ABCD人民医院PCR室标准操作程序.doc

ABCD人民医院质量管理体系文件ABCD 人民医院临床基因扩增检验实验室临床基因扩增检验实验室标准操作文件（SOP）（通用模板）起草人： 李继刚批准人： 李继刚生效日期： 年 月 日前 言ABCD 人民医院 PCR 实验室建于 2008 年 08 月实验室的设置、设备及人员配置均严格按照部、省临床基因诊断实验室规范化标准结合自身条件而建立各项管理制度、质量保证体系以及基本操作要求和标准操作程序均已制定ABCD 人民医院 PCR 实验室将面向 ABCD 市及周边地区，开展临床基因诊断实验和相关知识的培训工作，使被培训人员掌握临床基因诊断基础理论知识、实验室管理和质量保证措施、规范化操作方法以及了解基因诊断领域的进展同时还将开展基因的临床检测及科学研究工作，为我省临床基因诊断事业的发展做出一份贡献作者联系方式：15150041174，lijigang212888@，:910625183，交流群：81722743李继刚2008 年 9 月 质量方针ABCD 人民医院基因扩增诊断实验室是严格按照部、省临床基因扩增实验室规范化标准进行管理与操作，始终遵循：以病人为中心以质量为核心以科学为保障PCR 实验室标准操作文件目录序号 主 题 内 容 代 号 页 号1 Fluocycle 定量 PCR 仪使用和维护标准操作程序 ABCD-3-PCR-01 12 离心机的使用和维护标准操作程序 ABCD-3-PCR-02 33 真空泵的使用和维护标准操作程序 ABCD-3-PCR-03 44 生物安全柜的使用与维护标准操作程序 ABCD-3-PCR-04 65 恒温金属浴的使用和维护标准操作程序 ABCD-3-PCR-05 86 漩涡振荡器使用和维护标准操作程序 ABCD-3-PCR-06 97 移液器使用和维护标准操作程序 ABCD-3-PCR-07 108 冰箱的使用和维护标准操作程序 ABCD-3-PCR-08 149 电热水浴锅标准操作程序 ABCD-3-PCR-09 1510 紫外消毒车标准操作程序 ABCD-3-PCR-10 1611 温湿度计使用标准操作程序 ABCD-3-PCR-11 1712 湿热高压灭菌锅标准操作程序 ABCD-3-PCR-12 1813 凝胶成像仪标准操作规程 ABCD-3-PCR-13 1914 传递窗的使用和维护标准操作程序 ABCD-3-PCR-14 2015 仪器故障标记标准操作程序 ABCD-3-PCR-15 2116 感受态大肠杆菌制备标准操作程序 ABCD-3-PCR-16 2217 定量 PCR 标准品制备标准操作程序 ABCD-3-PCR-17 2418 定量 PCR 标准品稀释标准操作程序 ABCD-3-PCR-18 2619 临床标本的采集标准操作程序 ABCD-3-PCR-19 2720 标本验收和保存标准操作程序 ABCD-3-PCR-20 2921 样品编号的标准操作程序 ABCD-3-PCR-21 3222 实验结果有效性判断标准操作程序 ABCD-3-PCR-22 3323 实验记录及保存标准操作程序 ABCD-3-PCR-23 34文件编号：ABCD-PCRABCD 人民医院 PCR 实验室文件版本/修订号：A/0生效日期：200809主题内容 目 录第 1 页 文件编号：ABCD-PCRABCD 人民医院 PCR 实验室文件版本/修订号：A/0生效日期：200809主题内容 目 录第 2 页 序号 主 题 内 容 代 号 页 号23 室内质控标准操作程序 ABCD-3-PCR-23 3624 试剂质检标准操作程序 ABCD-3-PCR-24 3925 实验室耗材消毒和质检标准操作程序 ABCD-3-PCR-25 4126 实验室常用溶液配制标准操作程序 ABCD-3-PCR-26 4327 实验室清洁消毒操作程序 ABCD-3-PCR-27 4628 乙型肝炎病毒 DNA 扩增标准操作规程 ABCD-3-PCR-28 4829 丙型肝炎病毒定量检测标准操作程序 ABCD-3-PCR-29 5430 HBV6，11 型核酸定量检测标准操作程序 ABCD-3-PCR-30 5831 HBV6，11 型核酸定量检测标准操作程序 ABCD-3-PCR-31 61Fluocycle 定量 PCR 仪使用和维护标准操作程序1 目的：正确使用定量 PCR 仪，保证结果的准确度和精密度，同时保证 PCR 仪使用寿命。

