β-连环蛋白在急性白血病骨髓细胞的表达及其意义【医学论文】.doc

医学论文-β-连环蛋白在急性白血病骨髓细胞的表达及其意义作者：陈胜梅，孙慧，刘延方，张秋堂【摘要】 为了探讨 β-连环蛋白在急性白血病骨髓细胞的表达及其意义，应用流式细胞术和免疫组织化学染色两种方法，检测了 20 例初治急性白血病患者骨髓细胞 β-连环蛋白的表达水平，同时用免疫组织化学染色方法检测了上述细胞的细胞增殖指数 Ki-67 的表达水平结果表明：与对照组相比，β-连环蛋白在急性白血病骨髓细胞的表达明显升高（P70％，细胞浆和/或核内见大量深黄色颗粒，浆和（或）核有时可被颗粒掩盖而不显每片统计 500 个细胞中的阳性细胞数及总细胞记分，阳性率=阳性细胞数/500×100%，平均记分=总细胞记分/500统计学处理经 SPSS (10.0 版)统计软件进行统计学分析，统计数据用“均数±标准差”（X±D）表示，急性白血病组和对照组的比较采用独立样本 t 检验，β- catenin 和 Ki-67 的表达相关性分析采用二元变量的相关分析（Pearson 相关系数）以 α=0.05 为显着性检验水准结果β-catenin 在骨髓单个核细胞的表达免疫组织化学染色方法检测结果 β-catenin 在对照组骨髓单个核细胞的表达大部分细胞呈阴性表达，少部分呈弱阳性，仅见胞浆弥散浅黄着色且着色不均匀；在急性白血病患者骨髓单个核细胞中，β-catenin 在胞浆和胞核的表达呈强阳性，以胞核表达为主，仅有极少数细胞呈阴性表达，两组间的表达有明显的差异性（P<0.05）（表 1，图 1）。

Table 1. Expression of β-catenin in acute leukemic cells by immunocytochemical assay（略）　　流式细胞术检测结果 考虑到免疫组织化学染色结果主观性较强的因素，我们同时应用流式细胞术检测了 β-catenin 的表达，排除参照不同的客观影响后，无论急性白血病组还是对照组，都未能检测到其胞膜的表达，而经过透膜处理后，进一步用抗 β-catenin 单克隆抗体染色后用流式细胞仪检测，β-catenin 在急性白血病骨髓细胞的表达显着高于对照组（P<0.05）（表 2，图2）Table 2. Expression of β-catenin in acute leukemia bone marrow cells by flow cytometry in MFI（略）Ki-67 在骨髓单个核细胞的表达Ki-67 在急性白血病骨髓单个核细胞的表达与对照组相比有明显的增强（P<0.05）（表 3），但两者阳性细胞的表达强度均显示高低不等Table 3. Expression of Ki-67 in acute leukemic cells by immunocytochemical assay（略）β-catenin 与 Ki-67 表达的相关性β-catenin 与恶性肿瘤的发生发展有关，Ki-67 反映了细胞的增殖状态，分析 β-catenin 与 Ki-67 在急性白血病表达的相关性结果显示两者呈明显的正相关，Pearson 相关系数 r= 0.845。

在急性白血病中，β-catenin 表达高时，Ki-67 的表达也有增高的趋势（图 3）讨论β-catenin 是一种多功能的蛋白质，具有参与细胞黏附和介导信号转导的双重功能，并与肿瘤的发生发展及浸润密切相关在正常个体中，β-catenin和钙黏蛋白形成复合体，介导同型细胞的黏附，维持细胞的稳定［3］；同时，β-catenin 作为 Wnt/β-catenin 信号通路的关键成员在介导信号转导过程中调控细胞的增殖和凋亡［4］而在恶性肿瘤中，β-catenin 的表达呈现明显的异质性，促使细胞异常增殖，还可使细胞之间的黏附性减弱，侵袭性增强［5，6］β-catenin 在上皮起源肿瘤中的作用已基本明确，而对其在血液系统恶性疾病中的作用研究并不多见Chung 等［7］的研究显示：在白血病细胞系中β-catenin 的表达水平有明显异质性，在 T-ALL、Jurkat、Molt-4、SuDHL4 和SuDHL5 中 β-catenin 高水平表达，而在 HL-60 细胞系中 β-catenin 表达水平很低由于细胞系的特性与活体内白血病细胞已有不同，Jamieson 等［8］研究了 β-catenin 在正常人和 CML 患者（分为慢性期，加速期，急变期）造血干细胞和骨髓前体细胞的表达，结果显示：和慢性期相比，β-catenin 在 CML 的加速期和急变期的骨髓细胞核中总表达明显增加。

