凝集反应、沉淀反应、补体参加的反应.ppt

实验内容实验内容介绍：免疫学检测技术介绍：免疫学检测技术示教：单扩、双扩、火箭电泳示教：单扩、双扩、火箭电泳操作：对流免疫电泳、玻片凝集操作：对流免疫电泳、玻片凝集报告：三张图、两实验原理及结果报告：三张图、两实验原理及结果一、抗原抗体反应的原理一、抗原抗体反应的原理 1、基础：抗原决定基、基础：抗原决定基——抗体的互补决定区抗体的互补决定区 2、特点：抗原抗体反应的特异性、特点：抗原抗体反应的特异性 抗原抗体反应的可逆性抗原抗体反应的可逆性 抗原抗体反应的可见性抗原抗体反应的可见性二、抗原或抗体的检测方法二、抗原或抗体的检测方法凝集反应、沉淀反应、补体参加的反应、凝集反应、沉淀反应、补体参加的反应、免疫标记技术免疫标记技术凝集反应凝集反应概念：抗原概念：抗原 + 抗体抗体 凝集团块凝集团块直接凝集：颗粒性抗原直接凝集：颗粒性抗原 + 抗体抗体 凝集团块凝集团块 玻片法、试管法玻片法、试管法间接凝集：可溶性抗原包被于载体间接凝集：可溶性抗原包被于载体 + 抗体抗体 凝集团块凝集团块反向间接凝集：抗体包被于载体反向间接凝集：抗体包被于载体 + 抗原抗原 凝集团块凝集团块协同凝集：抗体结合金葡菌协同凝集：抗体结合金葡菌SPA + 抗原抗原 凝集团块凝集团块抗球蛋白试验：抗原抗球蛋白试验：抗原 + 不完全抗体不完全抗体 + 抗球蛋白抗体抗球蛋白抗体 凝集团块凝集团块沉淀反应沉淀反应概念：可溶性抗原概念：可溶性抗原 + 抗体抗体 沉淀物沉淀物单向免疫扩散、火箭电泳：抗原定量试验单向免疫扩散、火箭电泳：抗原定量试验 抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）抗体琼脂板、抗原扩散（自由、定向）双向免疫扩散、对流免疫电泳：抗原分析、双向免疫扩散、对流免疫电泳：抗原分析、 抗原定性试验等抗原定性试验等 抗原、抗体同时扩散（自由、定向）抗原、抗体同时扩散（自由、定向）单向单向免疫免疫扩散扩散单向单向免疫免疫扩散试验是一种定量试验。

扩散试验是一种定量试验将一定量将一定量已知已知抗体混于琼脂中抗体混于琼脂中，制板，，制板，在适当在适当位置打孔位置打孔，，将抗原加入孔中扩散将抗原加入孔中扩散，，与板中抗体与板中抗体相遇相遇，，在比例合在比例合适适处呈现白色沉淀环处呈现白色沉淀环，，环的直环的直径与抗原径与抗原含量含量成正比成正比主要用于主要用于测定测定血清各种血清各种Ig和补体成分的含量和补体成分的含量单向定量免疫电泳单向定量免疫电泳（（火箭电泳火箭电泳））将一定量将一定量已知已知抗体混于琼脂中抗体混于琼脂中，制板，，制板，在在板板的一端的一端打一排小孔打一排小孔，，加入待检样品加入待检样品，，置于阴极端进行电泳置于阴极端进行电泳抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形抗原在泳动过程中与抗体在比例合适部位形成锥形沉淀峰沉淀峰，，状如火箭状如火箭，，称火箭电泳沉淀峰的高低与称火箭电泳沉淀峰的高低与抗原的浓度成正比抗原的浓度成正比敏感度与单扩相仿敏感度与单扩相仿，，但需时较短但需时较短双向双向免疫免疫扩散扩散在在琼脂板上打孔琼脂板上打孔，，抗原和抗体分别加到相抗原和抗体分别加到相应孔中应孔中，二者自由，二者自由向四周扩散向四周扩散，，在比例合在比例合适处形成沉淀线。

若同时含有若干对抗原适处形成沉淀线若同时含有若干对抗原抗体系统抗体系统，，可出现多条沉淀线可出现多条沉淀线可用可用于于分析和鉴定标本中多种抗原成分分析和鉴定标本中多种抗原成分对流免疫电泳材料n电泳仪n缓冲液n琼脂板1块/2人，打孔器2个/组，n抗AFP血清 —— 已知AbnAFP阳性血清 —— 阳性Agn对照阴性血清 —— 阴性Agn待检血清：标本1 —— 未知Ag 标本2 —— 未知Ag对流免疫电泳对流免疫电泳打孔：打孔：金属打孔器打两排孔金属打孔器打两排孔，，抗原孔与抗体孔间抗原孔与抗体孔间距离为距离为4毫米毫米至至5毫米加样加样：：抗抗AFP血清加于抗体孔内血清加于抗体孔内；；病人血清病人血清、、AFP阳性血清阳性血清、、阴性对照血清分阴性对照血清分别别加于抗原孔内加于抗原孔内电泳电泳：：将琼脂将琼脂板板置电泳槽置电泳槽，，抗原孔置阴极端抗原孔置阴极端板板两端分别用湿纱布与缓冲液相连两端分别用湿纱布与缓冲液相连，，通电通电20分钟观察观察：：在相应抗原、抗体孔间在相应抗原、抗体孔间出现出现沉淀线玻片刮去琼脂后交到讲台方盘内玻片刮去琼脂后交到讲台方盘内。

对流免疫电泳方法 打孔 加样 电泳20min －＋AgAbAgAb4~5mm4~5mm>5mm>5mm阴性阳性标1阴性标2阳性对流免疫电泳结果判定: 在相应抗原抗体孔之间可以白色沉淀线把琼脂片上的琼脂刮掉入杂物盆，玻片放在讲台前的盘子里直接凝集反应——玻片凝集材料：玻片1张/1人，1号、2号菌液，诊断血清，接种环方法：取菌液3～4环，后加血清2环 轻摇玻片，1～2分钟后观察结果判定：出现乳白色凝集块属阳性反应*玻片扔在后面的玻片缸里1号菌液＋诊断血清2号菌液＋诊断血清实验报告实验报告三张图：单扩、双扩、火箭电泳三张图：单扩、双扩、火箭电泳原理及结果：对流免疫电泳、玻片凝集原理及结果：对流免疫电泳、玻片凝集（结果可用图示）（结果可用图示）。