2 适用范围：Fluocycle 荧光定量 PCR 仪3 责任人：李继刚 弓长张4 操作规程4.1 打开仪器仓盖，检查样本仓内有无灰尘若有灰尘可以使用 75%的酒精棉球擦拭样本仓，温度敏感器和激发光源必须小心擦拭4.2 打开电脑和操作软件，然后打开仪器电源4.3 点击“编辑运行”按钮，仪器开始通讯检查和自检4.4 自检通过后，进入样品编辑界面，新建或打开已有样品信息4.5 输入样品数，空白处双击后可以输入样品信息，选择样品种类，输入标准品浓度，保存样品信息点击“运行” ，进入温度设置界面，同时机器开始找位4.6 打开已有参数或新建一个参数，根据试剂厂家提供的说明书设置反应条件和信号采集点，点击插入或删除可以增加或删除温度4.7 保存参数，点击运行，出现反应曲线和温度曲线，此时可以选择信号通道，对 PCR 反应进行实时监控，Taqman 探针一般选择 F1 通道反应结束后，返回主界面，点击“数据分析”，进入分析界面，选择分析通道和分析方法，Taqman 探针一般选择 F1 通道，在方差法中软件自动选择阈值，在最小二乘法中可以手工调节阈值线记录数据并包粗分析结果4.8 如果要打印报告，返回主界面，设置病人信息和打印模式，点击“打印报告”文件编号：ABCD-3-PCR-01ABCD 人民医院 PCR 室 SOP 文件 版本/修订号：A/0生效日期：200809主题内容 Fluocycle 定量 PCR 仪使用和维护标准操作程序第 1 页4.9 实验结束后，首先在软件主界面点击“退出” ，然后再关闭仪器和电脑，使用专用工具将所有样品全部取出，丢于专用垃圾袋中，并将口封好。

注意要点：（1）相关系数小于 0.99 时，报告不能发出，应该寻找原因，重做实验阴性对照和空白对照的 Ct 值小于 35 时应该考虑试剂或耗材污染2）上机操作时防止污染的常见方法有两种：一种是养成左右手分开的习惯，接触样品或PCR 产物的手不能接触移液器、仪器和电脑，第二种是上机前将手套全部摘下4.2 维护保养：4.2.1 每次检测前后对仪器的外表及内在可清洁部位用 75%乙醇进行清洁4.2.2 使用前及使用后，使用者应注明仪器运行，使用情况，如仪器性能，检测项目运行正常与否并作相应记录（记录表另备） 4.2.3 仪器 运行过程中不能打开盖子，否则会造成仪器的永久损坏！！！4.2.4 运行过程中若样品室内有玻璃破碎的声音，必须立即停止运行，检查样品室中是否有毛细管破裂4.2.5 若毛细管破裂，用镊子将玻璃夹出，用消毒液擦洗污染处，然后用酒精棉球擦干净4.2.6 每天工作结束后取出仪器中的所有样品，将仪器表面以及鼠标等擦拭干净4.2.7 每周工作结束后清楚通风口上的灰尘，保证风口通畅4.2.8 定期擦拭样品室，温度敏感器和激发光源等要用酒精棉球小心擦拭4.2.9 每周的第一次检测前对仪器进行自检程序的操作使仪器对自身的运行情况进行质控。

