（胶体金法）生产工艺设计规范流程模板.doc

1. 适用围适用于乙型肝炎病毒外表抗体检测试剂盒〔胶体金法〕的生产和质量控制2. 职责研发部：制定本规程生产管理部：执行本规程质量管理部：按本规程执行，监视本规程的执行情况3. 容3.1.依据?乙型肝炎病毒外表抗体检测试剂〔胶体金法〕?产品标准3.2.产品名称、剂型、规格3.2.1名称：(1) 商品名：乙型肝炎病毒外表抗体检测试剂〔胶体金法〕〔2〕英文名：Diagnostic Kit for Antibody to Hepatitis B Surface Antigen(Colloidal Gold Immunochromatagraphic Assay)〔3〕汉语拼音名：Yixing Ganyan Bingdu Biaomian Kangti Jiance Shiji〔jiaotijin Fa〕3.2.2.类型：三类6840体外诊断试剂3.2.3.规格：100T/盒(25T/筒*4筒)〔无卡〕；25袋/盒〔1支/袋〕、50袋/盒〔1支/袋〕3.3.产品概述乙型肝炎病毒外表抗体检测试剂〔胶体金法〕采用胶体金免疫层析分析原理、双抗原夹心法，在玻璃纤维纸上预包埋金标记重组乙型肝炎病毒外表抗原，在硝酸纤维素膜上检测线〔T〕和质控线〔C〕分别包被重组的乙型肝炎病毒外表抗原和羊抗兔IgG。

当检测样本为阳性时，样本中的乙肝病毒外表抗体与胶体金标记的重组乙肝病毒外表抗原结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线〔T〕时与预包被的重组乙肝外表抗原反响，形成免疫复合物而显现红色条带，游离金标记的兔IgG那么在质控线〔C〕与羊抗兔IgG结合显现红色条带阴性样本那么仅在质控线〔C〕显色3.4.试剂盒组成、储存、有效期3.4.1.试剂盒组成：组件100T/盒25袋/盒〔1支/袋〕50袋/盒〔1支/袋〕装量数量装量数量装量数量试纸条25条/筒4筒无无无无试纸卡无无1支/袋25袋1支/袋50袋样品稀释液2ml4瓶2ml1瓶2ml2瓶说明书1份1份1份1份1份1份3.4.2储存条件：2-30℃保存3.4.3.有效期：24个月3.5.生产工艺流程图文件末〔23页〕3.6.生产工艺过程及工艺条件3.6.1配液根据以下各配方，按各相关试剂配制作业指导书进展配制1）原料名称用量配制环境：（2）原料名称用量配制环境：（3）原料名称用量配制环境：3.6.2样品稀释液分装按照?液体分装作业指导书?，根据相应规格的装量要求进展分装，分装量 ＝ 规格 + 附加量如下表所示〔单位：ml/瓶〕：标示量附加量装量15ml0ml15ml3.6.3 胶体金制备原料名称用量烧金溶液A烧金溶液B超纯水制备环境：金标车间配料间〔十万级干净区〕（1） 量取 ml超纯水到适当大小的烧瓶中；（2） 量取 ml烧金溶液A并参加烧瓶中；（3） 水沸腾后，参加已经平衡的烧金溶液B ml；（4） 水继续沸腾5分钟关闭加热搅拌器，并将烧瓶移至桌面，用铝箔纸盖住瓶口，让胶体金自然冷却。

