食品质量与安全实验技术3常见食品添加剂的测定武汉工业学院.ppt

第三章第三章 常见食品添加剂的测定常见食品添加剂的测定 食品添加剂的种类繁多食品添加剂的种类繁多22类）同一添加类）同一添加剂又有不同的分析方法，就具体的分析方法剂又有不同的分析方法，就具体的分析方法（食品不同，含量不同）甚多但归纳起来主（食品不同，含量不同）甚多但归纳起来主要有：滴定法、比色法、紫外分光光度法、荧要有：滴定法、比色法、紫外分光光度法、荧光法、离子选择性电极法、色谱法（气相、液光法、离子选择性电极法、色谱法（气相、液相、薄层）相、薄层） 食品中添加剂的测定与食品添加剂的测定的食品中添加剂的测定与食品添加剂的测定的方法又有区别，一个需要进行（前处理）分离，方法又有区别，一个需要进行（前处理）分离，一个则不需要，加之含量差异，分析方法有的一个则不需要，加之含量差异，分析方法有的采用不同的分析方法采用不同的分析方法•一、防腐剂的测定一、防腐剂的测定•（一）碱滴定法测定苯甲酸（一）碱滴定法测定苯甲酸（一）碱滴定法测定苯甲酸（一）碱滴定法测定苯甲酸•1 1、原理、原理、原理、原理• 样品加入饱和样品加入饱和样品加入饱和样品加入饱和NaCINaCI，在酸性条件下，用乙醚提取，，在酸性条件下，用乙醚提取，，在酸性条件下，用乙醚提取，，在酸性条件下，用乙醚提取，去乙醚溶于中性乙醇，用碱滴定。

去乙醚溶于中性乙醇，用碱滴定去乙醚溶于中性乙醇，用碱滴定去乙醚溶于中性乙醇，用碱滴定•2 2、方法、方法、方法、方法•（（（（1 1）取样）取样）取样）取样75g + 7.5g 75g + 7.5g NaCINaCI →300ml→300ml烧杯溶解烧杯溶解烧杯溶解烧杯溶解•（（（（2 2）加入）加入）加入）加入7070mlml饱和饱和饱和饱和NaCINaCI，用，用，用，用10%NaOH10%NaOH滴至碱性滴至碱性滴至碱性滴至碱性•（（（（3 3）定溶）定溶）定溶）定溶250250mlml，摇、，摇、，摇、，摇、置置置置2h2h•（（（（4 4）过滤，取滤液）过滤，取滤液）过滤，取滤液）过滤，取滤液100100mlml，，，，置分液漏斗中，用置分液漏斗中，用置分液漏斗中，用置分液漏斗中，用1 1：：：：1 1 HCIHCI滴至酸性用滴至酸性用滴至酸性用滴至酸性用190190mlml乙醚分三次抽提，静置乙醚分三次抽提，静置乙醚分三次抽提，静置乙醚分三次抽提，静置•（（（（5 5）放出乙醚层，用水洗至中性放入锥形瓶中，回）放出乙醚层，用水洗至中性放入锥形瓶中，回）放出乙醚层，用水洗至中性。