文件编号：ABCD-3-PCR-01ABCD 人民医院 PCR 室 SOP 文件版本/修订号：A/0生效日期：200809主题内容 Fluocycle 定量 PCR 仪使用和维护标准操作程序第 2 页离心机使用与维护标准操作程序1 目的：保证离心机的正常使用2 适用范围：各种品牌、型号的高速离心机3 操作人 李继刚4 操作4.1 使用方法：4.1.1 高速离心机a)离心机应放在水平坚固的地板或平台上，并力求使仪器处于水平位置以免离心时造成仪器振荡b)打开电源开关，将预先平衡好的样品对称放置于转头的样品架上，关闭机盖c)旋动定时旋钮设定离心时间，按下“转速度/ 离心力” 按钮，缓慢旋转转速调节旋钮使仪器转速达到预定的要求d)按下”启动 /停止” 按钮；e)离心完毕后，将转速调节旋钮调回零位，关闭电源开关f)待离心机停止转动时按下左边的按钮同时打开机盖，取出离心样品，再次关闭机盖结束离心4.1.2 掌上离心机a)离心机应放在水平坚固的地板或平台上，并力求使仪器处于水平位置以免离心时造成仪器振荡b)将预先平衡好的样品对称放置于转头的样品架上，关闭机盖c)打开电源开关文件编号：ABCD-3-PCR-02ABCD 人民医院 PCR 室 SOP 文件 版本/修订号：A/0生效日期：200809主题内容 离心机使用与维护标准操作程序 第 3 页4.2 校准：每年 6 月、12 月请本单位专业设备科专业人员对该类仪器进行定期检修校准。

5 使用时的注意事项：5.1 离心机应始终处于水平位置，外接电源系统的电源要匹配，并要有良好的接地线;开机前应检查机腔内有无异物掉入5.2 样品应预先平衡，使用离心机微量离心时离心套管与样品应同时平衡;使用离心机应遵守左右手分开原则，只以右手仪器操作5.3 挥发性或腐蚀性液体离心时应使用带盖的离心管，并确保液体不外漏，以免侵蚀机腔或造成事故5.4 离心机运行时，离心机周围 30cm 范围内不得有人与危险物品5.5 每次操作完毕，应做好使用情况记录，每年 6 月、12 月请检验所专业人员对仪器各项性能进行检修5.6 离心过程中如发现异常现象，应立即关闭电源，报请有关技术员检修5.7 每年 6 月、12 月视使用频率而由设备科专业人员行清洁机腔和转头5.8 离心机的维护：一般清洁见实验室清洁程序中的高速离心机的清洁；离心及转子的清洁（每月一次）：应先拨掉电源线，打开离心机盖，用专用设备将离心机转子旋下，再用中性去污剂（75%的异丙醇/水混合物/或乙醇去污染）清洁离心室；离心室内的橡胶密封圈经去污剂处理后用水冲洗，再用甘油润滑 5.9 离心机的转速用相对离心力表示离心机转速与相对离心力（RCF）换算公式如下：N =（RCF×105）/（1.18×R）RCF = 0.011238095×R×NN 表示转速，单位为转/分(r/min)；R 表示离心半径，即离心管底端至轴心的距离，单位为厘米(cm)；RCF 表示相对离心力，单位用重力加速度 g(g = 9.8 m/s)；文件编号：ABCD-2-PCR-02ABCD 人民医院 PCR 室 SOP 文件 版本/修订号：A/0生效日期：200809主题内容 离心机使用与维护标准操作程序 第 4 页6 程序的变动程序：可由任一使用本 SOP 的工作人员提出，并报经实验室主管、总经理批准签字。

真空泵使用和维护标准操作程序1. 目的保证设备的正常运转和实验结果的可靠性2. 适用范围PCR 室二区负压抽提系统，包括上海汇博 RS-1A 型负压泵和 Axygen 管架3. 责任人4.操作步骤4.1 检查真空泵中的润滑油量，严禁无油运行；4.2 安装 Axygen 管架，注意一定要在管子的下方放置废液缸，防止废液进入真空泵；4.3 检查连接处的气密性，连接处的橡胶用水湿润4.4 打开柱子的开关，保证通气，打开负压泵右边的电源开关，将 Axygen 架子开关调到 ON,再将控制开关调到最大，关闭柱子开关，用干净的纸张等放在柱子口上，检查有无负压；4.5 将抽提柱插在 Axygen 管架的柱子上，注意插紧，根据试剂盒说明书要求抽提 DNA 等物质4.6 用毕将废液缸取出，废液倒入水池，清洗废液。