SysmexXN-1000荧光法计数血小板复检规则的制定及应用.docx

    SysmexXN-1000荧光法计数血小板复检规则的制定及应用    摘要：目的建立SysmexXN-1000血液分析仪荧光法计数血小板的复检规则，详细分析规则建立的必要环节，以期对建立合理的复检规则提供依据方法应用SysmexXN-1000血液分析仪检测1250例标本，同时进行血涂片显微镜检查，对检测结果进行统计分析参考国际血液学复检专家组推荐“41条”规则中血小板复检规则，通过调整规则降低复检率，控制漏诊率，制定出适合荧光法计数血小板复检规则选取240例有阳性或假阳性倾向的标本验证规则的有效性结果依据“41条”中血小板复检规则，电阻抗法（PLT-I）复检率为53.5％（669/l250），假阳性率为33.2％（415/1250），漏诊率为8.5％（106/1250）；荧光法（PLT-F）复检率为50.3％（629/l250），假阳性率为28.2％（353/1250），漏诊率为5.7％（71/1250）采用调整后的复检规则对标本重新统计分析，PLT-F复检率为33.9％（424/1250），假阳性率为13.4％（168/1250），漏诊率为4.0％（50/1250）与原规则相比，调整后复检规则可使大血小板引起假性减低的检出率由59.6%（77/129）提高至89.1%（115/129）；血小板聚集引起假性减低的检出率由84.1%（37/44）提高至100%（44/44）。

验证试验结果显示，血小板聚集阳性标本无漏检情况结论血小板电阻抗法复检规则适用于SysmexXN-1000荧光法计数血小板，但复检率过高未体现出方法学优势，优化后，规则的复检率和漏诊率均降低，具有临床可操作性和有效性关键词：血小板计数；荧光法；复检规则；评价研究EstablishmentofreviewcriteriaforSysmexXN-1000plateletanalyzerbyFluorescenceanditsapplicationHANCaijun1，ZHAOWantao2，JIBiye1，ZHOUFuxian1，YOUXi1（1DepartmentofClinicalLaboratory，theAffiliatedhospitalofYanbianUniversity，JilinYanji，133000；2DepartmentofClinicalLaboratory，theAffiliatedhospitalofBeihuaUniversity，JilinJilin，132000）Abstract：ObjectiveToestablishthebloodsmearreviewcriteriaforSysmexXN-1000PLT-F，andthedetaileddescriptionofalltheimplementprocedurescouldbehelpfulforestablishingareasonablereviewrules.MethodsThetotal1250bloodsamplesweredetectedwithXN-1000hematologyanalyzer.Inthemeantime，bloodsmearswerereviewed，andtheresultswereanalyzedstatistically.Thenewreviewcriteriawereestablishedbyconsultingandmodifyingtheoneasrecommendedbyaninternationalconsensusgroup.Afterestablishmentofthereviewcriteria，another240samplesweretestedforvalidation.ResultsUsingtheoriginalrules，thestudygotahighreviewrateof50.3%（629/1250），falsepositiverateof28.2%（355/1250）andfalsenegativerateof4.7%（59/1250）.Usingtheadjustedrules，thereviewrate，falsepositiverateandfalsenegativeratewereallreducedto33.9%，13.4%and4.0%.Thedetectionrateoflargeplateletsandplateletaggregationcausethepseudothrombocytopeniaincreased89.1%（115/129）and100%（44/44），noPLTClumpsmissingwasobserved.ConclusionsWhenappliedtoSysmexXN-1000analyzer，“41rules”basedontheimpedanceshowsahighreviewratewhichdoesnotreflecttheadvantageofthefluorescent.Theoptimizedreviewcriteriaaresuitableandpracticalfortheroutineworkandcallmeettheneedofclinicalinbothreviewrateandfalsenegativerate.Keywords：Plateletcount；Fluorescent；Reviewcriteria；Evaluationstudies2005年国际血液学复检专家组制定并推荐41条血细胞分析和分类复检规则[1-2]，得到中国临床检验血液学专家的高度响应[3-5]，其中又对血小板复检提出了若干要求。

但是随着血小板分析新技术荧光染色法（PLT-F）的广泛应用，若直接沿用其中的部分规则，可能会增加复检工作量或者发生漏诊，而已发表的文献没有阐明因方法学改变的血小板规则修订因此如何保证血小板检测结果质量，又提高工作效率，制定合理适用的血小板复检规则非常重要为此，本研究通过与电阻抗法（PLT-I）比较，验证并改进血小板复检方案，建立适合SysmexXN-1000血液分析仪PLT-F的复检规则材料与方法一、研究对象1.标本来源：1250例血标本（PLT-F<125×109/L或>1000×109/L）[6]来自2016年5月至2016年10月我院门诊和住院患者（男613例，女637例），用于建立PLT复检规则；240份标本为定向抽取的潜在阳性或假阳性标本涉及血液、肿瘤、消化、放化疗、儿科（包括新生儿）等科室，用于验证所建立规则的临床有效性2.仪器与试剂：SysmexXN-1000血液分析仪以及配套试剂OlympusCX-21双目显微镜BD公司静脉用乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）真空抗凝管瑞氏-姬姆萨（Wright-Giemsa）染色液（珠海贝索生物技术有限公司）二、方法1.样本采集与检测：坐位采集静脉血，收集在EDTA-K2的真空采血管内，室温保存。

