血清白蛋白测定_溴甲酚绿染料结合法.pdf

血清白蛋白浦定:澳甲酚绿 染 料结合法重 庆市第三人 民医院检脸科生化组店明和甘凡郑王 淑琴血清蛋白质是多种蛋白的混合体要从蛋白质 中把各种蛋白成分分离开方法很多,有用它们的物理化学性 质,如折射率、比重、紫外光吸收、电泳等来分离,也可以用化学方法,如盐析法分离再用双缩脉反应、酚试剂呈色来分离这些方法比较繁琐费时,且易受到外界各种因素的影响,准确性不够稳定另一 些方法如折射计、干涉光计等虽较迅速简便,但由于仪器比较昂贵目前不可能 普遍应用近十年来,对于染料结合法进行了较多研究,所得结果与盐析法或电泳 法 相差较大,影响了在临床上的广泛应用uma s‘ 在1 97 2年报告了 一种澳甲酚绿测定白蛋白的新方法,他在试剂中加入一种非离子去垢剂Bri j一3 5,可增进白蛋 白一澳甲酚绿复合物的溶解度,用于直接测定白蛋白的浓度此法简单,快速、用血量小、试剂稳定,准确度高,不 需特殊设备,可适应大批标本的检查,以及基层实验室均可 应用现将此法报导如下供大家探讨材料及方法澳甲酚绿(Bromoc r e s oeGr e e n)简称BCG,化学名为:四澳间位甲酚磺欧,为细小微黄结晶或玫瑰红或柠檬色粉末,易溶于醇及稀碱液微溶于水。

分子式:C: ;Hl一OoBr一S,分子量:6 98.07它是一种指示剂,pH变色范围为3.8(黄)一5.4(兰)耳乙BC G在pH4.o一4.2环境中在有非离子去垢剂Bri j一3 5存在时可 与白 蛋白结合,形成白蛋白一浪甲酚绿复合物,呈黄绿色颜色之深浅在一定条件下与白蛋白的浓度成正比关系,与同样处理的白蛋白标准液比较求得血清中白蛋白的含量二、试荆:1.30%Brij一35:称取Brij一3 5(聚氧化乙稀月桂醚)3 0克,加入6 0一7 0ml蒸馏水,在5 6℃水浴 中溶解,然后再加燕馏水至iooml2.IM拘 椽酸液:称取构稗酸液(CBHSO,·H:O ) AR级210克,加 上 迭氮化钠(NaN:)100毫克溶于蒸馏水中使成1,D00ml3.IM拘椽酸钠液:称取构 椽 酸钠(Na,CoHoo,·ZH:0) A R级2 9 4克,加上迭氮化钠10 0毫克溶于蒸 馏 水 中 使成1,0 0 0ml4.B CG贮存液(1 000卜m/1):称取BCG粉末0.698克加入0.iNNa-O HI二1,用乳钵研磨至粉末完全 溶解,然后 转入1 0ooml容量瓶中加入迭氮 化钠10 0mg最后加水至1,00 0ml贮存于棕色瓶’弋l中保存备用。

5.BCG应用液(200卜m/l)B CG贮备液20omlIM拘梅酸钠液3宁mlIM构椽酸液4 3mlBrij一35(3 0%)“3.:扭r’‘蒸馏水加至1,00 0mlpH为4.0一4.20 5%迭舞化钠液:称取迭氮化钠2 50 mg溶于蒸锻水中加至50 0ml7.白蛋 白标准液:‘ 我们采用正常人混合血清,用凯氏定氮法浏其总蛋白含量,用双缩脉法或醋酸纤维薄膜电泳法求出白蛋白的含量,再用O0 5% 迭氮化钠液将血清稀释为1一5%的白蛋白浓三、操作:1.取中号试管三支分别注明:__生理 盐水标准液被测 血清BCG 应用液测定标准空白 (R )’ (S)(B)005ml005ml005ml5.oml5.oml5.oml混匀放置3 7℃水浴中1 5一3 0分钟,用581G光电比色计比色,滤片65 0 毫微米,以空白调“O”,求得各管之光密度四、计茸:测定光密度 标准光密度x标准白蛋白克数=白蛋白克数%也可以绘制曲线,直接查曲线表,求得白蛋白百分克数五、注,事项1.BC G系一种pH指示剂,它受酸硷影响很大,故所用一切器材均须清洁,不能受酸硷污染侣只2.B C G应用液配制后每次应 用 酸度计校正pH4.o一4.2,否则对结果影响很大。

