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Transwell® 通透性支持物的 选择和使用手册 contents 目录 总览 选择合适的Transwell膜和合适的孔径 选择合适的Transwell 系统 如何使用Transwell通透性支持物 使用提示 常规使用指南 技术支持 订购信息 聚酯（PET）Tranwell 嵌套 胶原包被的Tranwell-COL嵌套 聚碳酯Transwell嵌套 Snapwell 嵌套 高通量筛选HTS Transwell-24系统 6，12和24孔细胞培养板 HTS Transwell-96系统 02 02 03 06 06 06 07 08 08 08 09 10 10 11 12 总览 02 0.4 μm孔径聚碳酯膜的扫描电镜 在6孔板中的聚酯Transwell透明 嵌套显示膜的清晰度 12mm直径的Transwell嵌套带有 聚碳酯膜 PTFE膜的扫描电镜，显示孔径结构 细胞和组织培养技术在基础和应用生命科学领域的重要性日益提高为尽可能的模拟体内 环境以培养某些特殊的细胞系，新的培养容器和细胞贴附的表面不断涌现顺理成章的， 使用带有多微孔膜的通透性支持物培养这些细胞成为基本的方法通透性支持物可以有效 改善极性细胞的培养，因为这些支持物允许细胞从其基底面和顶面分泌和吸收分子，从而 以更为自然的方式进行代谢。

滤膜作为细胞培养介质来源于Grobstein (Nature, 172:860-872; 1953)关于后肾滤膜诱导的研 究经过长年对不同种类细胞的无数次应用，利用通透性支持物进行细胞培养被认为明显 优于坚固的，不可透过的细胞生长界面对于表皮细胞和其他种类的细胞，利用通透性支 持物在体外培养使得细胞可以在更为自然的极性条件下生长和研究同时提高了细胞的分 化水平，使得体外生长的细胞在形态和功能上更为接近体内的细胞还可以进行运输，吸 收和分泌等细胞功能的研究，因为在通透性支持物上生长的细胞可以很方便且无干扰的接 近其基底面和顶面的细胞膜结构使用通透性支持物进行细胞培养对于实验细胞学研究是 一个无可比拟的工具 选择合适的Transwell® 膜和孔径 Transwell通透性支持物可以提供三种膜材料：聚碳酯（PC），聚酯（PET）和胶原包被的 聚四氟乙烯（PTFE）表1提供了这些膜特性的更多信息 聚酯Transwell-透明嵌套的特点是带有在显微镜下呈透明的膜这些膜经过处理，可以 让细胞更好的贴附和生长Transwell-透明嵌套使细胞在相差显微镜下更易观察，可以 估计细胞的生长状态和单层细胞的形成。

聚碳酯Transwell嵌套提供从0.1um到12.0um多种孔径所有的膜都经过处理，使得细胞 更易贴附 Transwell-COL嵌套湿润时透明的，胶原包被的PTFE膜，使得细胞更易贴附和伸展，同 时在培养的过程中可以观察Transwell-COL含有牛胎盘中提取的等摩尔数混合I型和III 型胶原不同于传统包被技术会形成密封的膜层，康宁专利包被技术使具有生物稳定 性的胶原包裹住滤膜的每一根纤维，从而保持了膜的多孔性 选择孔径 在实验中使用Transwell®通透性支持物时选择合适的孔径也是十分重要的表2总结了通透 性支持物的常规应用和推荐使用的孔径最小孔径的Tanswell膜（0.1um）主要应用于药物 转导研究细胞侵袭，趋化性和运动性研究通常采用3.0um或以上的孔径的Tranwell膜 细胞从膜的孔中迁徙通过的能力与选用的细胞系及培养条件有关，同时也与孔径相关小 于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过对于一些要求严格的实验，康宁建议在实验中 选用一系列孔径作为对照来确定哪种尺寸最适合于你的细胞培养和特殊应用还有一 个方 法就是参照已经发表的文献的推荐若需更多的使用和应用信息， 请访问康宁网站上技术 信息部分的Transwell。

