液相出峰异常解决方法.docx

诊状（一）保留时间变化可能的原因 : 解 决 方 法1. 柱温变化 : 柱恒温2. 等度与梯度间未能充分平衡 : 至少用 10 倍柱体积的流动相平衡柱3•缓冲液容量不够：用〉25mmol/L的缓冲液4. 柱污染 : 每天冲洗柱5. 柱内条件变化：稳定进样条件，调节流动相6•柱快达到寿命：采用保护柱（二） 保留时间缩短可能的原因 ： 解 决 方 法1. 流速增加 ： 检查泵，重新设定流速2. 样品超载 ： 降低样品量3. 键合相流失 ： 流动相 PH 值保持在 3~7.5 检查柱的方向4. 流动相组成变化 ： 防止流动相蒸发或沉淀5. 温度增加 ： 柱恒温（三） 保留时间延长可能的原因 ： 解 决 方 法1. 流速下降 ： 管路泄漏，更换泵密封圈，排除泵内气泡2. 硅胶柱上活性点变化 ： 用流动相改性剂，如加三乙胺，或采用碱至钝化柱3. 键合相流失 ： 流动相 PH 值保持在 3~7.5 检查柱的方向4. 流动相组成变化 ： 防止流动相蒸发或沉淀5. 温度降低 ： 柱恒温（四） 出现肩峰或分叉可能的原因 ： 解 决 方 法1. 样品体积过大 ： 用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的 15%2. 样品溶剂过强 ： 采用较弱的样品溶剂3. 柱塌陷或形成短路通道 ： 更换色谱柱，采用较弱腐蚀性条件4. 柱内烧结不锈钢失效 ： 更换烧结不锈钢，加过滤器，过滤样品5. 进样器损坏 ： 更换进样器转子（五）鬼峰可能的原因 : 解 决 方 法1. 进样阀残余峰 : 每次用后用强溶剂清洗阀,改进阀和样品的清洗2. 样品中未知物 : 处理样品3. 柱未平衡 : 重新平衡柱,用流动相作样品溶剂 （尤其是离子对色谱）4•三氟乙酸（TFA）氧化（肽谱）：每天新配，用抗氧化剂5.水污染（反相） : 通过变化平衡时间检查水质量，用 HPLC 级的水（六）基线噪声可能的原因 ： 解 决 方 法1•气泡（尖锐峰）:流动相脱气，加柱后背压2•污染（随机噪声）:清洗柱，净化样品，用HPLC级试剂3•检测器灯连续噪声：更换氘灯4•电干扰（偶然噪声）:采用稳压电源，检查干扰的来源（如水浴等）5•检测器中有气泡：流动相脱气，加柱后背压（七） 峰拖尾可能的原因 : 解 决 方 法1•柱超载：降低样品量,增加柱直径采用较高容量的固定相2•峰干扰：清洁样品，调整流动相3•硅羟基作用加三乙胺,用碱致钝化柱增加缓冲液或盐的浓度降低流动相PH值，钝化样品4•柱内烧结不锈钢失效：更换烧结不锈钢,加过滤器，过滤样品5•柱塌陷或形成短路通道：更换色谱柱,采用较弱腐蚀性条件6•死体积或柱外体积过大：连接点降至最低，对所有连接点作合适调整，尽可能采用细内 径的连接管7•柱效下降：用较低腐蚀条件,更换柱，采用保护柱（八） 峰展宽可能的原因 ： 解 决 方 法1•进样体积过大：用流动相配样，总的样品体积小于第一峰的15%2•在进样阀中造成峰扩展：进样前后排出气泡以降低扩散3•数据系统采样速率太慢：设定速率应是每峰大于10点4•检测器时间常数过大：设定时间常数为感兴趣第一峰半宽的10%5.流动相粘度过高 : 增加柱温,采用低粘度流动相6. 检测池体积过大 : 用小体积池,卸下热交换器7. 保留时间过长 : 等度洗脱时增加溶剂含量也可用梯度洗脱8. 柱外体积过大 : 将连接管径和连接管长度降至最小9. 样品过载 : 进小浓度小体积样品。