本研究在前两者的基础上直接以急性白血病病人骨髓白血病细胞为对象，进一步探讨 β-catenin 在急性白血病中的作用在急性白血病的骨髓细胞中，β-catenin 的表达明显高于对照组并出现由胞浆向胞核内的转位和胞核内的积聚，这一结果提示 β-catenin 在白血病的发病中起作用Ki-67 作为一种核增殖抗原，由于其出现于除 G0 以外的 G1、S、G2 和 M 期的细胞周期中，并在有丝分裂后迅速裂解或失去抗原决定簇，能较可靠地全面反映细胞群体的增殖活性，是判断细胞增殖活性的一种客观指标和特异性指标［2］在急性白血病的骨髓细胞中，Ki-67 的表达与正常人相比有明显的增高，并且 β-catenin 表达高的细胞伴随有 Ki-67 的表达增高国外的进一步的研究发现，抑制 β-catenin 的活化转录后，低表达 β-catenin 的 HL-60 细胞生长增殖及集落形成能力不受影响，但高表达 β-catenin 的 Jurkat 细胞的生长增殖及集落形成能力受到抑制［7］；并且在anti-Fas、星形孢菌素（staurosporin，通过 PKC 相关机制诱导凋亡）、重组可溶性 TRAIL（活化膜 TRAIL 受体诱导凋亡）和拓扑异构酶Ⅱ相关药物依托泊苷作为凋亡诱导剂处理 Jurkat 细胞后，在诱导的细胞凋亡过程中，β-catenin被剪切、裂解，表达水平降低［9］。

从目前的研究结果推测，β-catenin 的异常表达使细胞的增殖明显增强，而细胞凋亡受到抑制在急性白血病的发病机制中，β-catenin 可能通过促使白血病细胞异常增殖参与了急性白血病的发生和发展参考文献】1Maretto S，Cordenonsi M，Dupont S，et al. Mapping Wnt/ β-catenin signaling during mouse development and in colorectal tumors. Pro Natl Acad Sci USA，2003; 100: 3299-33042Borre M，Bentzen SM，Nerstrom B，et al. Tumor cell proliferation and survival in patients with prostate cancers followed expectantly. J Urol，1998; 159:1609-16143Hazan RB，Norton L. The epidermal growth factor receptor modulates the interaction of E-cadherin with the actin cytoskeleton. Biol Chem，1998; 273: 9078-90824Olmeda D，Castel S，Vilaro S，et al. β-catenin regulation during the cell cycle: implications in G2/M and apoptosis. Mol Biol Cell，2003; 14: 2844-28605Jones LJ，Veale RB. Redistribution of beta-catenin in response to EGF and lithium signalling in human oesophageal squamous carcinoma cell lines. Cancer Cell Int，2003; 3: 13-206Kikuchi A. Regulation of beta-catenin signaling in the Wnt pathway. Biochem Biophys Res Commun，2000，268:243-2487Chung EJ，Hwang SG，Nguyen P，et al. Regulation of leukemic cell adhesion，proliferation，and survival by β-catenin. Blood，2002; 100: 982-9908Jamieson CHM，Ailles LE，Jones C，et al. The Role of beta-catenin in Chronic Myelogenous Leukemic Progenitor Expansion［abstract］. Blood，2003; 102: 1b-512b9Hwang SG，Lee HC，Trepel JB，et al. Anticancer drugs- induced apoptotic cell death in leukemia cells is associated with proteolysis of β-catenin. Leuk Res，2002; 26: 863-871。