常见野生药用植物的抗氧化性活性测定.docx

常见野生药用植物的抗氧化性活性测定姓名：刘焱班级：药剂12-2学号：201204121041学院：化学与制药工程学院大青叶和野生苦菊的抗氧化性活性测定1•前言1.1实验目的1. 熟悉专业文献的检索方法2. 熟练设计天然药物的提取方法3. 掌握体外抗氧化活性实验筛选方法4. 了解药理活性与化学成分之间的关系1.2实验材料1.2.1大青叶 中文别名：路边青、土地骨皮、山靛青、鸭公青 二名法:Clerodendrum cyrtophyllum Turcz.界：植物界 门：被子植物门(Magnoliophyta) 纲：双子叶植物纲(Magnoliopsida),又称木兰纲亚纲：菊亚纲(Asteridae) 目：唇形目 (Lamiales) 科：马鞭草科(Verbenaceae)亚科：牡荆亚科(viticoideae briq) 族：大青族(Clerodendreae Briq.)属：大青属(Clerodendrum Linn.) 亚属：大青组、垂序系 种：大青 分布：产中国华东、中南、西南(四川除外) 各省区朝鲜、越南和马来西亚也有分布大青叶，中药名主治:热毒发斑、丹毒、咽喉肿痛、口舌生疮、疮痈肿毒等症。

近年来此药在临床上广泛应用，除可用治上述诸症外，又可用于痰热郁肺、咯痰 黄稠;尤常用于流行性乙性脑炎，既可单味应用于预防，又可配合柴胡、银花、 连翘、板蓝根、玄参、生地等，能清解气分、营分的热毒，可用治各种乙脑，而 以偏热型较为合适中国各地市售的大青叶品种甚多，植物来源各异，又：爵床 科植物马蓝十字花科植物菘蓝及大青蓼科植物蓼蓝豆科植物木蓝以上植 物的叶，都做为大青叶使用，也均能作为制青黛的原料，除木蓝外，其根均作为 板蓝根使用化学成分】叶含靛甙(indican),靛甙先水解为吲哚醇，再经空气氧化成靛蓝(inidgo).又 含靛玉红(indirubin) •路边青叶含黄酮类•蓼蓝全草含黄色素及鞣质，根含 蔥醌类.菘蓝叶含色氨酸(Trypto-phan)、靛红烷B (Isatan B，菘蓝甙B)、 葡萄糖芸苔素(Glucobrassicin)、新葡萄糖芸苔素(Neoglucobrassicin)、 葡萄糖芸苔素-1-磺酸盐(GlucobrassicinT-sulfonate)、靛蓝(Indigotin)、 腺甙(Adenosine)、色胺酮(Tryp tan thrin).尚含 0 -谷甾醇(0 -Si tos terol)、 Y -谷甾醇(Y -Sit os terol)、棕榈酸(Palm it ic)、蔗糖(Sucrose)等.蓼 蓝全草、草大青叶、马蓝叶均含靛甙(Indican).靛甙水解后生成吲哚(Indoxyl)， 吲哚经氧化即生成靛蓝.从青黛中分离出靛玉红.1・2・2・野生古菊别称：苦苣、苦菜、狗牙生菜英文名称：Ruccola salad 拉丁名：Lactucaversicolor(Fisch.)Sch.Bip.苦菊为菊科菊苣属，以嫩叶为食 的栽培种，一二年生草本植物。

学名Cichorium endivia L.，每100g嫩叶含水 分95.1g、蛋白质1.2g、钙77mg及维生素等营养物质适生食、煮食或作汤 苦苣叶披针形头状花序，约有小花20朵，花冠淡紫色，雌蕊柱头双叉状淡蓝 色，雄蕊5,连成筒状，花药淡蓝色种子短柱状，灰白色，千粒重1.6g种子 发芽力可保持10年，生产中多采用保存1-3年的种子播种1.3•实验原理近年的研究结果表明，在生物体内，需氧代谢的氧化还原反应所产生的羟 自由基，可以引发不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应，损伤膜结构及功能并引起 各类疾病；超氧自由基能损伤生命大分子而导致各种疾病关于天然产物抗氧化 活性的研究十分引人注目，从天然材料提取、精制而得到的产品 天然产物对人体的多种疾病往往具有很好的治疗、预防等药理作用和保健功能据报道， 自然界中的植物中存在具有多种生物活性的天然产物，其中一些天然产物在抗 氧化性、清除自由基作用方面有突出的表现，这对于抗癌、防癌、抗衰老、预防 心血管疾病，提高人民身体健康会产生积极的作用因此，研究自由基的检测方 法并探讨物质对自由基的清除作用具有重要意义°DPPH・（二苯代苦味酰自由基） 分析法被广泛用于清除自由基物质性质的研究，DPPH •在有机溶剂中是一种稳定 的自由基，其孤对电子在517nm附近有强吸收（显深紫色）。