5） 胶体金的储存：2～8℃；有效期6个月3.6.4胶体金标记3.6.4.1根据试样验证结果，量取胶体金，快速搅拌中参加0.2MK2CO3液，混匀后，快速搅拌中参加相应量的乙肝抗原或兔IgG(乙肝抗原和兔IgG分开标记)，混合均匀后，反响30分钟3.6.4.2 终止：充分反响后在搅拌中参加金标记过程终止液〔20ul/1ml金溶液〕；继续搅拌30分钟直至混匀3.6.4.3将胶联溶液离心，9000转离心6分钟，收集沉淀并用金工作液定容至总体积的1/10；3.6.4.4储存： 2～8℃，有效期6个月3.6.5 铺金液配制3.6.5.1用工作液将1/10体积的乙肝病毒外表抗原金标记物沉淀放大10倍；兔IgG金标记物沉淀按1/3乙肝病毒外表抗原沉淀的量，加至上述乙肝金标工作液中〔即兔IgG金标记物沉淀为乙肝的1/3〕3.6.5.2按0.2mg/ml的量参加抗RBC到铺金液中；3.6.6 小样试验：在铺金和划膜之前，应首先将待铺的基因重组抗原-胶体金复合物溶液，先铺一条玻纤〔6mm×310mm〕上，用配好的质控线液、检测线液划膜一，与其他组分组合在一起，进展检测，要求：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率〔-/-〕应为20/20。

灵敏度：灵敏度参考血清，呈阳性反响精细性：连续重复测定精细性参考品10次，反响结果应均为阳性，且显色度均一3.6.7 铺金3.6.7.1按每玻纤可以铺金36ml计算金标液的体积3.6.7.2按计算好的体积在每玻纤上铺金，并用圆形试管刮均匀3.6.7.3 30%湿度以下，37～40℃枯燥18～24小时，如不立即使用，加枯燥剂铝箔袋封存3.6.7.4储存：保存过程中严格防潮，以后翻开和使用一定要在30%湿度以下3.6.7膜包被按照?划膜机标准操作规程?，以“252〞泵速〔对应速度2.7ul/cm〕，将质控线液和检测线液均匀地划在膜上，质控线划在距膜顶端12.1±0.1cm处，检测线划在距膜顶端12.5cm±0.1cm处，质控线与检测线相距5mm±1mm3.6.7.2 30%湿度以下，37～40℃枯燥18～24小时，如不立即使用，加枯燥剂铝箔袋封存3.6.7.3储存：保存过程中严格防潮，以后翻开和使用一定要在30%湿度以下3.6.8 样品垫的准备3.6.8.1按每玻纤可以铺液36ml计算全血样品垫处理液的体积3.6.8.2按计算好的体积在每玻纤上铺液，并用圆形试管刮均匀3.6.8.3 30%湿度以下，37～40℃枯燥18～24小时，如不立即使用，加枯燥剂铝箔袋封存。

3.6.8.4储存：保存过程中严格防潮，以后翻开和使用一定要在30%湿度以下3.6.9半成品检测：以上生产出来的胶体金、胶金垫、包被膜、分装好的样品稀释液均应作为半成品请检，质量管理部QC按照?半成品检验作业指导书?检验合格方可进入下一道工序3.6.10 组装3.6.10.1 按照?贴膜组装工序作业指导书?的规定，将包被好的NC膜贴在塑料大卡上 3.6.10.2各组成局部的切割：各组分用切割机切割成以下大小：金标垫：6mm × 310mm 样品垫：15mm ×310mm 吸水垫：20mm×310mm不干胶纸：13mm× 310mm3.6.10.3 层压将上述切割好的材料进展贴膜制成乙型肝炎外表抗体胶体金试纸条，各膜层叠关系如下：1〕2) T线 C线3〕3)5) 〔4〕6)1） 不干胶纸2） 样品垫3〕金结合物垫4〕包被有检测线〔T线〕和质控线〔C线〕的硝酸纤维素膜5〕吸水垫6〕塑料衬片3.6.10.4 层压参数金标垫2片，第一片搭上NC膜2mm， 第二片搭第一片3mm ；样品垫15mm，搭上金标垫2mm；吸水垫20mm，搭上NC膜2mm，不干胶13mm，搭上露出的NC膜2mm。

