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人脐静脉内皮细胞培养.docx

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卖家[上传人]：油条

文档编号：2207008

上传时间：2017-07-21

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人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养准备的药品：pbs,199 培养液， I 型胶原酶（SIGMA）主要的器械：手术剪，镊子，止血钳，丝线，鞘管（PTCA 用的动脉鞘的扩张管，6F 或 7F）首先，以 PBS 漂洗脐带 1-2 次，用剪刀将脐带剪成数段 15CM 左右长短（本人认为这个长度较为合适）之后，以止血钳提起一段脐带的一端，将鞘管插入脐静脉中，并经该鞘向静脉内注入 PBS10-8ml 左右（最后注入空气吹净残留液体），后以丝线将另一端结扎（一定要扎紧），并从鞘管注入适量胶原酶，一般 1ml（0.1%）足以, 并以止血钳将该端钳闭后将如此处理的脐带放入小烧杯中，在温箱中孵育 10-15 分钟（视酶的活力而定）最后将消化后的脐带轻轻揉捏 2-3 次，将结扎线及止血钳除去，后经鞘管向内注入 199 培养液（8-10ml 就可以了，一次即可），将冲刷下来的酶液收集到离心管中，1000rpm 离心5-6 分钟，后倾去培养液，加入事先配制好的内衣细胞培养液（199，20%FBS,双抗,内皮细胞生长因子），吹打数次制成细胞悬液，接种入培养瓶一般一段脐带所得细胞放入一个 25CM 培养瓶（最好是一次性的塑料瓶）。

注意：1、如果培养瓶内有较多残血，先不要紧张，因为这样并不影响内皮的生长，第二天予换液一次即可2、一定要确保有足够数量的内膜消化下来，否则细胞生长缓慢影响质量（如离心后，管底的白膜-消化下来的内膜较少，必要时可两段脐带合为一瓶）。

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