醋马钱子的炮制工艺讨论.doc

醋马钱子的炮制工艺讨论=“news_bd”> 　　马钱子是马钱科植物马钱( Strychnosnux - vomica L. ) 的干燥成熟种子主产于印度、缅甸、越南、斯里兰卡等地其性味苦，温; 有大毒，归肝、脾经具止痛、通络，消肿、散结之功; 用于跌打、损伤，肿痛、骨折，顽痹、风湿，麻木、瘫痪，疮毒、痈疽，咽喉肿胀等症　　从古至今，有许多类的马钱子炮制方法，其中，以砂炒、油炸法沿用最多; 并且有许多关于砂烫法的研究，而醋制法却少有研究中药标准化和规范化始终在发展，但广东地区传统沿用的醋制法其炮制工艺仍处于较为粗糙的状态，浸泡、煮制、砂烫等方法细节不明确，缺乏规范性和生产技术标准，欠缺质量稳定性和可控性，不利于该炮制方法的推广和大规模生产加工　　为适应中药现代化进展，规范醋马钱子的炮制工艺，本研究运用HPLC 化学成分检测手段，在继承的基础上对醋马钱子进行炮制工艺的研究，使其更规范化、规模化和现代化　　1 仪器与材料　　仪器: 千分之一天平( JA3003 型，上海舜字恒平科学仪器有限公司) ，数显鼓风干燥箱( BDMD - M - V - 20 型，天津泰斯特) ，电阻炉温度控制器( KSW 型，余姚金电仪表有限公司) ，SMART 测温枪( AR842A 型，哈尔滨联华自动化仪表有限公司) 。

原料及辅料: 由广州市药材公司中药饮片厂提供的马钱子，经高明副教授( 广州中医药大学) 鉴定为马钱科Loganiaceae植物马钱Strychnosnux - vomica L. 的干燥成熟种子; 由广州市药材公司中药饮片厂提供的白醋及河砂，白醋总酸含量≥3. 50 g100mL - 1试药: 对照品均来源于中国药品生物制品检定研究院: 马钱子碱( 批号: 110706 - 200505，纯度: 95. 9%) ，士的宁( 批号:110705 - 201307，纯度: 97. 1%) ; 乙腈为色谱纯; 三氯甲烷、甲醇为分析纯; 氢氧化钠试液、无水硫酸钠、庚烷磺酸钠、磷酸二氢钾　　2 方法与结果　　2. 1 正交试验　　2. 1. 1 因素和水平的确定结合醋马钱子在1984 年版《广东省中药炮制规范》中的工艺记载和广州市药材公司中药饮片厂车间的实际生产，广东当地传统的醋马钱子炮制工艺均离不开水浸、醋煮及砂炒三个关键环节同时，由于在砂炒一环节中，砂炒时的温度难以控制，只生硬地利用砂炒温度、砂炒时间来作为该环节的衡量指标并不尽合理; 而以传统经验判断作为控制标准则更为科学这是由于，砂炒时同时以体积膨胀( 外形鼓起) 、浅褐黄色变深褐黄色的颜色转变、清脆的单声爆裂声、咖啡样的香味等形、色、声、味四方面来综合判断出锅时间，变化明显，完成时间把握准确，炒制品质不随操作人员的改变而改变。

由此，将水浸天数、醋液浓度、醋煮时间作为正交实验的三个因素，可较全面合理地研究醋马钱子的炮制工艺在车间的实际生产工艺中，水浸天数的范围在6 ～ 10 天，故水浸时间( d) 初步确定在7、8、9 三个水平上醋液浓度( %) 是购进白醋的原始浓度3. 5% ( 即白醋总酸含量3. 50 g100mL - 1 ) ，在节省原料及可行的考虑上确定醋液的浓度在1. 5、2. 5、3. 5%三个水平上醋煮时间车间的常用时长为3 ～6 h 并为敞开式煮制，在预实验中发现，大烧杯中敞开式煮制1 h醋液已煮干; 加盖煮制3 h 可余刚覆盖过马钱子表明的醋液量基于基本条件的限制，选择1、2、3 作为醋煮时间( h) 的三个水平　　2. 1. 2 基本工艺流程的确定在1984 年版《广东省中药炮制规范》关于醋马钱子的制法和广州市药材公司中药饮片厂车间实际生产工艺的基础上以药厂实际生产为主，优化炮制工序，具体炮制流程如下: 净选马钱子→水浸一定天数，每天换水1 次→取出去皮，置容器内加醋6 倍量，文火煮一定时间→倒掉醋液→烘至八成干→砂炒，至体积膨胀，转成棕褐色并伴有爆裂声和香味→取出，摊凉即成。