所有标本均采用自动进样模式在SysmexXN-1000血液分析仪检测并记录报警信息，要求采集6h内检测结束每份标本，同时制备2张血涂片，写好编号；用瑞氏-姬姆萨染色液进行染色，然后由有工作经验的检验人员按照标准操作程序（血涂片检测SOP文件）进行镜检2.涂片镜检阳性判断标准：正常情况下，血片厚薄适中区域（每个红细胞彼此相互接触但不重叠），每个油镜视野约有血小板8～15个；少于8个/油镜视野可初步认为血小板减少，大于30个/油镜视野则可初步认为血小板增加油镜下的细胞形态异常判断标准：①小红细胞：直径小于6μm②细胞碎片：各种不完整形状的细胞碎片③血小板凝集：血小板5个以上成堆④巨大血小板：直径6μm以上[7-8]三、统计学分析：采用SPSS13.0统计软件对XN-1000血液分析仪检测的实验数据进行统计分析，根据设定的复检方案，评估仪器检测结果的真阳性、假阳性、真阴性、假阴性及与涂片镜检结果的符合性真阳性为触发了任意复检规则，同时涂片镜检结果阳性；假阳性为触发了任意复检规则，但涂片镜检结果为阴性；真阴性为未触发复检规则，同时涂片镜检结果为阴性；假阴性为未触发复检规则，但涂片镜检结果为阳性。

仪器检测结果的评价以真阳性率、假阳性率、真阴性率、假阴性率、符合率、复检率及漏诊率来表示，复检率=真阳性率+假阳性率，漏诊率=假阴性率结果一、PLT-I复检规则修改前、后对PLT-F诊断效率的比较：根据国际血液学复检专家组推荐的血小板复检规则和我国血液学复检专家小组制定的涂片镜检血小板阳性判断标准，对1250例标本数据进行统计分析，用PLT-I法检测复检率为53.5％（669/l250）；假阳性率为33.2％（415/1250）；漏诊率为8.5％（106/1250）用PLT-F法复检率为50.3％（629/l250）；假阳性率为28.2％（353/1250）；漏诊率为5.7％（71/1250），可见，电阻抗法复检规则适用于荧光法计数血小板，但复检率过高未体现出方法优势结合仪器的性能特点及方法学的差异对国际复检规则进行优化，最终建立适应于SysmexXN-1000血液分析仪荧光法的血小板复检规则（表2）结果显示，复检率为33.9％（424/1250）；假阳性率为13.4％（168/1250）；漏诊率为4.0％（50/1250）通过规则调整，PLT-F的复检率下降16.4%（见表1）二、新规则在血小板假性减低中的应用：与原规则相比，调整后复检规则可使大血小板引起假性减低的检出率由59.6%（77/129）提高至89.1%（115/129）；血小板聚集引起假性减低的检出率由84.1%（37/44）提高至100%（44/44）。

三、验证试验结果分析：为验证所建立的SysmexXN-1000血液分析仪荧光法复检规则有效性，定向选取来自于血液病、肿瘤放化疗及感染等有阳性或假阳性倾向的病例共240例结果显示调整后复检规则标本真阳性率为22.5％（54/240），假阳性率为21.3％（51/240），假阴性率为5.0％（12/240），真阴性率为51.2％（123/240），无血小板聚集阳性标本漏检讨论血液分析仪检测原理和报警信息不同，致使不同仪器及方法间对细胞形态的识别能力存在差异PLT-I采用电阻抗原理，根据血小板颗粒在通过计数小孔时引起电阻变化，以此为基础将2fL至30fL范围内的颗粒定义为血小板，因此电阻抗法不能很好的识别大血小板、血小板聚集等引起的假性减少以及细胞碎片和小红细胞等引起的假性偏高；而PLT-F通过使用血小板特异性的恶嗪染料对细胞内的核酸染色，采用流式细胞术检测并绘制散点图进行计数，明确区分血小板以及其他细胞，这符合文献中荧光染色法性能优于电阻抗法的方法评价[9]本研究所在医院平均日血常规标本量600余份，虽然电阻抗原理的复检规则适用于荧光法，但复检率较高，未能体现出荧光法的优异性因此，需要重新优化复检规则，而优化规则要遵循3个原则[5，10]：（1）降低复检率：需要从降低假阳性率人手，分析在复检规则中出现假阳性病例较多的规则是什么，然后有针对性地删除或改变这些规则。

2）“假阴性”是制定复检规则的关键参数，具有诊断意义的重要参数不能出现假阴性，否则会给临床的诊疗带来风险因此，当降低复检率达到实验室可操作水平时，尽可能地控制漏诊率为最低水平；（3）确保血小板聚集阳性标本无漏诊：造成血小板减少的因素较多，包括真血小板减少（由各种临床疾病所引起）和假性血小板减少（如抽血不当、血小板聚集、巨大血小板等），其中EDTA依赖性血小板减少症（EDTA-PTCP）发生率极低，临床报道发生率大约为0.07%～0.20%，一旦发生极易造成误诊、误治，因此及时发现并处理血小板聚集，为临床提供准确的检测结果非常重要[。