放入锥形瓶中，回）放出乙醚层，用水洗至中性放入锥形瓶中，回收乙醚，加入收乙醚，加入收乙醚，加入收乙醚，加入5050mlml中性乙醇，中性乙醇，中性乙醇，中性乙醇，1010mlml水，水，水，水，3 3滴酚酞，用滴酚酞，用滴酚酞，用滴酚酞，用0.05mol/L0.05mol/LNaOHNaOH滴至终点滴至终点滴至终点滴至终点 • • •（二）苯甲酸（钠）添加剂的测定（二）苯甲酸（钠）添加剂的测定（二）苯甲酸（钠）添加剂的测定（二）苯甲酸（钠）添加剂的测定•①①①①要求要求要求要求: :含量（％）含量（％）含量（％）含量（％）≥ ≥99.5 99.5 （苯甲酸钠（苯甲酸钠（苯甲酸钠（苯甲酸钠≥ ≥9999）（铅计）重金属％）（铅计）重金属％）（铅计）重金属％）（铅计）重金属％≤ ≤0.001……0.001……•②②②②鉴别鉴别鉴别鉴别:1g:1g样样样样+20ml 40g/LNaOH+20ml 40g/LNaOH，加，加，加，加1 1滴滴滴滴100g/L FeCl100g/L FeCl3 3生成赭色生成赭色生成赭色生成赭色↓ ↓•加加加加HClHCl（（（（1 1：：：：3 3）白色）白色）白色）白色↓ ↓（黄色火焰钠）（黄色火焰钠）（黄色火焰钠）（黄色火焰钠）•③③③③测定测定测定测定•A. A. 苯甲酸苯甲酸苯甲酸苯甲酸•称样称样称样称样0.25g0.25g加入中性加入中性加入中性加入中性5050％乙醇溶液％乙醇溶液％乙醇溶液％乙醇溶液25ml25ml，，，，2 2滴酚酞，用滴酚酞，用滴酚酞，用滴酚酞，用NaOHNaOH滴滴滴滴至粉红色至粉红色至粉红色至粉红色•b b苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠苯甲酸钠•提要：提要：提要：提要：HClHCl+ +苯甲酸钠苯甲酸；不溶于水，易溶于乙醚，用乙醚苯甲酸钠苯甲酸；不溶于水，易溶于乙醚，用乙醚苯甲酸钠苯甲酸；不溶于水，易溶于乙醚，用乙醚苯甲酸钠苯甲酸；不溶于水，易溶于乙醚，用乙醚萃取生成的苯甲酸，排除干扰。

据用萃取生成的苯甲酸，排除干扰据用萃取生成的苯甲酸，排除干扰据用萃取生成的苯甲酸，排除干扰据用HClHCl的量计算苯甲酸钠含的量计算苯甲酸钠含的量计算苯甲酸钠含的量计算苯甲酸钠含量称样量称样量称样量称样1.5g+25ml1.5g+25ml水水水水+50ml+50ml乙醚乙醚乙醚乙醚,10,10滴溴酚蓝滴溴酚蓝滴溴酚蓝滴溴酚蓝; ;用用用用0.5M 0.5M HClHCl滴定滴定滴定滴定, ,当水层显淡绿色为终点（黄当水层显淡绿色为终点（黄当水层显淡绿色为终点（黄当水层显淡绿色为终点（黄——紫蓝，紫蓝，紫蓝，紫蓝，pH=3.0-4.6pH=3.0-4.6））））•（三）气相色谱法测定苯甲酸、山梨酸、及其盐类（三）气相色谱法测定苯甲酸、山梨酸、及其盐类（三）气相色谱法测定苯甲酸、山梨酸、及其盐类（三）气相色谱法测定苯甲酸、山梨酸、及其盐类(P147,151,152) (P147,151,152) • 液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸、糖精液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸、糖精液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸、糖精液相色谱法测定苯甲酸、山梨酸、糖精(P152-154)(P152-154)•二、抗氧化剂的测定二、抗氧化剂的测定•1、、 BHA（叔丁基对羟基茴香醚）的测定（叔丁基对羟基茴香醚）的测定• 样品经石油醚萃取加入样品经石油醚萃取加入72％乙醇，使％乙醇，使BHA转入转入乙醇相中，再与乙醇相中，再与2.6—二氯醌氯亚胺二氯醌氯亚胺—硼砂（缓硼砂（缓冲）溶液的显色剂反应生成蓝色化合物。

在冲）溶液的显色剂反应生成蓝色化合物在λ=620nm处测吸光度处测吸光度A•2、、 BHT（（2.6—二叔丁基对甲酚）的测定二叔丁基对甲酚）的测定• 用水蒸气法将用水蒸气法将BHT分离出来，溶解于甲醇中分离出来，溶解于甲醇中（甲醇液接收）加入邻联二茴香胺（另加亚硝酸（甲醇液接收）加入邻联二茴香胺（另加亚硝酸钠溶液）生成橙红色化合物，用氯仿萃取，在钠溶液）生成橙红色化合物，用氯仿萃取，在λ=520nm处测吸光度处测吸光度A•3、可用气相色谱法测、可用气相色谱法测BHA、、BHT •三、发色剂三、发色剂—亚硝酸盐、硝酸盐的测定亚硝酸盐、硝酸盐的测定 •1 1、亚硝酸盐的测定（、亚硝酸盐的测定（、亚硝酸盐的测定（、亚硝酸盐的测定（P177P177））））• 样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后在弱酸性条件下样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后在弱酸性条件下样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后在弱酸性条件下样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后在弱酸性条件下（（（（HClHCl）亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化•与盐酸奈乙二胺偶合生成紫红色染料。

