白蛋白测定与线性范围试验课件.ppt

血清总蛋白（血清总蛋白（TP）测定）测定与线性范围试验与线性范围试验白蛋白测定与线性范围试验课件一、双缩脲法测定血清总蛋白一、双缩脲法测定血清总蛋白（（TP））二、线性范围试验二、线性范围试验白蛋白测定与线性范围试验课件1.1.实验目的：实验目的：•掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理、方法掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理、方法•熟悉熟悉722分光光度计的使用分光光度计的使用•了解了解TP测定的临床意义测定的临床意义一、一、双缩脲法测定血清总蛋白双缩脲法测定血清总蛋白（（TP））白蛋白测定与线性范围试验课件+Cu2+ OH-2.2.实验原理：实验原理：CO(NH2) 2 + CO(NH2) 2缩合缩合H2N-OC-NH-CO-NH2紫红色化合物紫红色化合物（（1）双缩脲反应：）双缩脲反应：白蛋白测定与线性范围试验课件 OH-蛋蛋白白质质分分子子中中的的肽肽键键 + + 铜铜离离子子 紫紫红红色色复复合合物物 （（-CO-NH-）） Cu2+•紫紫色色复复合合物物在在540nm波波长长有有特特定定的的吸吸收收峰峰，，其其颜颜色色的的深深浅浅（（吸吸光光度度））与与蛋蛋白白质质的的浓浓度度在在一定范围内一定范围内成正比。

成正比•此此反反应应和和2个个尿尿素素分分子子缩缩合合后后生生成成的的双双缩缩脲脲在在碱碱性性溶溶液液中中与与Cu2+作作用用生生成成紫紫红红色色复复合合物物的反应相似，故称双缩脲反应的反应相似，故称双缩脲反应2 2）双缩脲法测定）双缩脲法测定TP的原理的原理白蛋白测定与线性范围试验课件 3. 3.实验材料：实验材料：•试剂：试剂：（（1 1）商品双缩脲试剂）商品双缩脲试剂 （（2 2）自配双缩脲试剂）自配双缩脲试剂 （（3 3）血清样品）血清样品 （（4 4）总蛋白标准液（）总蛋白标准液（70.0g/L70.0g/L））•器材：器材：试管、加样枪、吸量管试管、加样枪、吸量管 、、722722分光光分光光度计、水浴箱度计、水浴箱白蛋白测定与线性范围试验课件4.4.实验方法：实验方法：取取5 5支试管，按下表操作：支试管，按下表操作：白蛋白测定与线性范围试验课件另取另取5支试管，按下表操作：支试管，按下表操作：白蛋白测定与线性范围试验课件5.5.实验结果：实验结果：白蛋白测定与线性范围试验课件•参考值：参考值： 60~82g/L•结合实验数据分析结果进行讨论结合实验数据分析结果进行讨论, ,用用SPSS13.0SPSS13.0分析两组数据间有无统计学意义（配对分析两组数据间有无统计学意义（配对t t检验）检验）。

白蛋白测定与线性范围试验课件 6.6.总蛋白测定的临床意义：总蛋白测定的临床意义：（（1 1）血清总蛋白浓度增高见于：）血清总蛋白浓度增高见于： a. a.蛋白质合成增加（如多发性骨髓瘤）；蛋白质合成增加（如多发性骨髓瘤）； b. b.血浆浓缩（如呕吐、严重腹泻、高烧）血浆浓缩（如呕吐、严重腹泻、高烧）白蛋白测定与线性范围试验课件（（2 2）血清总蛋白浓度降低见于：）血清总蛋白浓度降低见于： a. a.蛋白质合成障碍（如肝严重受损）；蛋白质合成障碍（如肝严重受损）； b.b.蛋蛋白白质质丢丢失失增增加加（（如如严严重重烧烧伤伤、、肾肾病病综综合合征）；征）； c.c.营营养养不不良良或或消消耗耗增增加加（（如如低低蛋蛋白白饮饮食食、、严严重结核病、甲亢）；重结核病、甲亢）； d. d.血液稀释血液稀释白蛋白测定与线性范围试验课件•配对样本是指配对样本是指同一样本同一样本进行两次测试所获得进行两次测试所获得的两组数据，或对的两组数据，或对两个完全相同两个完全相同的样本在不的样本在不同条件下进行测试所得的两组数据同条件下进行测试所得的两组数据•SPSS13.0操作：操作：1、录入数据；、录入数据；2、选择菜单：、选择菜单：Analyze > Compare Means >Paried-Sample T Test3、生成统计结果，查看、生成统计结果，查看P“sig.(2-tailde)”（值（（值（P值值>0.05，可以认为两种方法的结果，可以认为两种方法的结果差别无显著性差异；差别无显著性差异；P<0.05，有显著性差异。

