肝素钠效价检测方法.doc

肝 素 钠 效 价 检 测 方 法试剂：羊血浆（冰冻保存） 、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置） 、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg 肝素钠标准溶液4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品 M mg，溶解并用 0.9%生理盐水定容至 100ml，再取 V ml 定容至 25ml 即得待检样品溶液，冷藏保存估计 M 及 V 的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8估算时 V 只尽量小于 10 且取整数，从而计算出 M 值4.2.2.3 检测方法：将恒温水域调制 37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用取 2 组 10 只试管，分别加入标样 110ul、120ul……200ul，然后每管加入 8%柠檬酸钠溶液 20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆 1ml，另一组加入待检样品溶液 110ul、120ul……200ul，同样每管加入 8%柠檬酸钠溶液 20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆 1ml并将每只试管盖好管盖，倒转 3—4 次混匀，使内壁湿润，垂直放入 37℃水域 1h。

1h 后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的 1∕2 凝固点及体积凝固程度标准：①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落②3∕4 凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落③1∕2 凝固：大约一半体积的溶液凝固④1∕4 凝固：少量溶液凝固⑤0 凝固：溶液悟凝固现象若相邻两管跳过 1∕2 凝固点则 1∕2 凝固点的计算公式为V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数)待检样品效价计算公式：4.2.2.4 F=待检样品估计效价×标品 1∕2 凝固点微升数÷样品 1∕2 凝固点微升数4.2.2.5注意事项：4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在 30℃以下4.2.2.6.2 在使用新开启羊血浆前，需检测羊血浆是否能够正常使用取试管一只，加入0.8ml 0.25%CaCl2 及过滤后的羊血浆 1ml ，盖好管盖，倒转 3—4 次混匀，使内壁湿润，垂直放入 37℃水域 5min，5min 后检查血浆是否凝固，如血浆凝固则可使用，未凝固则不能使用。

4.2.2.6.3 如在检测过程中，标样的 1∕2 凝固点高于 200ul，则需重新调整羊血浆的1∕2 凝固点方法如下：取 3 组各 10 只试管 组一： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul8%柠檬酸钠 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 ul0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml组二： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul8%柠檬酸钠 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 ul0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml组三： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul8%柠檬酸钠 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 ul0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml将每只试管盖好管盖，倒转 3—4 次混匀，使内壁湿润，垂直放入 37℃水域 1h。

1h 后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样的 1∕2 凝固点及体积如 1∕2 凝固点在110ul—200ul 的，即可使用选值最好在 130ul—170ul 范围内8%柠檬酸钠需用生理盐水配置4.2.2 效价（羊血浆法）4.2.2.1、 试剂：羊血浆（冰冻保存） 、0.9%生理盐水、0.25%CaCl2（用生理盐水配置） 、8%柠檬酸钠溶液、8IU∕mg 肝素钠标准溶液4.2.2.2 待检样品溶液的配置：精确称取肝素钠固体待检样品 M mg，溶解并用 0.9%生理盐水定容至 100ml，再取 V ml 定容至 25ml 即得待检样品溶液，冷藏保存估计 M 及 V 的计算公式为：样品估计效价×MV∕100=25×8估算时 V 只尽量小于 10 且取整数，从而计算出 M 值4.2.2.3 检测方法：将恒温水域调制 37℃恒温，取出冰冻羊血浆，融化，并过滤，待用取 2 组 10 只试管，分别加入标样 110ul、120ul……200ul，然后每管加入 8%柠檬酸钠溶液 20ul、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆 1ml，另一组加入待检样品溶液110ul、120ul……200ul，同样每管加入 8%柠檬酸钠溶液 20ul 、0.25%CaCl2 0.8ml 及过滤后的羊血浆 1ml。

并将每只试管盖好管盖，倒转 3—4 次混匀，使内壁湿润，垂直放入37℃水域 1h1h 后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样及待检样的 1∕2 凝固点及体积4.2.2.4 凝固程度标准：①完全凝固：溶液完全凝固，倒转试管并猛敲一下时，凝块不从管壁脱落②3∕4 凝固：溶液完全凝固，但当猛敲一下时，凝块能从管壁脱落③1∕2 凝固：大约一半体积的溶液凝固④1∕4 凝固：少量溶液凝固⑤0 凝固：溶液悟凝固现象若相邻两管跳过 1∕2 凝固点则 1∕2 凝固点的计算公式为V=V2-（V2-V1）×（0.5-S1）∕(S2-S1)(S1：小凝固度；S2：大凝固度；V1：相邻两管大凝固度加入的微升数；V2：相邻两管小凝固度加入的微升数)4.2.2.5 待检样品效价计算公式：F=待检样品估计效价×标品 1∕2 凝固点微升数÷样品 1∕2 凝固点微升数4.2.2.6 注意事项：4.2.2.6.1 实验室操作环境必须控制在 30℃以下4.2.2.6.2 在使用新开启羊血浆前，需检测羊血浆是否能够正常使用取试管一只，加入0.8ml 0.25%CaCl2 及过滤后的羊血浆 1ml ，盖好管盖，倒转 3—4 次混匀，使内壁湿润，垂直放入 37℃水域 5min，5min 后检查血浆是否凝固，如血浆凝固则可使用，未凝固则不能使用。

4.2.2.6.3 如在检测过程中，标样的 1∕2 凝固点高于 200ul，则需重新调整羊血浆的1∕2 凝固点方法如下：取 3 组各 10 只试管 组一： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul8%柠檬酸钠 20 20 20 20 20 20 20 20 20 20 ul0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml组二： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul8%柠檬酸钠 30 30 30 30 30 30 30 30 30 30 ul0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml组三： 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10标样 110 120 130 140 150 160 170 180 190 200 ul8%柠檬酸钠 40 40 40 40 40 40 40 40 40 40 ul0.25%CaCl2 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 0.8 ml羊血浆 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 ml将每只试管盖好管盖，倒转 3—4 次混匀，使内壁湿润，垂直放入 37℃水域 1h。

1h 后取出各管，检查各管的凝固程度，并记录确定标样的 1∕2 凝固点及体积如 1∕2 凝固点在110ul—200ul 的，即可使用选值最好在 130ul—170ul 范围内8%柠檬酸钠需用生理盐水配置。