实验二食用菌原种的制作与培养.docx

实验二食用菌原种的制作1、实验的目的和要求学会原种培养基的配制方法，掌握原种的接种技术，了解食用菌原种与制作的工艺流程和制作的基本技能2、实验内容或原理（1）原种培养基配制工艺流程：培养基配料.装瓶（或装袋）一灭菌一冷却一接种（2）掌握原种与栽培种的接种操作技术接种箱消毒器械消毒无菌接种―菌丝培养3、仪器或试剂等仪器：接种箱、高压灭菌锅、750毫升广口瓶、酒精灯、接种勾等试剂：75%酒精、气雾消毒剂、棉籽壳、木屑、麸皮、石膏粉、棉花等4、实验步骤配方一：麦粒（玉米等）1000克，石膏粉13克，碳酸钙4克a. 称量根据用量和灭菌锅的容量计算后称量，算出各种原料的用量，然后称量按比例称料用500毫升的菌种瓶时，一般每瓶用小麦（干）0.2千克左右b. 漂洗用清水将麦粒漂洗2—3遍，除去灰尘、麦糠等杂物，同时也减少培养基中杂菌的基数c. 浸泡在制种的前一天下午，用1%的石灰水浸泡小麦，夏天一般浸泡10—12小时，春秋季气温低时浸泡15—20小时d. 煮沸小麦捞出后在煮麦锅内煮沸，水沸腾后再煮20分钟左右，当麦粒达到“无白心，不开花”的标准后及时捞出，沥干多余水分煮麦时加水不可偏少，麦粒成熟度是关系麦粒菌种制作成败的关键。

e. 晾晒将麦粒摊开，晾去表面水分，麦粒不沾手时及时收起f. 加辅料把石膏、碳酸钙按比例加入，搅拌均匀g. 装瓶、加棉塞麦粒装至瓶肩即可，棉塞大小、松紧度要适宜h. 灭菌采用高压灭菌，将菌种放入锅内，盖上锅盖，对角旋紧锅上螺旋，并闭排气阀，开始加热，当锅内蒸汽大量排出时再继续排汽3-5min,关闭放气阀.当压力表指针指到0.15Kg/cm2时（灭菌所需压强）开始计时，继续维持该压强30min不过，由于麦粒培养基中杂菌基数大，培养基体积大，热不易穿透，控温灭菌时间应保持在1.5kg、2—2.5小时，才能保证灭菌彻底灭菌是否彻底是影响制种成功率的关键本次采用全自动高压灭菌锅：121°C，30-60min）i. 冷却灭菌结束后，自然冷却，当压力回复到0时，打开锅盖，利用锅体余热烘干棉塞，当培养基温度降低到50C左右时取出，放到干净的地方冷却到常温后才能接种如果温度很高时就取出培养基，瓶内麦粒上会有大量的冷凝水，对菌丝生长不利j. 、将冷却后的培养基移入接种室接种后略）k. 接种将灭菌后原种培养基放进接种室、接种箱或超净工作台内，用紫外灯（或化学药品）进行消毒0.5h以上,关闭紫外灯后20min后，再开始进入接种室内进行接种。

接种是一项技术性很强的工作，需要在无菌的环境中以无菌操作方法进行接种，才能减少污染无菌操作是接种过程中最基本的操作方法，要求操作熟练，动作迅速无菌条件下挑取母种培养基一小块，置于原种培养基中央孔边，随即按原样封口I•菌丝培养接种后的原种，置于25°C的培养室培养3-5天后菌丝即可恢复生长5-7天菌丝开始伸入培养基内当菌丝长满瓶后，即可直接分移栽培种，m.观察记载观察原种菌丝的表面形态特征5、实验的报告要求要求有观察记载数据，完成实验报告与作业6. 作业：总结制作原种过程中应掌握哪些基本技能？实验准备：实验分组：全班分三大组，每大组分3小组实验准备：安排写板书1人，实验任务：每瓶0.2-0.3斤料，每小组按配方称料、配料，每组制作原种5瓶准备材料：1人，购小麦种子12斤、石膏5斤准备用具：1人，原种瓶或袋接种用具：接种铲、锄配方二了解：配方二：棉籽壳78%，麦麸或米糠20%，过磷酸钙1%，蔗糖1%a. 称料：先根据要做原种的数量，算出各种原料的用量，然后称量按比例称料b. 拌料：混合，加水拌料混给予时，先将棉籽壳和玫麸混合在一起，过磷酸钙和糖混溶在拌料用的水中拌料时，边加水边搅拌，边测试含水量。

c. 含水量的测定拌好料后，用手抓一把培养料，捏在手中紧握，手指缝中有水印但以水不往下滴为适，此时含水量为62%-64%d. 装瓶将拌好的培养料装入原种瓶或塑料袋中央，边装边压实（但不得过紧），一直装到瓶肩处为宜e. 擦瓶将瓶口和瓶外粘的培养料擦掉，以免接种后污染杂菌f. 封口用棉塞塞住瓶口或用透气膜包住瓶口，再包一层防潮纸（或牛皮纸），用线绳将瓶口扎好，准备灭菌g. 灭菌灭菌方法同母种的灭菌方法，压强为1.4-1.5Kg/cm2,1.5-2.0hh. 接种挑取母种培养基一小块，置于原种培养基中央孔边，随即按原样封口i. 菌丝培养接种后的原种，置于25C的培养室培养3-5天后菌丝即可恢复生长5-7天菌丝开始伸入培养基内当菌丝长满瓶后，即可直接分接栽培种j. 观察记载观察原种菌丝的表面形态特征。