槐米中芦丁的提取和精制(2021)实验报告.docx

精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -试验一、槐米中芦丁的提取、精制和鉴定（一）试验目的要求1. 制备芦丁，供药用；2. 通过芦丁的制备，把握黄酮类化合物的提取分别的原理和操作；3. 熟识重结晶技巧；4. 明白和把握黄酮类化合物的一些主要性质和鉴定方法；（二）试验的基本原理1. 芦丁的提取原理利用芦丁结构中含有多个酚羟基，呈酚酸性，能在碱水中溶解的性质，可用碱性溶剂进行提取，提 取液加酸后可沉淀析出（碱溶酸沉法） ；也可利用芦丁在冷水中溶解度小，在热水中溶解度大的性质进行提取；2. 芦丁的分别原理利用芦丁结构在冷乙醇中溶解度小，在热乙醇中溶解度大，以及在热水中溶解度大，在冷水中溶解度小的性质分别；芦丁用溶剂加热溶解后，趁热抽滤，滤液放冷后能析出而达到分别的目的（如不纯可再重复操作进行分别） ；也可采纳醇溶水沉法进行精制；3. 芦丁的鉴定原理（ 1）利用吸附薄层色谱的分别原理，芦丁与芦丁对比品在同一条件下进行绽开，显色，以达到鉴定芦丁的目的；（ 2）通过专属的化学显色反应（如三氯化铝显色反应） ，确定芦丁的成分类型（黄酮类） ；(三) 试验内容1. 用碱提法、水提法、醇提法提取槐米中芦丁；2. 用酸沉法和冷却过饱和法分别芦丁；3. 溶剂重结晶精制芦丁；4. 薄层色谱法和显色反应鉴定芦丁(四) 试验药材仪器与试剂1. 试验药材 槐米 20g；2. 仪器：磁力加热搅拌器、旋转蒸发仪、粉碎机、 500ml 烧杯， 1000ml 烧杯， 50ml 烧杯， 250ml园底烧瓶、 500ml 园底烧瓶、 100ml 量筒、 50ml 量筒、 100ml 锥形瓶、 50ml 锥形瓶、研钵、移液管、 减压过滤装置，布氏漏斗，抽滤瓶、层析缸等；3. 试剂：硼砂、氧化钙、 HCI 、三氯化铝、甲醇、乙醇、乙醚、丙酮、甲酸、滤纸、 PH 试纸等；（五）试验步骤1.提取（水提取法）称取槐米粗粉 20g，在研钵中研碎后放入 500ml 烧瓶中，加水 200ml ，用磁力加热搅拌器加热煮沸 30min ，趁热过滤；残渣同法操作一次，合并两次滤液，放置冰箱中析晶，待全部析出后，减压抽滤，用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，抽干，得粗制芦丁，干燥，称重，运算得率；2.精制（醇 -水重结晶法）取粗制芦丁 1g，置于 250ml 园底烧瓶中，加 80%乙醇 30ml 加热回流 15 分钟，趁热抽滤；滤液置250ml 烧杯中，向滤液中加蒸馏水（约 3~4 倍量）至溶液呈明显混浊，室温放置，抽滤得精致芦丁；用少量蒸馏水洗涤芦丁结晶，晾干，称重；第 1 页，共 7 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -(六) 过程与现象记录Day 1 （ 2021-05-07 ）1. 提取①称取研碎的粗槐米 20.02g，组装仪器；②原料放入 500mL烧瓶中加水 200mL（1-2），磁力搅拌加热；烧瓶中为咖啡色悬浮液，有甘苦气味，沸腾前不断产生小气泡上，液体中有明显漩涡（ 1-3 ）；102℃沸腾，产生大量气泡，药渣翻动，漩涡被气泡遮盖（ 1-4 ）；加热过程中经常停止沸腾，续略升温 2~3℃；随着时间的延长，液体颜色加深；煮沸规程中应掌握液量，过少难以提出药品，过多简单喷出瓶口；③最初用抽滤法分别残渣（ 1-5 ），但是溶液很稠且含糖分较多，难以流下（ 1-6 ），并且易堵塞和冲破滤纸，仍慢慢冷却；后改用离心法， 5000r,15min(1-7)，成效略好，但是溶液仍是冷却，溶解的提取物较少；滤液为深黄色色，粘稠，气味深厚甘甜；④再次将滤渣至于放入 500mL烧瓶中加水 200mL 磁力搅拌加热 30min，液体颜色略比第一次深；⑤将两次得到的浸液（约 300mL）收集放入冰箱备用；Day 2 （ 2021-05-08 ）2 ． 