医学检验-粪便标本处理.doc

粪便标本粪便标本中常见的病原菌:革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌金黄色葡萄球菌 伤寒及其他沙门氏菌厌氧链球菌种 志贺菌属结核分枝杆菌 致病大肠埃希氏菌产气荚膜杆菌 弧菌属菌种艰辨梭菌气单胞菌种白色念珠菌邻单胞菌小肠结肠炎耶尔森菌弯曲菌沙门-志贺氏菌:接种HE及麦康凯平板,35℃、18～24小时后检查平板,有疑似菌落,接种双糖,细菌分纯后用细菌鉴定仪上板鉴定后与沙门、志贺氏菌因子血清凝集,以确诊. 霍乱弧菌培养:取疑似患者粪便接种于碱性蛋白胨水中,进行增菌,同时划线接种于碱性琼脂平板/双洗平板血琼脂平板,孵育.增菌培养孵育6小时后,取菌膜移种于上述平板,进行分离培养,并同时做涂片,行革兰染色和悬滴标本,检查形态和活动力.各种分离平板在孵育18-24小时观察菌落,挑取可疑菌落,先与生理盐水混匀,观察有无自凝现象.再用O1群霍乱多价血清作玻片凝集试验. 如发现霍乱病人,立即向当地防疫部门提供及时准确的信息. 致病大肠埃希氏菌培养:引起腹泻的大肠杆菌有四种--ETEC、EPEC、EIEC、EHEC.取液体状、脓血或糊状粪便或肛拭子划线接种于麦康凯或伊红美兰及血琼脂平板上,35℃孵育18-24小时,挑选乳糖发酵菌落5个,移种于KIA和MIU孵育过夜,并同时进行细菌分纯，用细菌鉴定仪上板鉴定并进行血清学分型. 副溶血弧菌培养:取粪便接种于副溶血弧菌增菌液中,6-8小时后接种于TCBS和SS琼脂平板上,35℃孵育18-24小时后,观察菌落,挑取TCBS上绿色微隆、浑浊、湿润菌落,SS上挑取无色透明、不易挑起菌落进行分纯后用细菌鉴定仪上板鉴定. 真菌培养:真菌性腹泻多继发于抗生素治疗后,常见于白色念珠菌、球拟酵母菌.将标本接种于含氯霉素的沙保氏琼脂及血琼脂平板,置25-30℃孵育24-48小时,根据菌落形态及涂片革兰氏染色所见结果,决定鉴定方法. 菌群失调及菌交替症:根据临床提示粪便培养需选用数种培养基,包括强选择性和弱选择性肠道培养基、需氧及厌氧血琼脂平板、沙保氏琼脂等,按各类细菌分别进行培养鉴定,并观察其数量变化.3、操作流程(沙门-志贺氏菌属检查) 粪便或肛拭子 ↓ ↓ 分离培养 增菌培养 HE及麦康凯琼脂分离培养血平板分离纯培养 血清学鉴定 细菌鉴定 药敏试验 报告 4、报告方式: 以分离目的菌种的结果而决定,如:目前常规以SS/HE和中国蓝或伊红美兰分离粪便中的致病菌,阳性者应报告“沙门菌或志贺氏菌”,阴性应报告“未检出沙门菌属或志贺菌属”.其他培养结果报告方式与上述原则基本相同.5、注意事项（1） 人类肠道中的细菌种类繁多，数量亦多，在健康人肠道内经常寄居的大量的细菌，一旦肠道发生病理改变时，就可能侵入病变部位而引起疾病。

2） 提高阳性检出率必须注意：标本要采集新鲜的、陈旧标本大大影响阳性检出率3） 痢疾患者要采集大量脓血部位进行培养4)切勿粪尿混合否则也会影响阳性检测率穿刺液培养常见的病原菌革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌金黄色葡萄球菌淋病奈瑟氏菌 A群链球菌流感嗜血杆菌肺炎链球菌大肠埃希氏菌草绿色链球菌产气肠杆菌肠球菌伤寒及其他沙门氏菌厌氧链球菌肺炎克雷伯氏菌结核分枝杆菌产碱杆菌产气荚膜芽胞杆菌铜绿假单胞菌放线菌不动杆菌念珠菌梭杆菌拟杆菌 当留取标本时,为防止穿刺液凝固,可在无菌容器内预先加入灭菌肝素,再注入各种穿刺液. (1) 涂片检查:标本如为浆液,可经3000r/min离心,取沉淀涂片.如为脓液,可直接涂片,涂片固定后,做革兰氏染色和抗酸染色. (2) 除常规一般培养外，应根据临床提示的要求增加真菌和结核培养,穿刺液含细胞数量较少,必须做增菌培养.如标本外观非脓样,可加大接种量.平板经35℃24-48小时孵育后,如有细菌生长,按常规鉴定,无菌生长的平板还应继续孵育至48小时.方可报告阴性.浆膜腔积液采集穿刺液（胸水、腹水、关节液、鞘膜液） 涂片革兰氏染色 血平板、麦康凯 巧克力平板 35度18-24h，5%-10%CO2 初步报告结果 挑取可疑菌落分离培养菌种鉴定,药敏试验 报告结果4、报告方式:穿刺液中检出细菌均应报告鉴定结果及药敏试验.5. 注意事项（1） 穿刺液盛于含有抗凝剂的试管或小瓶中，充分混合后，立即送检或置4度冰箱保存。