有显著性差异 白蛋白测定与线性范围试验课件7.7.注意事项：注意事项：（（1 1））样样品品中中TPTP含含量量超超过过100.0g/L100.0g/L则则用用蒸蒸馏馏水水稀释后测定，结果乘以稀释倍数稀释后测定，结果乘以稀释倍数2 2））黄黄疸疸、、溶溶血血标标本本对对本本法法有有干干扰扰，，故故用用标标本空白管来消除本空白管来消除3 3）取量要准确，操作要规范取量要准确，操作要规范白蛋白测定与线性范围试验课件8.8.思考题：思考题：（（1 1）氨基酸可以用双缩脲法测定吗？为什么？）氨基酸可以用双缩脲法测定吗？为什么？（（2 2）结合实验数据分析结果进行讨论，最后得）结合实验数据分析结果进行讨论，最后得出本次实验的结论出本次实验的结论白蛋白测定与线性范围试验课件二、线性范围试验二、线性范围试验1.1.实验目的：实验目的：•通过线性范围的测定，选择线性段作为该测通过线性范围的测定，选择线性段作为该测定方法的分析范围定方法的分析范围•掌握线性范围试验的评价及意义掌握线性范围试验的评价及意义•熟悉线性范围试验的具体操作过程熟悉线性范围试验的具体操作过程白蛋白测定与线性范围试验课件•在在比比色色分分析析中中，，在在符符合合Lambert-Beer定定律律的的条条件件下下，，有有色色溶溶液液的的吸吸光光度度与与被被测测物物质质浓浓度成正比。

度成正比•以以标标准准物物质质浓浓度度C为为横横坐坐标标，，吸吸光光度度A为为纵纵坐坐标标，，可可在在普普通通方方格格纸纸上上绘绘出出一一条条直直线线，，即即剂剂量反应曲线或校正曲线量反应曲线或校正曲线2.2.实验原理：实验原理：白蛋白测定与线性范围试验课件•在此情况下，待测物浓度与吸光度的比值为在此情况下，待测物浓度与吸光度的比值为一常数，直线上任何一点的斜率一常数，直线上任何一点的斜率tanθ都相等，都相等，即即tanθ=A1/C1=A2/C2=A3/C3=……An/Cn=K此处此处K即为校正常数即为校正常数白蛋白测定与线性范围试验课件•在在实实际际工工作作中中并并不不存存在在理理想想的的反反应应曲曲线线，，当当被被测测物物浓浓度度过过高高、、仪仪器器处处于于非非理理想想状状态态时时，，都都可可导导致致对对Lambert-Beer定定律律的的偏偏离离，，出出现正偏离和负偏离现象现正偏离和负偏离现象白蛋白测定与线性范围试验课件•因因此此，，新新建建立立的的分分析析方方法法，，其其线线性性范范围围尚尚未未确确 定定 时时 ，， 为为 较较 准准 确确 地地 测测 出出 该该 方方 法法 符符 合合Lambert-Beer定定律律的的浓浓度度范范围围，，我我们们需需要要进行线性范围的测定。