精制1.将粗提物抽滤（ 1-7 ）（ 1-8 ）（ 1-9 ），干燥得粗制芦丁（ 1-10 ）；2.取粗制芦丁 1.008g，置于 250ml 园底烧瓶中，加 80%乙醇 30ml，加热回流 15 分钟（ 1-11），加热前没有充分分散固体粗提物，趁热抽滤（ 1-12 ），得到黄色油状液体（ 1-13 ）；2.另旋转蒸发粗提物的滤液（ 1-14 ），没有产物；Day 3 （ 2021-05-14 ）3 .鉴定（ 1）点滴显色反应 从放置一周的粗提物中取芦丁的甲醇溶液（供试液）分别点在滤纸上，挥去溶 剂，紫外照耀，光吸取明显（ 1-15），然后分别添加供试液芦丁的甲醇溶液和显色剂 2%三氯化铝乙醇溶液，显黄色（ 1-16 ），在紫外灯下λ 365nm观看有明显亮斑（ 1-17 ）；（ 2） 薄层色谱鉴定吸附剂： 硅胶 GF254薄层板（ 5.0cm X 10.0cm ）；第 2 页，共 7 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -样 品： 自制芦丁（用甲醇溶解，浓度约 1mg/ml ）对比品： 芦丁对比品的甲醇溶液；绽开剂： 三氯甲烷 - 甲醇 - 甲酸（ 7∶ 3∶ 0.5 ）显 色： a.先在可见光下观看，然后在紫外光下观看，有明显紫外吸取； （365nm 紫外灯下观察）b.遮挡硅胶板左侧喷三氯化铝试剂（ 1-18 ）， 365nm 紫外灯下观看， 右侧有显色剂呈黄色，左侧有明显紫外吸取（ 1-19）；4 . 留意事项(1) 硼砂因能与芦丁中的邻二酚羟基结合，起爱护邻二酚羟基，不被氧化破坏的作用；试验证明，提取时加入硼砂，产品的质量会好些；(2) 石灰乳既能达到碱溶解提取芦丁的目的，仍可以除去槐米中大量的粘液质和酸性树脂（形成钙盐沉淀），但 PH不能过高和长时间煮沸，由于会导致芦丁的水解而开环和形成钙鳌合物，影响产品的质量和产率；(3) PH 过低（酸性太强）会使芦丁形成洋盐而收率降低；(4) 称量芦丁时， 先将带滤纸的漏斗称重， 再将盛样品的带滤纸的漏斗称重， 差重即为样品的重量；（七）结果运算及分析产率 小漏斗 +滤纸重 29.69g抽滤后小漏斗 +滤纸+样品重 30.20g样品净重 0.51g产率=（0.51/1.008）100%=50.60%比移值 Rf=3/5.75=0.522分析： 1、水提法不能充分溶解芦丁；2、精制时粗提物集合成固体颗粒，没有充分溶解；3、抽滤、转移等过程的缺失；（八）心得体会第一次做这样长时间的试验，慢慢喜爱上了试验室这样寂静的气氛，在这里做试验，只需要关注操作和试验过程，摸索、分析反应机理和得到某个结果的缘由，不需要考虑试验之外的那些世俗和喧嚣；1-1 1-2 1-3第 3 页，共 7 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -1-5 1-61-8 1-91-111-141-121-15第 4 页，共 7 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -1-17 1-181-192-1 2-2 2-32-4第 5 页，共 7 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -3-1 3-2 3-33-4 3-5 3-63-7 3-8 3-93-10 3-11 3-12第 6 页，共 7 页 - - - - - - - - - -精品word 可编辑资料 - - - - - - - - - - - - -3-13第 7 页，共 7 页 - - - - - - - - - -。