当有机清除剂存在时, 孤对电子被配对，吸收消失或减弱，通过测定吸收减弱的程度，可评价自由基 清除剂的活性DPPH •法是用以评价天然抗氧化剂抗氧化活性的一种快速（反应 时间仅需30min）、简便、灵敏可行的方法2.实验仪器与试剂烧杯，试管，试管架，吸量管，洗耳球，天平，量筒，洗瓶，布氏漏斗，紫 外分光光度计，40目筛，研钵，牛骨匙，真空泵3•实验步骤3.1.药材的采集通过对校园内常见野生药用植物的考察，选择感兴趣的3-5种植物，通过文 献调研，确认采集的药材名称，收集药材的入药部位、药理作用、化学成分等相 关内容对植物形态拍照记录，采集样品，样品采集后 除去泥沙、灰尘腐败物 等杂质，洗净置烘箱中，55°C下迅速干燥后粉碎，过40目筛，保存于干燥避光 处，备用3.2 •药材的提取准确称取干燥至恒质量的样品50 mg，加入20mL 50%乙醇溶液混匀，提取 2h后过滤取滤液，滤渣再用20ml 50%的乙醇浸提2h，过滤，合并两次的提取 液，定容于50mL容量瓶中，密闭冷藏保存，备用3・3 •体外抗氧化活性检测3・3・1 DPPH测试液的配制取DPPH 20mg溶于约250mL （0.008%）溶剂无水乙醇中，超声5min,充 分振摇，务使上下各部分均匀。

取该DPPH溶液，在517nm处测A值，使A= 1.2-1.3之间最佳该DPPH溶液最好避光保存3.3.2阳性药物样品液的配制本实验选用维生素C作为阳性对照药物，用50%乙醇溶解，使最终浓度约 在 1mg/100ml 浓度3.3.3测试浓度的预试取DPPH溶液2mL,往其中加少量样品液，加样时，先少后多渐加，边加 边混合，并观察溶液的褪色情况，当溶液颜色基本褪去时，记下样品的加样量此加样量即为样品的最大用量，在此最大用量的基础上，往前设置5个用量, 使之成等差数列3.3.4维生素C标准曲线的建立A0值的测量：取DPPH溶液2 mL加入到小试管中，加50%乙醇2mL,充 分混合，测A值（517nm），此A值为A° （A多在0.7-0.9之间）Ai值的测量：取DPPH溶液2mL加入到小试管（或玻璃瓶）中，维生素C 加样x mL （x是根据3.3预试结果确定样品液的用量），再加（2 -x） mL 50% 乙醇，混合，静置30分钟后，测Ai值Aj值的测量：取2mL无水乙醇加入到小试管（或玻璃瓶）中，维生素C加 样x mL （同上述Ai中的用量），再加（2 -x） mL 50%乙醇，混合，静置30 分钟后，测Ai值。

测出AAi、Aj所表示样品的吸光度值，清除率按公式（1）计算S.^^l-CA-A^AoXlOO （1）式中：A0——2 ml DPPH+2 ml 50% 乙醇Ai 2 ml DPPH+ x ml Vc + （2-x） ml 50%乙醇Aj 2 ml 无水乙醇+x ml Vc + (2-x) ml 50%乙醇3.3.5药材提取液抗氧化活性的测定向0.008% DPPH的乙醇溶液中加入样品，混合均匀，30min后用分光光度 计在517nm处测定吸光值利用DPPH •溶液的特征紫红色团的吸收，用紫外 可见分光光度法测定加抗氧剂提取液后在波长517nm处吸收的下降表示其对有 机自由基消除能力，按下表加反应液表1加样量A02 mL DPPH+2 mL 50% 乙醇Ai2 mL DPPH+2 mL样品溶液Aj2 mL无水乙醇+2 mL样品溶液用力摇匀，将Ai所表示的样品在室温下静置30min后，加入比色皿中进行 吸光度的测定，测出A0、Ai、Aj所表示样品的吸光度值，清除率按公式(1)计算4.实验结果4.1 DPPH吸光度AA=2.434.2 VC标准曲线浓度(7mg/250ml) V(ml)AiAjA0清除率清除率％0.31.1120. 0151.2720.13757861613.757861640.60.8880.031.2720. 32547169832. 547169810.90.660.0481.2720. 51886792551. 886792451.10.560.0561.2720. 60377358560. 377358491.20.540.0581.2720. 62106918262.106918241.50.5330.061.2720. 62814465462.81446541图表标题体积(ml)+浓度(7mg/250ml) V(m 1)—线性(浓度(7吨吃551) V(id))4.3样品清除率浓度(7mg/250ml) V(ml)AiAjA0清除率清除率％大青叶1.0380.0571.2720.22877358522.87735849■ 5苦菊0.6540：044»1.2720.52044025252.044025165•用正交法进行提取工艺的优化通过上一步体外抗氧化活性检测实验，筛选出一种抗氧化活性最强的药材, 利用正交实验法对其提取工艺进行优化。

进行3个水平三个因素的正交实验正 交表如下：表2 因子安排 试脸方案行 号A1B2C34试验□水平组合111111讣心212222A jBjC^313333AiBA421234A / 1^2522315623126品6731327A jCj832138A屁C】33219Ag3个因素分别考察：提取时间、提取溶剂的乙醇浓度及提取溶剂的体积，每 个因素分别设定3个水平，计算清除率，然后计算K］、K2、K3 （分别是3个因 素3个水平的清除率的总和）；k「k2、k3 （每个因素的K］、K2、K3再分别除以 3的值）及R值（极差，每个因素3个k值中的最大值减去最小值的差值）根 据正交实验结果确定各影响因素的主次顺序、优水平及优组合实验结果:时间/h A体积（ml） B乙醇浓度％ C清除率％组合10.510504.40A1B1C120.5307514.41A1B2C230.5501004.69A1B3C341.0107584.20A2B1C251.0301008.75A2B2C361.0505082.54A2B3C171.51010018.90A3B1C381.5305081.20A3B2C191.5507579.70A3B3C2。