进行线性范围的测定白蛋白测定与线性范围试验课件•线性范围的确定：线性范围的确定： 要要求求能能覆覆盖盖临临床床上上的的参参考考值值和和常常见见疾疾病病的的医医学学决决定定水水平平，，以以减减少少标标本本稀稀释释重重测测的的机机会白蛋白测定与线性范围试验课件3.3.实验材料：实验材料：•试剂：试剂：自配双缩脲试剂、自配双缩脲试剂、TP标准液、质控标准液、质控血清（用蒸馏水稀释，浓度为血清（用蒸馏水稀释，浓度为120g/L）•需用到的公式：需用到的公式： C1*V1=C2*V2•器材：器材：试管、加样枪、吸量管、试管、加样枪、吸量管、722分光光分光光度计、水浴箱度计、水浴箱白蛋白测定与线性范围试验课件取取试试管管31支支，，除除空空白白管管外外，，1~10号号管管各各做做3个个平平行行管，一共有管，一共有10个浓度按表三加样：个浓度按表三加样：4.4.实验方法：实验方法：白蛋白测定与线性范围试验课件5.5.实验结果：实验结果：所得数据如实填入表四：所得数据如实填入表四：白蛋白测定与线性范围试验课件6.6.注意事项：注意事项：（（1 1））标标本本、、试试剂剂的的加加量量必必须须十十分分准准确确，，应应用用加加样枪进行加样。

样枪进行加样2 2））稀稀释释时时，，应应使使测测定定管管系系列列成成为为精精确确的的浓浓度度等差系列等差系列3 3））质质控控血血清清稀稀释释时时，，要要严严格格规规范范操操作作，，准准确确加样白蛋白测定与线性范围试验课件（（4 4））同同一一浓浓度度应应采采用用三三管管平平行行操操作作，，初初步步判判断断测测出出的的吸吸光光度度值值，，若若相相差差超超过过0.100，，应应去去掉其中的异常数值后再算平均值掉其中的异常数值后再算平均值5 5））标标准准溶溶液液和和样样品品溶溶液液的的蛋蛋白白质质浓浓度度均均应应超超过过10mg/mL白蛋白测定与线性范围试验课件7.7.数据处理与分析：数据处理与分析：（（1）用）用Excel软件制作出浓度软件制作出浓度C 对吸光度值对吸光度值A的标准曲线图，求出线性范围的标准曲线图，求出线性范围2））采采用用SPSS13.0软软件件对对线线性性范范围围内内的的浓浓度度C 与与对对应应吸吸光光度度值值A作作直直线线回回归归分分析析，，求求出出回回归归方方程程ŷ=a + bx，，并并求求出出相相关关系系数数（（r））和和决定系数决定系数（（r2）白蛋白测定与线性范围试验课件（一）线性回归白蛋白测定与线性范围试验课件•在在两两个个具具有有相相关关关关系系的的变变量量的的一一组组数数据据（（X与与Y））间间，，通通过过散散点点图图我我们们可可观观察察出出所所有有数数据据点点都都分分布布在在一一条条直直线线附附近近，，这这样样的的直直线线可可以以画画出出许许多多条条，，而而我我们们希希望望其其中中的的一一条条能能最最好好地地反反映映X与与Y之之间间的的关关系系，，即即我我们们要要找找出出一一条条直直线线，，使使这这条条直直线线““最最贴贴近近””已已知知的的数数据点。

据点白蛋白测定与线性范围试验课件•线线性性回回归归————用用直直线线方方程程表表达达X（（自自变变量量））和和Y（因变量）之间的数量关系因变量）之间的数量关系•ŷ：：是是y（（实实测测值值））的的预预测测值值，，表表示示当当x取取值值xi=（（1，，2，，……，，n））时时，，y相相应应的的预预测值测值为为yi•ŷ=a+bx称称为为Y对对X的的回回归归直直线线方方程程，，相相应应的直线称为回归直线的直线称为回归直线白蛋白测定与线性范围试验课件•a：：是是回回归归直直线线在在Y轴轴上上的的截截距距，，即即X=0时时Y的预测值的预测值•b：：是是回回归归直直线线的的斜斜率率，，又又称称为为回回归归系系数数表表示示自自变变量量X对对因因变变量量Y影影响响大大小小的的参参数数，，即即当当X改改变变一一个个单单位位时时，，Y的的预预测测值值平平均均改改变变|b|个单位•要要确确定定回回归归直直线线方方程程，，只只要要确确定定截截距距a与与回回归系数归系数b即可白蛋白测定与线性范围试验课件•回归直线的求法回归直线的求法 　　 最小二乘法：最小二乘法： 各实测点到直线的纵向距各实测点到直线的纵向距离的平方和最小。