3.6.11切条〔1〕组装环境条件的控制在相对湿度30%以下，并所有组件拆封后暴露于空气中时间不超过2小时〔2〕按照?切条工序作业指导书?使用切条机，将组装好的乙肝病毒外表抗体检测试剂切割成宽度为2.5mm±0.1mm试条，切条过程中应于前、后及过程中每30分钟对切条的宽度检查一次3.6.12检测卡的装配按照不同规格的要求，需要进展检测卡装配的试纸条先把切好的试条装配到完好的PVC卡中，再用压卡机进展压卡，装条时应注意检查条有无划痕污渍，宽度是否符合要求；PVC卡外观应清洁，平整，无变形，底面配套性好，压卡应注意调节松紧度，防止将卡压破或变形3.6.13包装3.6.13.1 成品规格为25支/盒、50支/盒的，所对应半成品的包装：〔1〕装卡：单个卡和无水硅胶枯燥剂一起放入铝箔袋中，卡印字方向应朝向铝箔袋开口方向，确保无漏装〔2〕密封密封时应检查密封的效果及铝箔袋上的效期印字是否正确，使用封口机进展封口3.6.13.2 成品规格为100支/盒的，所对应半成品的包装装筒，将无卡试纸以25支/筒的规格装入筒中，放入枯燥剂，然后封筒3.6.14 外包装〔1〕不干胶标签批号、生产日期、有效期打印：以试纸条组装日期为“生产日期〞，并由此推算出“有效期至〞，批号按照?批号管理规程?的规定设置。

按照?批号打印机使用、清洁、维护、保养标准操作规程?进展操作打印标签、包装盒上的“三期〞〔2〕贴签：在上述装好检测卡的铝箔袋及装好试纸条的筒上贴上标签〔3〕成品组装：纸盒组份：组件100T/盒25袋/盒〔1支/袋〕50袋/盒〔1支/袋〕装量数量装量数量装量数量试纸条25条/筒4筒无无无无试纸卡无无1支/袋25袋1支/袋50袋样品稀释液2ml4瓶2ml1瓶2ml2瓶说明书1份1份1份1份1份1份按包装盒标准折叠方法折好包装盒，根据成品组分名称、规格及数量，分别装入检测卡铝箔袋或试纸筒、样品稀释液、说明书包装组组长每盒清点查看，合格后用封口签〔合格证〕封口〔4〕储存：2～30℃，有效期24个月3.6.15.成品检定：抽检量为3%，最小抽检量为500人份经质量管理部QC检测合格，QA做生产记录审核后开具?成品放行审核单?方可入库3.7 质量标准3.7.1.主要原辅料质量标准及依据：〔1〕重组乙肝抗原质量标准性状肉眼观察不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒蛋白浓度用福林-酚法，以Sigma公司生产的牛血清白蛋白作对照，蛋白含量以毫克/毫升表示，浓度为0.5-10.0mg/ml；纯度和分子量用SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量10μg，电泳带显示无杂蛋白。

分子量：效价ELISA检测，效价应大于1∶10000功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率〔-/-〕应为20/20；最低检出量：抗-HBs的最低检出量应不高于10mIU/ml；批精细度用1份乙型肝炎病毒外表抗体精细性参考品平行检测同批的10个测试卡，结果应全部呈阳性，且显色度均一批间精细度：连续三批的小试样本，分别重复检测精细度参考品5次，结果应全部为阳性，且呈色度均一稳定性试验：置37℃放置10天，进展阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精细度的检测，应符合上述要求贮藏条件-20℃冻存依据?抗原质量标准及检验操作规程? 〔2〕兔IgG抗体蛋白浓度经OD280方法检测浓度≥5mg/mL纯度用SDS-PAGE蛋白电泳法测定，每个泳道加样量10μg，电泳带显示无杂蛋白功能性试验以本品制备三批小试样品，与其他合格组分组装后检测：阴性参考品符合率：20份阴性参考品符合率〔-/-〕应为20/20；最低检出量：抗-HBs的最低检出量。