　　2. 1. 3 样品制备及方法取干净透明的敞口玻璃瓶9 个，分别编号① ～ ⑨，每瓶加入已挑选的马钱子各100 g，分别加入没过马钱子表面约3 cm 高的自来水中，放于阴凉干燥处，每天换水一次，分别浸泡7，8，9d，达到不同的水浸天数后，取出马钱子，剥去皮毛，分别置1. 5%、2. 5%、3. 5% 不同浓度的6倍量醋中煮1，2，3h，取出置50℃ ～ 60℃烘箱烘至八成干后，置锅中砂炒，于200℃ ～ 210℃砂温时投料，至体积膨胀，转成棕褐色并伴有爆裂声和香味时出锅，摊凉即成得样品① ～⑨号　　2. 1. 4 结果与分析　　2. 1. 4. 1 士的宁和马钱子碱含量测定( 照《中国药典》2015年版第一部通则0512 高效液相色谱法) 色谱条件与系统适用性试验: 填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶; 流动相: 乙腈-0. 01 molL - 1 庚烷磺酸钠与0. 02 molL - 1 磷酸二氢钾等量混合溶液( 用10%磷酸调节pH 值至2. 8) ( 21: 79) ; 检测波长:260 nm按士的宁峰计算，其理论板数应高于或等于5000　　2. 1. 4. 2 对照品溶液的制备取6 mg 士的宁对照品及5 mg马钱子碱对照品，精密称定后分别放入10 mL 的容量瓶里，加入适量的三氯甲烷令溶解且加至刻度，振摇均匀。

从两容量瓶中分别量取2 mL 于同一10 mL 的容量瓶里，加入甲醇至刻度，振摇均匀即得( 每1 mL 含士的宁0. 12 mg，马钱子碱0. 1mg) 　　2. 1. 4. 3 供试品溶液的制备把本品粉碎至可通过三号筛，取0. 6 g 左右，精密称重，放于带塞子的锥形瓶内，加入3 mL氢氧化钠试液混摇均匀，静置30 min，精密加入20 mL 的三氯甲烷，盖紧塞子并称重，于水浴锅中回流提取2 h，放至室温后称重并用三氯甲烷补重，振摇均匀，用分液漏斗分取三氯甲烷层，过滤时经过适量无水硫酸钠，取3 mL 续滤液至10 mL容量瓶中，最后以甲醇定容，振摇均匀即得　　2. 1. 4. 3 测定法对照品以及供试品溶液被分别精密吸取10 μL，于液相色谱仪中进样，测定后即成　　2. 1. 4. 4 方法学考察　　2. 1. 4. 4. 1 线性关系考察取6 mg 士的宁对照品、5 mg 马钱子碱对照品，精密称定，分别放入10 mL 容量瓶中，加适量的三氯甲烷使溶解，并稀释至刻度，振摇均匀把二者并入同一50 mL 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，振摇均匀，即得每1 mL含士的宁0. 12 mg，马钱子碱0. 1 mg 的混合对照品。

