SDSE所有详细试剂配方.pdf

SDS-PAGE 30%聚丙烯酰胺溶液-----30%w/vAcrylamide 组分浓度 各种组分名称 配制不同体积所需各成分的体积 mL 或质量 g 30%Acr-Bis29:1 1000ml 100ml 29%Acrylamide 丙烯酰胺 290g 29g 1%BISN,N’-亚甲丙烯酰胺 10g 1g 配制方法 将 29 克丙烯酰胺和 1 克 N,N’-亚甲丙烯酰胺溶于总体积为 60ml 温热 37℃左右的去离子水中,充分搅拌溶解,补加水至终体积为 100ml;0.45μm 微孔滤膜过滤除菌和杂质,储于棕色瓶,4℃避光用铝箔纸包扎起来保存;严格核实 PH 不得超过7.0,因可以发生脱氨基反应是光催化或碱催化的;使用期不得超过两个月,隔几个月须重新配制;如有沉淀,可以过滤; 保存条件 4℃避光用铝箔纸包扎起来保存 注意事项 丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收,其作用具有累积性;称量丙烯酰胺和N,N’-亚甲丙烯酰胺时应戴手套和面具;可认为聚丙烯酰胺无毒,但也应谨慎操作,因为它还可能含有少量未聚合材料; 1MTris-HCLpH6.8 浓缩胶 buffer 组分浓度 1MTris-HCL 名称 用量 备注 Tris 12.1g 去离子水 80ml 浓盐酸 9ml 36%的浓盐酸预实验已确定 去离子水 加入去离子水定容至 100ml 后,室温保存 配制方法 称量 121.1gTris碱溶于 800mL的去离子水,充分搅拌溶解,加>0.7mL 的浓HCL 调节所需要的 pH 值 7.4-大约 0.7mL,7.6-大约 0.6mL,8.0-大约 0.42mL,将溶液定容至 1L,高温高压灭菌后,室温保存;应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值,因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大,温度每升高 1℃,溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位; 保存条件 室温保存; 注意事项 对人体有刺激性,请注意适当防护; 1.5MTris-HCLpH8.8 分离胶 buffer 组分浓度 1.5MTris-HCL 名称 用量 备注 Tris 18.17g 去离子水 80ml 浓盐酸 3ml 36%的浓盐酸预实验已确定 去离子水 加入去离子水定容至 100ml 后,室温保存 配制方法 1L 称量181.7gTris 碱溶于800mL的去离子水,充分搅拌溶解,加浓 HCL 调节所需要的pH 值=8.8,将溶液定容至 1L,高温高压灭菌后,室温保存;1.5mmol/LTris-HCLpH8.8:18.15gTris 和 48ml1mol/LHCL 混合,加水稀释到 100ml 终体积;过滤后 40C 保存; 保存条件 室温保存 注意事项 应使溶液冷却至室温后再调定 pH 值,因为 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大,温度每升高 1℃,溶液的 pH 值大约降低 0.03 个单位; 10%十二烷基硫酸钠 SDS 溶液-----10%w/vSDS 组分浓度 10%w/vSDS 名称 用量 备注 SDS 10g 去离子水 80ml 加入去离子水定容至 100ml 后,室温保存 配制方法 称取2g 高纯度的SDS 置于100~200ml 烧杯中,加入约16ml 的去离子水,68℃加热溶解,滴加浓盐酸调节PH 至 7.2,定容至 20ml 后,室温保存 保存条件 室温保存 注意事项 对人体有害,请注意防护; 10%过硫酸铵溶液-----10%w/vAP 组分浓度 10%w/v 过硫酸铵 名称 用量 备注 过硫酸铵 0.1g 去离子水 1ml 现配现用 配制方法 称取 0.1g 过硫酸铵置于 1.5ml 离心管,加 1mL 去离子水吹打溶解,4℃保存 保存条件 4℃保存 注意事项 10%过硫酸铵溶液在 4℃保存时,可使用 2 周左右,超过期限会失去催化作用 5×Tris-甘氨酸电泳缓冲液-----5×Tris-GlycinebufferSDS-PAGE 电泳缓冲液 组分浓度 各种组分名称 配制不同体积所需各成分的体积 mL 或质量 g 1000ml 500ml 0.125MTris 15.1g 1.25Mglycine 甘氨酸 94.0g 0.5%W/VSDS 5.0g 配制方法 称取 15.1gTris,94.0g 甘氨酸 glycine,5.0gSDS,用 800ml 蒸馏水或去离子水溶解,充分搅拌溶解,定容至 1000ml,室温保存;得 0.125mol/LTris-1.25mol/L 甘氨酸电极缓冲液;临用前稀释 5 倍; 保存条件 室温保存,两年有效; 注意事项 配制好的电泳液使用时间不宜超过两周; 电泳缓冲液可以回收,回收后可再使用 1-2 次,但为了取得最佳的电泳效果,应使用新电泳液; 5×SDS-PAGE 加样缓冲液-----5×SDS-PAGELoadingBuffer 组分浓度0.25MTris-HCLpH6.8； 10%W/VSDS； 0.5%W/VBPB 溴酚蓝； 50%V/V 甘油； 5%W/Vβ-巯基乙醇 2-ME 各种组分名称 配制不同体积所需各成分的体积 mL 或质量 g 5ml 3ml 1MTris-HCLpH6.8 1.25ml SDS 0.5g BPB 溴酚蓝 25mg 甘油 2.5ml 0.5mL/份分装,室温保存,使用前加 25μL2-ME/小份,保存一个月左右; β-巯基乙醇 2-ME 0.25ml 配制方法 量取1.25mL1MTris-HCLpH6.8,0.5gSDS,25mgBPB,2.5mL甘油,置于10mL塑料离心管中,加去离子水溶解后,定容至 5mL,小份 0.5mL/份分装,于室温保存;使用前将 25μL 的 2-ME 加入到每小份中;加入 2-ME 的LoadingBuffer 可在室温下保存一个月左右; 保存条件 -20℃保存,至少一年有效; 注意事项 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液 5X 中含少量 DTT 和巯基乙醇,有轻微刺激性气味,必须完全溶解后再使用; 摘自 Takara 商品目录--实验室常规试剂配制方法 TEMED 原液直接使用 考马斯亮蓝 R-250 染色液 组分浓度0.1%w/v 考马斯亮蓝 R-250,25%v/v 异丙醇,10%v/v 冰醋酸 各种组分名称 配制不同体积所需各成分的体积 mL 或质量 g 1000ml 400ml 备注 考马斯亮蓝 R-250 1.0g 0.4g 异丙醇 250ml 100ml 搅拌溶解,可用甲醇替代 冰醋酸 100ml 40ml 搅拌均匀 去离子水 650ml 260ml 搅拌均匀,滤纸除去颗粒物,室温保存 考马斯亮蓝染色脱色液 组分浓度10%v/v 醋酸,5%v/v 乙醇 名称 用量 备注 冰醋酸 100ml 乙醇 50ml 去离子水 850ml 充分混匀后使用  。