与盐酸奈乙二胺偶合生成紫红色染料与盐酸奈乙二胺偶合生成紫红色染料与盐酸奈乙二胺偶合生成紫红色染料•λ λ= =550nm550nm处测吸光度处测吸光度处测吸光度处测吸光度A A•2 2、硝酸盐的测定（镉柱法）（、硝酸盐的测定（镉柱法）（、硝酸盐的测定（镉柱法）（、硝酸盐的测定（镉柱法）（P179-180)P179-180)•样品经用蛋白质沉淀剂（亚铁氰化钾样品经用蛋白质沉淀剂（亚铁氰化钾样品经用蛋白质沉淀剂（亚铁氰化钾样品经用蛋白质沉淀剂（亚铁氰化钾+ +乙酸锑）沉淀蛋乙酸锑）沉淀蛋乙酸锑）沉淀蛋乙酸锑）沉淀蛋白质，除去上层脂肪过滤后（用饱和硼砂溶液作提取白质，除去上层脂肪过滤后（用饱和硼砂溶液作提取白质，除去上层脂肪过滤后（用饱和硼砂溶液作提取白质，除去上层脂肪过滤后（用饱和硼砂溶液作提取剂）得提取液通过镉柱在氯化胺缓冲液中剂）得提取液通过镉柱在氯化胺缓冲液中剂）得提取液通过镉柱在氯化胺缓冲液中剂）得提取液通过镉柱在氯化胺缓冲液中•NONO3 3- - + +CdCd = CdO+NO = CdO+NO2 2- - 用盐酸奈乙二胺法（比色）测用盐酸奈乙二胺法（比色）测用盐酸奈乙二胺法（比色）测用盐酸奈乙二胺法（比色）测NONO2 2- -总量总量总量总量•减去未经镉柱还原前的减去未经镉柱还原前的减去未经镉柱还原前的减去未经镉柱还原前的NONO2 2- -，则得由，则得由，则得由，则得由NONO3 3- -还原产生的还原产生的还原产生的还原产生的NONO2 2- -量量量量, ,乘以换算系数乘以换算系数乘以换算系数乘以换算系数1.2321.232得硝酸钠（得硝酸钠（得硝酸钠（得硝酸钠（NaNONaNO3 3）含量）含量）含量）含量 四、漂白剂二氧化硫及亚硫酸盐的测定四、漂白剂二氧化硫及亚硫酸盐的测定•测定方法有比色法、滴定法、色谱法测定方法有比色法、滴定法、色谱法•盐酸副玫瑰苯胺比色法（盐酸副玫瑰苯胺比色法（P170）） A.亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成络合物亚硫酸盐与四氯汞钠反应生成络合物[HgCl2 2SO3 3]2-•Na2 2HgCl4 4+SO2 2+H2 2O→[HgCl2 2SO3 3]2-•B.与甲醛、对品红作用生成紫红色络合物与甲醛、对品红作用生成紫红色络合物-•聚玫瑰红甲基磺酸聚玫瑰红甲基磺酸•C. λ=550nm处测处测A•五、食品合成色素的测定五、食品合成色素的测定•测定方法主要有：薄层层析法、高效液相测定方法主要有：薄层层析法、高效液相色谱法色谱法•薄层层析法薄层层析法• 在酸性条件下，用聚酰胺吸附水溶性合成在酸性条件下，用聚酰胺吸附水溶性合成色素，而与天然色素蛋白质、脂肪、淀粉色素，而与天然色素蛋白质、脂肪、淀粉等分离。

