三仙壮骨胶囊提取工艺研究.doc

1三仙壮骨胶囊提取工艺研究作者：邓小慧，李淑贤，王霆，张丹，梁生旺【摘要 】 目的 优选三仙壮骨胶囊水提部位的最佳提取工艺方法 采用高效液相色谱法测定川续断皂苷 VI 的含量，并以川续断皂苷 VI 的含量作为指标，采用正交设计试验考察三仙壮骨胶囊的最佳提取工艺结果 最佳提取工艺为: 加 10 倍量的水煎煮 2 次，每次 1 h结论 该提取方法合理、可行，为生产提供了实验依据 【关键词】 三仙壮骨胶囊；提取工艺；高效液相色谱法；川续断皂苷 VIAbstract:Objective To optimize the extraction procedure of water soluble components in Sanxianzhuanggu capsules. Methods Orthogonal design was used in the experiment and the content of asperosaponin VI was determined by HPLC. Results The ideal extraction process was: 2 times of extraction, 10 times of water, 1 hour of reflux. Conclusion The optimized extraction procedure is rational and feasible for the industry manufacture of the capsules.2Key words:Sanxianzhuangu capsules; extraction procedure; HPLC; asperosaponin VI三仙壮骨胶囊是由续断、淫羊藿、独一味、当归等几味中药组成，本品为研制者常年行医的经验方，临床用于治疗跌打损伤、筋骨扭伤、瘀积肿痛。

方中续断、淫羊藿、独一味主要含有皂苷类成分及黄酮苷类成分，在水中溶解性较好，故此三味药材采用水煎煮方式提取本研究采用正交设计法，以川续断皂苷 VI 为指标，用高效液相色谱法测定其含量［1-4］ ，以优选三仙壮骨胶囊水提部位的最佳工艺1 材料与试剂Waters 2695 高效液相色谱仪，Waters 2996 PDA 检测器, Empowers 色谱工作站， Diamonsil C18 柱（5 μm，250 mm×4.6 mm，迪马公司） KQ 100 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)； BSZZ4S 型电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)川续断皂苷 VI 对照品（中国药品生物制品检定所，批号：111685 200401） ；乙腈为色谱纯；水为屈臣氏蒸馏水；其他试剂均为分析纯32 方法与结果2.1 正交试验设计按处方称取续断、淫羊藿、独一味药材，加水进行煎煮，在煎煮过程中，采用 L9( 34 )表安排正交试验，以续断中川续断皂苷Ⅵ的含量为指标，对提取效果影响较大的加水量、煎煮次数及煎煮时间 3 个因素进行考察，各因素水平见表 1表 1 因素水平表2.2 川续断皂苷 VI 含量测定2.2.1 色谱条件 色谱柱为 Diamonsil C18 柱（5 μm，250 mm×4.6 mm） ；流动相为乙腈  水（体积比 30∶70） ；检测波长为210 nm；柱温为 25 ℃；流速为 1 mL/min；进样量为 10 μL。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取川续断皂苷 VI 对照品 3.09 mg，置 2 mL 容量瓶中，用甲醇溶解配制成质量浓度为 1.545 mg/mL 的对照品溶液2.2.3 供试品液的制备 取水提取液适量（相当于续断药材 0.75 g） ，置圆底烧瓶中，减压浓缩至干，精密加入甲醇 25 mL，称定重4量，超声提取 30 min，放冷，用甲醇补足重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液2.2.4 标准曲线的制备 精密吸取对照品溶液2、4 、8 、 12、16、20 μL，依次注入高效液相色谱仪，各重复 3次，记录峰面积以川续断皂苷 VI 峰面积均值（A ）对进样质量浓度（ρ）进行线性回归，得回归方程为A=191595.75ρ 97704.96，r=0.999 8（ n=6） 表明川续断皂苷VI 在 3.09～30.9 μg/mL 之间与峰面积具有良好线性关系2.2.5 样品含量测定 精密吸取供试品溶液及对照品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，按“2.2.1”项下条件进行测定，测得的川续断皂苷Ⅵ对照品和样品色谱图见图 12.2.6 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液 10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行测定，连续测定 6 次，结果 RSD 值为0.66%(n=6)，表明本法精密度良好。

2.2.7 重复性试验 分别取同一批号样品 6 份，按“2.2.3”项方法制备溶液，依法测定川续断皂苷Ⅵ的含量，结果测得含量的 RSD值为 0.92%(n=6),表明本法重复性良好2.2.8 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 10 μL，注入液5相色谱仪，按上述色谱条件，间隔不同时间进行测定，结果 RSD 值为 0.50%(n=5)，表明供试品溶液在 4 h 内测定基本稳定2.2.9 加样回收率试验 取已知含量的样品，分别加入一定量的对照品，置圆底烧瓶中，按“2.2.3”项方法制备供试品溶液并在上述条件下测定，其平均回收率为 100.30%，RSD 为 2.84%(n=6)2. 3 正交实验结果结果见表 2、表 3表 2 正交试验结果表 3 方差分析表从表2、表 3 中可见，因素 A、因素 C 对实验结果有显著影响，因素 B对实验结果影响较小综合正交实验结果及节约生产成本的角度考虑，确定最佳工艺为 A3B2C2，即加 10 倍量水煎煮 2 次，每次 1 h按最佳工艺对 3 批样品进行验证实验，结果 3 批样品的平均含量分别为 11.57、12.19 和 12.02 mg/粒，可见该工艺稳定可行。

3 讨 论3.1 有关续断等药材成分提取的研究报道很多，综合文献研究和预试验，采用水煎煮方式进行提取，并以川续断皂苷 VI 含量作为考察工艺的指标，采用 L9（34）正交实验表进行试验，得出三仙壮骨胶囊的水提部位最佳工艺条件该工艺简便可行，有良好的可操作6性3.2 鉴于川续断皂苷Ⅵ有防止骨质疏松、增强骨密度的作用,与续断的传统功效吻合［5］,本文对提取液中川续断皂苷 Ⅵ的含量进行了测定,其总量转移率为 90.03%参考文献】［ 1］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2005 版一部［M］.北京：化学工业出版社，2005: 231.［2］ 谭洪根，林 生，张启伟，等.高效液相色谱法测定续断药材中川续断皂苷Ⅵ的含量［J］.中国中药杂志，2006，31（9）:726-727.［3］ 马新飞，陆兔林，毛春芹,等.HPLC 法测定不同续断炮制品中川续断皂苷Ⅵ［J］.中草药，2007，38（5）：707-708.［4］ 王初.发汗与不发汗续断中水溶性浸出物和川续断皂苷 VI 的比较［J］.中草药，2007，38（6）：865-866.［5］ 王岩,周莉玲, 李锐.川续断的研究进展［J］.时珍国医国药，2004，4（13）：233-234.7。