肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会课件.ppt

常见肝病的病理形态特点及免常见肝病的病理形态特点及免疫组化染色的几点体会疫组化染色的几点体会￿复旦大学病理学系张锦生1肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会肝穿刺标本检查和处理原则肝穿刺标本检查和处理原则1. 1. 肉眼观察 　肝穿刺标本呈完整园柱状，长度1 1－3 cm3 cm　典型的慢性肝炎肝纤维化标本呈竹节状外观　肝硬化的穿刺标本，呈不规则碎块2肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会2.石蜡切片￿￿　每张玻片上应放置超过6个连续组织切片，有助于肝纤维化的病理诊断3肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会3. 3. 染色 除常规ＨＥ染色供病理诊断用之外，根据条件　　　　和需要作以下特殊染色：　①①网状纤维染色，　②②MassonMasson三色染色，　③③胶原纤维染色(Sirius red(Sirius red或免疫组化 ) ) 4肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会④ Dm-HSC④ Dm-HSC⑤ α-SMA-MFb⑤ α-SMA-MFb Dmα-SMA5肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会S1S2S3S4各种病因引起肝纤维的病理学特点及分期各种病因引起肝纤维的病理学特点及分期1. 1. 慢性肝炎肝纤维化慢性肝炎肝纤维化 ( Dr.Scheuer ( Dr.Scheuer 方案）方案）6肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会活动性纤维间隔　　　　　　　　静止性纤维间隔活动性纤维间隔　　　　　　　　静止性纤维间隔7肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会2.2.脂肪性肝病肝纤维化脂肪性肝病肝纤维化 3.3.穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液　　　　　　小叶中央区纤维化　　　　　　　　　　　窦周纤维化小叶中央区纤维化　　　　　　　　　　　窦周纤维化8肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会3. 3. 肝糖原累积病肝纤维肝糖原累积病肝纤维 9肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会4. Wilson病病 红氨酸(Rubeanic acid)染色,铜被染成深绿色10肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会5. 血色病血色病 穿刺肝组织因含有大量含铁血穿刺肝组织因含有大量含铁血黄素沉着呈火焰红色黄素沉着呈火焰红色肝细胞普鲁氏蓝染色阳性11肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会6. 6. 自身免疫性肝炎肝纤维化（自身免疫性肝炎肝纤维化（AIHAIH）） 门管区肝细胞呈花环状排列门管区肝细胞呈花环状排列Hepatic Rosette Hepatic Rosette ，表现为数个水样变性，表现为数个水样变性的肝细胞被炎症细胞和塌陷的网状支架包绕成花环状结构。

的肝细胞被炎症细胞和塌陷的网状支架包绕成花环状结构12肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会7. 7. 原发性胆汁性肝硬化（原发性胆汁性肝硬化（PBCPBC）） 3 3期（间隔期）期（间隔期）90%90%出现自身抗体出现自身抗体(A-Mit)(A-Mit)，，Florid duct lesion+Biliary PNFlorid duct lesion+Biliary PN，， 纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性4 4期（肝硬化）期（肝硬化） 静止静止- - 纤维间隔内无炎症或轻度炎症纤维间隔内无炎症或轻度炎症 活动活动 – Fibrous PN. – Fibrous PN. 13肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会8. 8. 血吸虫性肝纤维化血吸虫性肝纤维化 14肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会肝癌(LIVER￿CANCER)•HCC•ICC•Combined￿hepatocellular￿and￿cholangiocarcinoma15肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会肝癌病理诊断常用免疫组化和特染肝癌病理诊断常用免疫组化和特染•Hep￿Par1￿￿￿线粒体相关抗原，与AFP无关　对胎儿和成人肝细胞高度特异￿￿￿(HCC:阳性率82-97%）　16肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会•AFP　HCC阳性率：15-82%17肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会•CD34:￿￿HCC型染色　　长条分枝，管壁纤细，管腔狭窄，分布均匀弥漫.而非癌肝组织内极少见.18肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会•CK￿18:￿￿￿HCC,ICC,￿Metastatic￿carcinoma:100%+￿￿￿上皮性肿瘤标志物19肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会•CK￿19:￿￿胆管型CK:￿CK19,CK7￿￿肝细胞　－￿￿胆管上皮，ICC：77-100%￿￿ICC最好的标志物20肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会•CEA：￿￿monoclonal￿CEA:毛细胆管－　　　　ICC，转移性肝癌：60-75%+￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿HCC:0-11%+￿￿polyclonal￿CEA:￿毛细胆管＋　HCC特异标志物之一　　　　21肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会•CK￿20:￿胃肠道腺癌的主要标志物　转移性腺癌：74-100%+￿￿￿￿ICC:10%+￿￿￿￿HCC:0%+22肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会•MOC31:￿抗人上皮相关抗原　转移性腺癌：100%+￿￿￿￿ICC:￿92.9%+￿￿￿￿HCC:￿0%￿+￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿胃癌肝转移23肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会•HBsAg: HCC: 70-80% +胞质型，胞核型阳性胞质型，核周型阳性24肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会•黏液染色：AB/PAS￿￿￿酸性黏多糖：兰色（胆管腺瘤,ICC腔内黏液）　中性黏多糖,糖原：红色（假腺管型HCC)　25肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会免疫组织化学染色的几点体会免疫组织化学染色的几点体会一、组织和细胞标本制备•目的：•(1)最大限度地保存组织结构。