总览 04 表2. 通透性支持物应用选择表 应用推荐孔径 超大分子，离子，水，低分子量溶液，激素，生长因子等 离子通道，酶，转运蛋白，受体，脂类的极性分布 分类和定向靶点 极性的形成和维持 紧密连接的合成和装配 蛋白转换 膜循环 生长因子，激素，抗体，病毒，毒素等受体-培体相互作用 受体定位和药物反应极性 药物对于血管通透性 药物运输通过表皮（Caco-2细胞）和内皮屏障 药物运输通过脑微血管内皮细胞 肿瘤侵袭和转移 克隆化检测 侵袭抑制物 细胞外支架作用 噬菌作用 血液中成形因子的趋药性与趋触性响应 组织巨噬细胞的移动 细胞-细胞相互作用 细胞-底物相互作用 肿瘤异质性 细胞-细胞外支架相互作用 饲养层-干细胞相互作用 转导和渗透性研究 细胞极性 胞吞作用 药物运输 转移潜力和侵袭 趋药性/动力研究 共培养 病毒，细菌和寄生虫对宿主细胞膜的附着 入侵和透过内皮屏障 微生物受体 药物对微生物受体的效应 微生物致病机理 伤口愈合 血管生成 表皮再生 炎症反应 组织重建 粒层细胞培养 类固醇生成 内分泌和旁分泌影响粒层分化，胚囊从透明层孵化，底物结合，滋养层细胞生长 体外受精 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 5.0, 8.0, 12.0um 3.0, 5.0, 8.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 0.4, 1.0, 3.0um 在Transwell聚碳酯膜上的巨噬 细 胞 的 扫 描 电 镜 照 片 （ 由 B.Wetzel, S. Wahl, E. Westbrook 和L. Altma, NIH, Bethesda, MD 惠赠） 总览 05 HTS Transwell系统 HTS Transwell系统是24个或96个独立Transwell嵌套通过一个坚固的，可以由机械臂操作的 支持物连接而成，从而可以作为一个单位来操作。

这使得HTS Transwell系统成为自动操作 系统，高通量药物运输(Caco-2细胞)和毒性研究的理想工具 HTS Transwell-96培养系统 (U.S. Patent No. 6,943,009) 包括以下几个部分：一个96孔嵌套 板，可以选择1.0或8.0um孔径的聚酯膜，或者0.4um, 3.0um, 5.0um孔径的聚碳酯膜；带有可 拆卸的培养液稳定装置的储液板用来加液或换液；检测使用的接收板（黑色或透明）；2 个盖子， 以防止挥发和污染每个嵌套具有0.143 cm2 的生长面积顶面及侧面的大开口便 于添加和取样 HTS Transwell-24 培养系统可以提供处理过的0.4um孔径及3.0um孔径的聚碳酯膜，或0.4um 孔径的聚酯膜，具有对细胞贴附，生长和分化极佳的界面一个一体化的储液板可以减少 在培养过程中的液体处理操作（培养液可以一次性快速换掉）一旦细胞层长满，HTS Transwell-24 嵌套可以转移到一个普通的康宁®24孔培养板上进行实验 SnapwellTM嵌套 Snapwell嵌套 (U.S. Patent No. 5,272,083) 是经过改良的Transwell嵌套，包括12mm 的经组织 培养处理的聚碳酯膜或透明的聚酯膜，以及一个分离环。

这些嵌套主要用于运输和电生理 研究一旦细胞长满，分离环固定的膜可以拆卸，并垂直或水平放置，或置于Ussing培养 室中Ussing培养室可以通过哈佛仪器公司购买： HTS-96 系统是高通量药物转导 研究的理想工具 表3. Transwell® 聚酯膜和聚碳酯膜的额定孔密度 孔径 0.4um 1.0um 3.0um 5.0um 8.0um 聚酯膜 1 x 108孔/cm2 无 2 x 106孔/cm2 4 x 105孔/cm2 1 x 105孔/cm2 聚碳酯膜 4 x 106孔/cm2 1.6 x 106孔/cm2 2 x 106孔/cm2 无 1 x 105孔/cm2 额定孔密度 *数据为额定值，可能有生产流程误差有所不同，为保证实验成功，我们推荐研究者确立自己的实验方法 表4. Transwell 通透性支持物生长面积 嵌套直径 4.26mm 6.5mm 12mm 24mm 75mm 多孔板和培养皿类型 96 well 24well 12well 6well 100mm培养皿 嵌套膜生长面积 0.143 cm2 0.33 cm2 1.12 cm2 4.67 cm2 44 cm2 *数据为额定值，可能有生产流程误差有所不同，为保证实验成功，我们推荐研究者确立自己的实验方法。

