放人 4 0× 4 0× 5 0 c m 纸箱 内 ， 以压缩 雾化器为 动力 ， 雾化 吸入 1 ％ O V A溶液 l 0 ml 进行激发 ， 每 日一次 ， 每 次 3 0 m i n 。

观察大 鼠反应 ， 以烦躁不安 、 呼吸急促 、 腹 肌抽 搐 、 两便失禁为阳性反应实验第2 1 d 行维生素 A口服干预， 将 维生素 A胶囊融人大豆油( 约 1 0 0 u ／ m 1 ) 中， 每天上午各组均 照常给予 1 ％ O V A雾化进行激发， 隔天下午 A组给予纯大豆 油 0 ． 1 m l 灌 胃， B组给予含有维生素 A的大豆油 0 ． 1 m l 灌 胃 ， 干预共一周 实验第 2 8 d和第 3 5 d分两批 取材 ， 每组 6 只／ 批／ 次 ， 麻醉后行 气管插管 ， 以 1 m l P B S灌洗 3次 ， 回收率 达 5 0 ％ 以上 取 0 ． 1 ml B A L F加入 0 ． 9 m l白细胞计 数液 中， 在显微镜下行白细胞计数， 再将肺泡灌洗液 5 0 0 0转离心 5 m i n ， 把 B A L F离心后的沉淀溶于0 ． 4 m l P B S中， 混匀， 制备 3 张涂片， 以瑞氏染色液染色每个标本计数 2 0 0个细胞， 按巨 噬细胞、 淋巴细胞以及嗜酸性粒细胞进行分类然后分离肺 脏 制备成匀浆 ， 测定各组大 鼠肺组 织的 T N F — o 【 。

三、 采用 S P S S f o r Wi n d o w s 1 3 ． 0统计软件进行分析， 计量 资料以均数 ± 标准差( ± S ) 表示一组样本前后比较分析用 独立样本 t 检验多组 比较分析则采 用单因素方差 分析 ( o n e — w a y A N O V A) ， 多 重 比较 再 采 用 S N K — q检 验 取 P 0 ． 0 5 ， 实验第 3 5天 ， 维生素 A组大鼠肺组织中T N F 一 则明 显下降， P< 0 ． 0 5 ， 有显著性差异， 第五周较第四周1：3 服维生素 A组 T N F 一 仅明显下降， P< 0 ． 0 5 ， 有统计学意义见表 2 表 2 各 组大 鼠肺组织匀浆中 TN F - “的检测结果 ( 4 - s ) 讨 论 维生素 A( V i t a m i n A， V i t A) 是一种脂溶性维生素， 化学 名为视黄醇， 是维持机体正常免疫功能的重要营养物质， 补充 适宜剂量的维生素 A可 能有助 于机体 免疫 功能 的改 善和 发 病率的降低而近年来有学者研究发现 。