•(2)最大限度地保存抗原性•注意事项：在选择组织处理方法前，先根据实验目的，参考抗体说明，确定组织处理方式(冰冻?石蜡?)26肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会1.取材•（1）原则：尽可能新鲜，动物标本可选•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿用动脉灌注固定•（2）取材部位：尽量包括病灶和正常组•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿织交界处，避免选择坏死组织•（3）避免挤压：受挤压组织不但影响•￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿HE切片的观察，还造成非特异性•￿￿￿￿￿￿￿￿￿免疫组化组织着色27肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会2.固定•根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新鲜越好组织块厚薄大小要合适•容器要大,固定液要宽余.•固定时间既要考虑充分固定,又不能太长(依组织块厚薄大小从24hr至3～5天,太长可溶性抗原会渗漏,阳性会减弱甚至转阴.•选择最合适的固定剂,如用福尔马林,必须用缓冲福尔马林28肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会3.制备蜡块•冲水、脱水、透明、包埋尽可能采用低温石蜡包埋,如无低温石蜡,可将组织块尽可能修薄,以缩短脱水、透明、包埋时间,尽可能保存组织内抗原稳定29肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会4.制备冰冻切片•冷冻包埋能较好保存抗原,新鲜及已固定材料均适合于冷冻包埋、切片。

•￿￿￿★防止冰结晶!!!•预处理:目的是减少组织中的水分以减少冰结晶的产生,方法是将已固定、冲洗的组织块放入20～30%蔗糖缓冲液内,4℃冰箱过夜,再将组织块埋于OCT包埋剂•速冻:目的是使温度很快下降迅速通过冰点,防止冰结晶产生30肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会速冻方法液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织块冻结后,立即移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片;干冰-丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达-70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰-丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟31肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会免疫组化染色后的衬染•常用苏木精或甲基绿衬染细胞核但如果阳性信号在细胞核,切勿衬染细胞核!!!•细胞质衬染:1%亮绿,但退色较快,可改用坚固绿(FAST￿BLUE)染,则保存时间较长32肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会封固和保存封固和保存•绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用DAB以外的底物应注意有色沉淀物如为脂溶性，应改用水溶性封固物如明胶、甘油缓冲液等。

•酶免疫染色切片可保存数周甚至数月•免疫荧光染色后应尽快观察、拍照33肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会一一. .常用免疫组织化学方法常用免疫组织化学方法1.免疫荧光免疫荧光: 2. 用于培养细胞效果较好用于培养细胞效果较好, 石蜡切片因常有自发荧光石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强背景荧光较强,用时要用时要注意注意3. FITC(异硫氰酸荧光素) 用450～490 nm光激发,515nm 滤片观察, 呈翠绿色4. RB200(四乙基罗达明B200) 用570nm光激发, 596 ～600nm滤片观察,呈橘红色5. TRITC(四甲基异硫氰酸罗达明) 用530 ～560nm光激发,580nm滤片观察,呈红色6. Texas red 用595nm光激发, 615nm滤片观察,呈红色7. 直接免疫荧光法直接免疫荧光法:8. 间接免疫荧光法间接免疫荧光法9. 双重荧光染色双重荧光染色34肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会2. 2.免疫组织化学免疫组织化学•常用方法:￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿PAP￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿ABC或LSAB￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿ELPS(二步法)35肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会20世纪70年（1970）Sternberg Peroxidase-anti-Peroxidase (PAP)36肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会20世纪80年代（1981） 许世民 ABC（亲和免疫组化） Avidin-Biotin-Peroxidase Complex37肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会90年代中期：Enhanced Polymer One Step (EPOS) EnVision (Enhanced Labelled Polymer System, ELPS)简称二步法 1 mol 含 70 mol HRP + 10 mol AB38肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会如何做好免疫组化染色?什么才是高质量的免疫组化染色?阳性信号突出无背景染色切片平整无破裂/碎,无污秽39肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会做好免疫组化染色几点体会1.组织细胞处理:￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿固定剂￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿固定时间￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿速冻防冰结晶￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿白片质量好:平整,无破裂/碎,无污秽￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿防脱片￿:￿玻片绝对干净￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿涂粘合剂:￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿白胶￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿多聚赖氨酸￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿铬明矾明胶液￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿甲醛明胶液￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿贴片后冷风吹干或37￿℃￿/60℃烘干￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿40肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会2.抗体:特异性,高效价,亲合力,适度稀释度3.石蜡切片-￿抗原修复￿￿￿￿￿￿￿(1)蛋白酶消化:￿￿￿胰蛋白酶￿￿￿胰糜蛋白酶￿￿链霉蛋白酶￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿蛋白酶K￿￿￿￿胃蛋白酶￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿消化不足-￿修复失败,假阴性或信号弱￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿消化过度-￿结构破环,脱片￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿(2)热修复:￿微波照射￿￿￿高压加热￿￿￿水浴加热￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿(3)微波+蛋白酶消化￿￿￿￿￿注意点:￿★固定时间长,消化时间或热修复时间适当延长￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿★酶生产厂家不一,或批号不一,消化时间可能也不一￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿★热修复的介质要选合适,必须要加钙螯合剂￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿★预实验摸最佳方案￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿41肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会阳性结果的判断阳性结果的判断•“边界效应”引起假阳性•均匀一致的着色,假阳性可能极大•根据阳性信号的分布:核抗原应该在核内,有时胞质也可阳性;膜抗原应在细胞膜,有时胞质也可阳性;胞质抗原应在细胞质.转录因子或核内受体应在核内或胞质内.如出现异常分布,则假阳性可能很大.42肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会 谢谢谢谢!请提宝贵请提宝贵意见意见!43肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会此课件下载可自行编辑修改，供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！44肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会。