茗.本法标本用量很微,一定要准确加入,否则对结果傲咱很大 4.潭法适用予大批标本之测定,采用5 81G光电比色计65 0毫微米波长比色,结果颇为满意,若工作量不大时可用7 2型分光光度计,标本用量亦可减少5.轻度及中度脂血时对结果没有影响¹,重度脂血欲得准确结果 须 作空白管,将测定管光密度减去 空白管光密度后计算6.轻度溶血及黄疽对结果 没有影响¹,熏度溶血须重送标本本法不受高胆固醉、高菊萄糖、高球蛋白含量的影响¼、À 用上述方法我们翻定了I Q0佩正常人血清白蛋白的含量,平均值4.5克%,标准差士 3克%,正常范围3.,克一5.1克%本法与D皿二a s 报导的结果和双缩服法结果基本一致六、讨论:1.用B CG法测定血清自蛋白不外乎两类:一是利用习 仁G在中性缓冲液中与白蛋白结合在一定波长下光密度有明显下降,其降低程度与白蛋自浓度有一定关系,另一类方法是在pH40左右在BCG试剂中加入一种表面活性剂,B CG与白蛋白结合产生的颇色强度与白蛋 白的浓度呈正比Douma s法属于这一种方 法,它可以直接测定血清中白蛋白的含量,方法简单、快速、适合于脑床大批标本的检查¹2.关于BC G应用液的浓 度问题,B CG与白蛋白的亲合力很高,并且白蛋 白与BC G的浓度比率不同,结合的数量也不同。

若B CG浓度不变白蛋白浓 度增加,由于一部分B C G与白蛋白结 合,游 离的BC G下降,因此和 再增加的白蛋 白分子结合的B CG分子也相应的 下降,所以随白蛋白增加光密 度并不呈比例 的增加增加BCG浓度,可 以提高游离的B CG,提高方法的敏感性,保证标准曲线符合比尔定律,但BCG浓度过高,可使空白管光密度增高,不利于 比色测定我们采用了几种浓度的BCG溶液(如12 0卜m/l,150卜m/l,180协m/l,200件m/l,23 0协m/l,250卜m/l),与一定量的血清白蛋 白结合,其结果我们认为ZOp卜m/l浓度的B CG液与白蛋白结合为最好,BCG浓度过高过低都对结果影响很大º、¼3.表面活性剂问题:在BCG应用液中,常用的非离子去垢剂种类很多,如吐温一80、吐温一20、Brij一35、Triton x一10 0等,其作用差异较 大,我 们实验结果,认为Bri j一3 5效果为最好,它 可 以防止BCG与白蛋白复合物发生沉淀,增加复合物的溶解度,增加敏感性及增进 直线性国、¾关于Bri j一3 5的用量报告不一,Douma s指出,Brij一35的浓度高于或低于所指定的浓度时,会导致敏感度降低和直线性丧失。

我们对用量进行了探索,得出每升应用液 中 加3 0 %Bri j一3 53.8一4.oml最为合适,高于或低于此浓 度均导致敏感度降低和 直线性丧失,与Do uma s和湖南医学院附二 院 观 察的结 果相一致¹、¾4.关于标准曲线 问题:我们认为从理论上应该用纯白蛋白液来作标准曲线最为合适,但实际上并不理想我们用纯白蛋白液和混合血清来做标准曲线,发现两组差异很大为了使各种条件基本一致,我们认为此法不宜用纯 白蛋白液做标准曲线,还是以混合血清为好刃我们认为是否有可能与其他蛋白成分发生结合,导致光密度比纯白蛋白液的光密度偏高,这个问题有待 进 一步探讨º、¼5.关于 此方法的可靠性:我们对此作过一些探讨,其精密度、准确度、线性关系等均符合要求此试验的重复 性很高,同一个标本、同一个人操作十次误差不大于0.2克%回收试验证 明此方 法为为9 8一10 2 %线性关系:白蛋白在6克%以内与光密度呈直线关系,呈色后很 稳定,一般放置室温内1 0分一4 8小时内光密度无变化综上所述,我们对本试验在其方法学方面作了一些探讨,得出上述固定条件,操作简便、快速、结果准确可靠,不需要特殊设备和试剂,经我们在临床上一年多来的 应用认为满意,不失为一个符合多、快、好、省的好方法。

考资料Douma s.B.T.etal:Determ iationofs erumalbu口instaoda rdme一thodofeliniealehemistryVo e:TI T5一18 8,Ae一ademiePre ssNewYork.1972重庆药剂学校:澳甲酚绿 白蛋白测定法,临床生化:P.174一176.19 77重庆市中西医结合防治研究传染性肝炎协作小组:血清总蛋 白、白蛋白、球蛋白测定—双缩服法.重庆市常用肝功能操作规程(内部资料):P.2 0 一2 3,19 73重庆市第三人民医院检验科 生化 组:BCG结合白蛋白的各种影 响因素 的 探讨(内部资料)湖南医学院附二院:快速白蛋白测定法.湖南医学杂志,2:4 e,19了 7甘肃省卫生局:临床检验资料汇编,P.1 04一10 8.人民卫生出版社.19了T。