试剂和培养基配方.doc

附录A试剂和培养基配方1. 稀释液 木规范中的稀释液包括：胰蛋白豚生理盐水溶液（TPS）、磷酸盐缓冲液（PBS,0. 03mol/L, pH7.2）、中和剂溶液、标准硬水（硬度342mg/L）、生理盐水 等1.1胰蛋白腺生理盐水溶液（TPS）胰蛋白豚l.Og氯化钠8. 5g先用900mL以上蒸憎水溶解，并调节pll值在7.00.2 （20C）,最终用蒸催水加至 lOOOmL,分装后，经121C压力蒸汽火菌后使用1・ 2 磷酸盐缓冲液（PBS, 0. 03mol/L, pH7.2）无水磷酸氢二钠2. 83g磷酸二氢钾1. 36g蒸憎水加至lOOOmL将各成分加入到lOOOmL蒸催水中，待完全溶解后，调pH至7. 2,于121C压力蒸气 火菌20min备用1.3标准硬水（硬度342mg/L）氯化钙（CaCl2）氯化镁（MgCl2・6H2O）蒸馆水加至lOOOmL0. 304g0. 139g将备成分加入到lOOOmL蒸憎水中，待完全溶解后，于12PC压力蒸气灭菌20min备用1.4生理盐水氯化钠蒸IS水加至8. 5glOOOmL将氯化钠加入到lOOOmL蒸馅水中，待完全溶解示，于121C压力蒸气灭菌20min备用。

2. 革兰染色液笫1液：结晶紫溶液结晶紫乙醉饱和溶液 100ml,结晶紫4g〜8g95% 乙醉 100mL 1%草酸胺溶液第2液：卢戈硕液碘化钾2g碘lg蒸憎水 200mL第3液：脱色剂（1） 95%乙醇（2）丙酮乙醇溶液lOOmL95%乙醉70mL丙酮30mL第4液：稀释石炭酸复红液碱性复红乙醇饱和溶液10mL碱性复红5g~10g5%石炭酸溶液90mL蒸憎水900ml,3. 孔雀绿与沙黄芽抱染色液第1液5. 00%孔雀绿水溶液笫2液0. 5%沙黄水溶液4. 有机干扰物牛血清白蛋白30g或3g蒸饱水 lOOOmL溶解后用微孔滤膜（孔径为0.45pm）滤过除菌，冰箱保存备用5. 营养琼脂培养基蛋白腺10g牛肉膏5g氯化钠5g琼脂15g蒸馆水 lOOOmL除琼脂外其他成份溶解于蒸镭水中，调pH至7.2~7.4,加入琼脂，加热溶解，分装, 于121C压力蒸汽火菌20min备用7.营养肉汤培养基蛋白豚10g 牛肉膏5g氯化钠5g蒸彳留水 lOOOmL将各成份溶解于蒸镭水中，调pH至7. 2〜7. 4,分装，于121C压力蒸汽灭菌20min 备用8•胰蛋白豚大豆肉汤培养基(TSB)胰蛋白月东 1.5% (g/100mL)大豆蛋白腺 0. 5% (g/100mL)氯化钠 0.5% (g/100mL)用蒸徭水配制而成，调节pH为7.20.2,经121C压力蒸汽灭菌后使用。

9•胰蛋白腺大豆琼脂培养基(TSA)胰蛋白腺1.5% (g/100mL)大豆蛋白豚0.5% (g/100mL)氯化钠0.5% (g/100mL)琼脂1.6% (g/lOOiriL )用蒸僧水配制而成，调节pll为7.20.2,经121C压力蒸汽灭菌后使用10.品红亚硫酸钠培养基蛋白月东log酵母浸膏5g牛肉膏5g乳糖10g琼脂15g〜20g磷酸氢二钾3. 5g无水亚硫酸钠5g5%碱性品红乙醉溶液 20mL蒸镭水 lOOOmg以上备成分蒸催水溶解，调pll至7. 2〜7. 4,装瓶，经121C压力蒸汽灭菌后使用11 •漠甲酚紫蛋白陈培养液蛋白豚10g葡萄糖7. 5g蔗糖 2. Og可溶性淀粉1.5g1瞬臭甲酚紫乙醇溶液1.3mL蒸镉水至lOOOmL将蛋白腺、葡萄糖、蔗糖溶解于蒸镭水中，调pH至7. 2〜7. 4,加入1%漠甲酚紫乙醉 溶液，摇匀后，分装每管5mL,于115C压力蒸汽灭菌30mino置4C冰箱备用12. 嗜热脂肪杆菌恢复琼脂培养基蛋白豚10g牛肉膏可溶性淀粉lg匍萄糖lg琼脂20g蒸锢水 lOOOmL以上各成分蒸镭水溶解，调pH至7.0〜7. 2,装瓶，经115C压力蒸汽灭菌30min后使 用。

13. 沙堡琼脂培养基葡萄糖40g蛋白腺10g琼脂20g蒸镉水 lOOOmL将上述成分混合后，加热至完全溶解，调pH至5. 60. 2,于115C压力蒸汽灭菌30min 备用14.沙堡液体培养基葡萄糖40g蛋白豚10glOOOmL蒸僧水将上述成分混合后，加热至完全溶解，调pH至5. 60. 2,于115C压力蒸汽灭菌30min 备用15・麦芽浸膏琼脂培养基(MEA)麦芽浸膏30g3g大豆蛋白月东琼脂15g双蒸镭水加至 lOOOinL将上述成分制成溶液与121C,15min灭菌,灭菌后无菌调节pH至6. 90. 2备用16・麦芽浸膏肉汤养基(MEB)麦芽浸膏30g双蒸徭水加至lOOOmL将上述成分制成溶液与121 C,15min灭菌，灭菌肩无菌调节pH至5. 60. 2备用17.人淋巴细胞维持培养基1640干粉培养基10X10. 4gL谷氨酰胺2. 93g丙酗酸钠1. 004g青霉素80万单位链霉素100万单位碳酸@钠20. 0gHopes23. 9g去离了水加至lOOOOmL除青霉素、链霉素外，其余备成分溶于蒸憎水中，调pH至7.0〜7.2, 115C压力蒸汽 灭菌20min备川临川前加入青霉素、链霉素灭菌溶液。

18.人淋巴细胞完全培养基在人淋巴细胞维持培养基中加入10%无菌小牛血清。