HTS Transwell系统为机械操作 而设计 如何使用Transwell® 通透性支持物 06 使用提示 1. 通透性支持物上的细胞形态和密度受滤膜孔径的影响 2. 一些孔径大的膜可以容许细胞穿过 3. 在通透性支持物上生长的细胞的贴附对于起始接种密度很敏感初次使用应接种不同密 度保证最佳生长 4. 在培养之前将通透性支持物在培养基中孵育可以改善细胞得贴附和分布 5. 与塑料培养表面一样，细胞在通透性支持物上仍然需要细胞外支架的包被 6. 透明的Transwell是带有透明的，经组织培养处理的聚酯膜，细胞在相差显微镜下很容易 被观察 7. Transwell-COL带有PTFE膜，经过等摩尔数的I型和III型牛胎盘胶原处理从而形成了覆 盖在滤膜纤维上的具有生物稳定性的胶原骨架这些Transwell嵌套适用于需生物包被的 细胞培养 常规使用指南 1．使用时先将培养液加入多孔板的孔中，将嵌套放入，再将含细胞的培养液加入嵌套内 部，推荐使用的培养液体积列在表5中 2．预先的平衡可以提高细胞的贴附效率将培养液先加入多孔板中，再加入嵌套内培 养板放置于细胞培养的培养箱内至少一个小时，也可以过夜。

接着加入含细胞的新鲜培 养液，放回培养箱培养 3．定期检查培养液体积，并按需补加新鲜培养液 4．Transwell嵌套有三个开口以便于用枪头从下部添加或取用样品 5．单细胞层可以用基本细胞学方法在Transwell嵌套中直接固定和染色避免使用可以溶 解聚苯乙烯，聚酯，聚碳酯等膜材料的溶剂可以在多孔板的孔中放置一系列所需溶剂， 将Transwell嵌套依次浸泡而完成固定和染色的过程在康宁生命科学的网址上可以找到 Transwell 嵌套固定和染色的实验操作程序 嵌套的多孔底部使研究者可以从上层或下层接触到细胞，从而为体外的细胞运输和其他代谢活性研究提供通用的工具 下部空间 Transwell®嵌套 上部空间 多孔膜 首先将培养液加入培养板，再 将 含 细 胞 的 培 养 液 加 入 Transwell嵌套 实用小贴士 如何使用Transwell® 通透性支持物 技术支持 07 6．如果必须将细胞从Transwell嵌套中移走，我们建议同时冲洗和培养板分离试剂要同时 加在Transwell嵌套中和孔中，直到细胞脱落如何从嵌套中移走细胞的Transwell的胰酶 消化步骤的实验操作程序，可以在康宁生命科学网站上的技术部分找到。

7．康宁推荐使用8道的微量移液器来从HTS-96系统中转移培养液这种移液器的设计可以 从孔的上部取走培养液和溶液而不伤害细胞层 8．聚酯和聚碳酯膜上的细胞在固定和染色后，可以使用解剖刀将膜割下做长期保存 9．胶原包被的PTFE膜易碎，在操作此膜时应格外注意可以将预先浸湿的纤维膜放置在 胶原膜下，然后使用解剖刀将膜割下这层纤维膜可对胶原膜起到支持作用 若需进一步了解有关产品和技术的信息，请访问 美国以外的 客户请致电1.978.635.2200，或与下列康宁（中国）有限公司联系 表5：推荐使用的Transwell® 通透性支持物的培养液体积 Transwell 嵌套直径 4.26mm 6.5mm 12mm 24mm 75mm 嵌套膜 生长面积 0.143cm2 0.33cm2 1.12cm2 4。