等分离• 在碱性条件下，用适当溶液（如乙醇在碱性条件下，用适当溶液（如乙醇—氨）氨）将其解吸将其解吸• 用薄层层析法分离鉴别，与标准比较定性，用薄层层析法分离鉴别，与标准比较定性，测测A定量•薄层层析分离及定性薄层层析分离及定性薄层层析分离及定性薄层层析分离及定性•a a薄层板：薄层板：薄层板：薄层板：1.6g1.6g聚酰胺聚酰胺聚酰胺聚酰胺+0.4g+0.4g可溶性淀粉可溶性淀粉可溶性淀粉可溶性淀粉+2g+2g硅胶硅胶硅胶硅胶G+15mlG+15ml水研匀、铺在玻璃板上（水研匀、铺在玻璃板上（水研匀、铺在玻璃板上（水研匀、铺在玻璃板上（0.3mm0.3mm厚）凉干，厚）凉干，厚）凉干，厚）凉干，80℃1h80℃1h干燥器中干燥器中干燥器中干燥器中•b b点样：用微量注射器或毛细管将样液点于薄层板上点样：用微量注射器或毛细管将样液点于薄层板上点样：用微量注射器或毛细管将样液点于薄层板上点样：用微量注射器或毛细管将样液点于薄层板上（离底（离底（离底（离底2cm2cm左右左右左右左右2cm2cm线宽＜线宽＜线宽＜线宽＜2mm2mm）成一条底边的线）成一条底边的线）成一条底边的线）成一条底边的线•c c展开：层析缸内放入展开剂（如苋菜红、胭脂红用展开：层析缸内放入展开剂（如苋菜红、胭脂红用展开：层析缸内放入展开剂（如苋菜红、胭脂红用展开：层析缸内放入展开剂（如苋菜红、胭脂红用甲醇：乙二胺：氨水甲醇：乙二胺：氨水甲醇：乙二胺：氨水甲醇：乙二胺：氨水=10=10：：：：3 3：：：：4 4））））•将薄层板下端浸入溶剂将薄层板下端浸入溶剂将薄层板下端浸入溶剂将薄层板下端浸入溶剂0.5-1cm0.5-1cm左右，放约左右，放约左右，放约左右，放约1h1h（色素（色素（色素（色素明显分开），取出晾干明显分开），取出晾干明显分开），取出晾干明显分开），取出晾干•d d比移值比移值比移值比移值RfRf的测定：可用纸层析（层析纸）测定方法的测定：可用纸层析（层析纸）测定方法的测定：可用纸层析（层析纸）测定方法的测定：可用纸层析（层析纸）测定方法基本同上基本同上基本同上基本同上a a、、、、b b、、、、c c• RfRf= = •RfRf= =与标准样液与标准样液与标准样液与标准样液RfRf比较定性为何种色素比较定性为何种色素比较定性为何种色素比较定性为何种色素•定量测定定量测定•A 刮下色斑（各条状）刮下色斑（各条状）•移入漏斗（移入漏斗（G3 3砂芯）用丙酮砂芯）用丙酮—氨水液解析抽氨水液解析抽滤滤•B 用柠檬酸（用柠檬酸（20％）调％）调pH=6•C 定容定容•D 在各色素在各色素λmax处测处测A，如柠檬黄，如柠檬黄428nm，胭，胭脂红脂红508nm•E 作标准曲线作标准曲线•F 计算计算 色素（色素（mg/Kg,L））= CV/W•c-从标准曲线上查出色素含量从标准曲线上查出色素含量μg/ml,v—提取液提取液总体积总体积,w—样品质量（样品质量（g））作业作业1、食品添加剂的测定方法有哪些？、食品添加剂的测定方法有哪些？2、、防腐剂苯甲酸（钠）防腐剂苯甲酸（钠）的测定方法有哪些？的测定方法有哪些？3、简述抗氧化剂、简述抗氧化剂BHA（叔丁基对羟基茴香醚）、（叔丁基对羟基茴香醚）、 BHT（（2.6—二叔丁基对甲酚）的测定方法。

二叔丁基对甲酚）的测定方法4、简述发色剂、简述发色剂—亚硝酸盐、硝酸盐的测定方法亚硝酸盐、硝酸盐的测定方法 5、简述漂白剂二氧化硫及亚硫酸盐的测定方法简述漂白剂二氧化硫及亚硫酸盐的测定方法6、简述食品合成色素的测定方法简述食品合成色素的测定方法。