离的平方和最小白蛋白测定与线性范围试验课件•直直线线相相关关————如如果果两两个个随随机机变变量量中中，，一一个个变变量量由由小小到到大大变变化化时时，，另另一一个个变变量量也也相相应应地地由由小小到到大大( (或或由由大大到到小小) )地地变变化化，，并并且且测测得得两两个个变变量量组组成成的的坐坐标标点点在在直直角角坐坐标标系系中中呈呈直直线线趋趋势，就称这两个变量存在直线相关关系势，就称这两个变量存在直线相关关系•可用相关系数可用相关系数r表示二）直线相关白蛋白测定与线性范围试验课件•相相关关系系数数r————是是说说明明有有直直线线关关系系的的两两个个变变量量间间相相关关关关系系的的密密切切程程度度和和相相关关方方向向的的统统计计指指标•相关系数没有单位，其值相关系数没有单位，其值- -1 ≤r≤ 1•|r|越大，两变量的关系越密切越大，两变量的关系越密切白蛋白测定与线性范围试验课件•当当两两变变量量呈呈同同向向变变化化时时，，0＜＜r＜＜1，，为为正相关；正相关；•r=1为完全正相关为完全正相关白蛋白测定与线性范围试验课件•当当两两变变量量呈呈反反向向变变化化时时，，-1＜＜r＜＜0，，为为负相关负相关；；•r=-1为完全负相关。

为完全负相关白蛋白测定与线性范围试验课件•r=0为为零零相相关关，，表表示示无无直直线线相相关关关系关系 白蛋白测定与线性范围试验课件•决决定定系系数数r²：：反反映映了了回回归归平平方方和和占占总总平平方方和和的的比比例例，，其其越越接接近近于于1，，回回归归直直线线拟拟和和的的效效果越好•拟拟合合度度越越大大，，自自变变量量X对对因因变变量量Y的的解解释释程程度度越越高高，，自自变变量量引引起起的的变变动动占占总总变变动动的的百百分分比高，观察点在回归直线附近越密集比高，观察点在回归直线附近越密集 白蛋白测定与线性范围试验课件•相相关关：：表表达达两两个个变变量量之之间间相相互互关关系系的的密密切切程程度和方向度和方向•回回归归：：表表达达两两个个变变量量之之间间的的数数量量关关系系，，已已知知X值可以预测值可以预测Y值白蛋白测定与线性范围试验课件8.8.思考与讨论思考与讨论（（1 1））结结合合实实验验数数据据分分析析的的结结果果进进行行讨讨论论，，最最后后得出本次实验的结论得出本次实验的结论2 2）线性范围试验在方法学评价中有何作用？）线性范围试验在方法学评价中有何作用？白蛋白测定与线性范围试验课件SPSS13.0统计学软件统计学软件回归分析步骤回归分析步骤1、、SPSS13.0软件的安装：软件的安装：（（1）运行）运行“SPSS13Eval，点击，点击“下一步下一步”，，直至安装完成；直至安装完成；（（2）复制）复制“Patch.exe”至至SPSS安装文件夹安装文件夹（默认为（默认为C：：\Program Files\SPSSEVAL），），“运行运行”→“破解破解”。

白蛋白测定与线性范围试验课件2、、运行运行SPSS13.0，选择，选择““输入数据输入数据”” ：：白蛋白测定与线性范围试验课件4、、修改小数点和输入标签名称修改小数点和输入标签名称 ：：5、、选择选择“Data View”选项卡选项卡 ：：3、、选择选择“Variable View”选项卡选项卡 ：：白蛋白测定与线性范围试验课件6、、输入数据，注意输入数据，注意““自变量自变量””和和““因变量因变量””所对应的位置所对应的位置 ：：白蛋白测定与线性范围试验课件7、选择、选择“分析分析”→“回归分析回归分析” →“线性线性” ：： Analyze >Regression >Linear 白蛋白测定与线性范围试验课件8、、选择自变量选择自变量（（X），），因变量因变量（（Y））：：将将“因变量因变量”选入选入“Dependent”下框内，下框内，“自自变变量量”选选入入“Independent”下下框框，，点点击击“OK” 白蛋白测定与线性范围试验课件9、、生成分析结果生成分析结果“Regression”并标注并标注 ：：白蛋白测定与线性范围试验课件白蛋白测定与线性范围试验课件。