从混合对照品中分别取10、5、2、1、0. 5 mL 至10 mL 容量瓶中用甲醇稀释至刻度，配成5 个士的宁浓度分别为0. 120、0. 060、0. 024、0. 012、0. 006 mgmL - 1 和马钱子碱浓度分别为0. 100、0. 05、0. 02、0. 010、0. 005 mgmL - 1 的对照品溶液，再分别按照确定的色谱条件，分别以峰面积( Y) 对相应对照品的含量( X，μg) 进行线性回归，回归方程为士的宁= 34. 876X -0. 028，r = 0. 9999; 马钱子碱= 26. 997X - 0. 0022，r = 0. 9999　　2. 1. 4. 4. 2 精密度、重复性和稳定性试验取士的宁和马钱子碱混合对照品溶液，重复进样6 次，每次10μL混合对照品溶液中士的宁的平均峰面积为41. 6142，RSD 为0. 22%; 马钱子碱的平均峰面积为26. 7880，RSD 为0. 26%表明: 进行含量测定的样品溶液，有良好的进样精密度称取同一份供试品样品5 份，各约0. 6 g，精密称定，供试品溶液中士的宁的平均峰面积为47. 5987，RSD 为1. 80%; 马钱子碱的平均峰面积为18. 8755，RSD 为2. 01%。

表明: 有良好的重复性取同一份供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12h 测定，供试品溶液中士的宁平均峰面积为48. 2981，RSD 为0. 21%; 马钱子碱的平均峰面积为21. 6697，RSD 为0. 25%表明: 在12h 内，含量测定的样品溶液有良好的稳定性　　2. 1. 4. 2 正交试验结果根据上述考察与分析得出因素、水平和基本工艺流程，以水浸天数、醋液浓度和醋煮时间为考察因素，以士的宁和马钱子碱的含量为评价指标，对醋马钱子的炮制工艺进行正交试验正交试验设计表和结果见表2，方差分析从方差分析可知，影响醋马钱子炮制工艺因素的主次顺序为: C > A > B，即醋煮时间> 水浸天数> 醋液浓度其中，C因素为显著因素( P≤0. 05) ，即醋煮时间对醋马钱子生物碱含量的综合评分指标有显著影响，而炮制过程中的醋液浓度对生物碱含量的综合评分指标无显著影响各因素其不同水平的影响顺序为: A3 > A2 > A1，B2 > B1 > B3，C1 > C3 > C2综合分析考虑，故确定醋马钱子的较佳炮制工艺为: A3B2C1，即水浸天数9d，醋液浓度2. 5%，醋煮时间1h。

由于清水浸泡9d 周期太长，不符合实际大生产的效率要求且正交实验也发现水浸天数亦非显著影响因素，故欲适当缩短浸泡时间，在此正交较优工艺上再作一单因素优化实验　　2. 2 水浸时间的单因素优化试验　　2. 2. 1 样品制备方法原料、辅料、炮制工具及仪器同1取干净透明的敞口玻璃瓶3 个，分别编号① ～③，每瓶加入已挑选过的马钱子100 g，再分别加入没过马钱子表面约3cm 高的自来水，放于阴凉干燥处，每天换水一次，分别浸泡3，5，7d，达到不同的水浸天数后，取出马钱子，剥去皮毛，分别置2. 5% 的6 倍量醋中煮1h，取出置50℃ ～ 60℃烘箱烘至八成干后，置锅中砂炒，于200℃ ～ 210℃砂温时投料，至体积膨胀，转成棕褐色并伴有爆裂声和香味时出锅，摊凉即成得样品① ～③号　　2. 2. 2 结果与分析供试品溶液按上述色谱条件进样分析，每批样品平行测定3 次，记录峰面积，计算3 个样品的含量，结果含量变化情况含量相差较大，推断可能是砂炒温度的影响综上，可考虑将水浸天数缩短为5 d故最终确定醋马钱子的较佳炮制工艺为: 水浸天数5 d，醋液浓度2. 5%，醋煮时间1 h　　3 讨论　　马钱子的加工炮制过程对其生物碱含量的影响比较大，且机理不明确，规律不明显。

因此进行醋马钱子炮制工艺考察时，首先结合实际生产经验，确定影响较大的3 个因素不同水平，同时以控制醋马钱子质量的士的宁和马钱子碱这两种生物碱作为指标因素，对醋马钱子的炮制工序进行正交试验最后再在较优的工艺上进一步优化实验，使工艺条件更符合实际生产需要结果显示，醋马钱子的较佳炮制工艺为水浸5d， 2. 5%的醋煮1 h，砂炒至符合要求。