2） 应根据临床要求选择相应的培养基1） 对疑有淋病性关节炎患者之关节液，采集应即刻送检或床边培养为佳脑脊液标本正常人体脑脊液是无菌的当人体患有脑脊髓膜炎症时，在脑脊髓液中可以出现病原菌常见的病原菌有细菌、真菌和结核菌等，引起脑脊髓膜炎的微生物主要有：革兰氏阳性菌 革兰氏阴性菌金黄色葡萄球菌 脑膜炎奈色氏菌Ｂ群链球菌 卡他布兰汉菌Ａ群链球菌 流感嗜血杆菌肺炎链球菌 肠杆菌科菌种消化链球菌 脑膜败血性黄杆菌炭疽芽胞杆菌 假单胞菌结核分枝杆菌 无色杆菌产单核细胞李斯特菌 拟杆菌新型隐球菌、白色念珠菌 腰穿法收取脑脊液3～5ml，盛于无菌试管，应立即送检，否则影响检出率，同时注意保温，不可置冰箱保存，会使病原菌死亡，尤其是脑膜炎奈色氏菌、肺炎链球菌及流感嗜血杆菌 实验室接到标本须立即做直接涂片镜检和培养。

(1) 肉眼观察和涂片检查 首先观察脑脊液的外观，除结核性脑膜炎外，其他细菌引起的化脓性脑膜炎多呈明显混浊，经抗生素治疗后，亦可不混浊或轻度混浊 革兰氏染色：混浊或脓性脑脊液可直接涂片，染色镜检无色透明的脑脊液，应以3000r/min离心，10-15min，取沉淀物涂片，行革兰氏染色，镜检根据染色反应及细菌形态特征，常可初步提示感染细菌的种类 结核分枝杆菌涂片检查：脑脊液以4000r/min离心30min，取沉淀物作小而集中的涂片；亦可将脑脊液在室温下静置数小时或18-24h，待形成纤维网后，取此脑脊液倾于新的无划痕的洁净载玻片上，多余的液体任其溢出载玻片，使纤维网自然展开，干燥、固定后用萋纳氏染色 新型隐球菌涂片检查：脑脊液的离心沉淀物行墨汁负染色，可在黑色背景中，见到菌体周围有透明的荚膜，似一晕轮，有时可见到出芽的酵母菌新型隐球菌，特别是荚膜窄者易与白细胞相混淆，可用0.1%甲苯胺兰染色法加以区别新型隐球菌的菌体呈红色园球状，荚膜不着色，白细胞染成深蓝色 (2) 培养 A． 一般培养应抽2—3ml放如血培养瓶中（同血培养）主要用于脑膜炎奈色氏菌、链球菌、葡萄球菌、大肠埃希氏菌、产气杆菌、流感嗜血杆菌等细菌的分离。

对有的未直接打入血培养瓶的标本，用接种环挑取混浊脑脊液或经离心沉淀的沉淀物，分别接种于血琼脂平板及巧克力琼脂平板上，置35℃CO2环境中培养18-24h，检视有无细菌生长根据菌落特点及染色后镜检的特征，初步判定细菌的种类，并进一步分离纯培养后配制菌悬液上板条并做细菌鉴定及血清学检查，并作出报告 血平板和巧克力平板是分离用的最基本培养基巧克力平板需放入CO2环境中，有利于检出脑膜炎奈色氏菌、肺炎链球菌及嗜血杆菌等 结核分枝杆菌培养：取离心后的沉淀物，接种罗－琴氏培养基，斜置于35℃温箱，孵育7天后，直立，继续孵育生长至八周，无菌落生长，发阴性报告；有菌落生长，鉴定后发报告 真菌培养：取经离心后的沉淀物，接种于科玛嘉显色平板上，放在35℃孵箱中孵育，一般2-3天即可出现菌落极少数真菌需培养2-3周，才能出现菌落，甚至培养阴性根据菌落形态、涂片所见和细菌鉴定结果等进行鉴定3．操作流程： 脑脊液 混浊液可直接检验清亮液应离心取沉淀 涂片、革兰氏染色、镜检 必要时作抗酸染色或墨汁染色法 血琼脂平板 巧克力平板 35℃18-24h CO2环境下35℃18-24h 观察菌落 涂片检查 细菌鉴定/药敏试验 血清学鉴定 发出报告4、 报告结果： 无论是涂片还是培养，一旦检测到阳性应立即通知临床医师。

培养并经鉴定的结果报告“×××菌”，同时报告药敏试验结果5、 注意事项（1） 由于脑脊液奈瑟氏菌离体后容易自溶，流感嗜血杆菌等也易死亡，故不论是做涂片镜检，还是进行培养检查必须立即送检2） 标本若混浊，最好进行床边培养3） 做好治疗前采集标本4） 要切实防止皮肤表皮葡萄球菌和其它细菌的污染、尿液标本1、标本的采集 ① 中段尿：女性采样前应先用肥皂水或0.1％高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口；男性须翻转包皮冲洗，用0.1％新洁尔灭消毒尿道口．灭菌纱布擦干后收集标本 ② 导尿管导尿采样可减少污染对留置导尿者，可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用空针细针头斜穿管壁抽吸尿液或消毒后解开接口，弃去导尿管前段尿被、留无污染的膀胱内尿液数毫升送检不可从集尿袋的下端管口留取标本 ③送检标本以晨起第一次尿液为佳 ④ 室温下尿标本耽搁稍久，可致尿内细菌浓度明显增加而影响病原菌与污染菌的区分不能立即送检者，可暂存4℃冰箱正常人体中，膀胱中的尿液是无菌的，从膀胱穿刺取出的尿液业应是无菌的尿液经尿道排出时，受到尿道中细菌的污染而混有细菌取经尿道排出的中段尿，细菌数不会超过10^3CFU/ml。

患有泌尿系感染时，尿中的菌数高于10^4-5CF。