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1VEGF 在胃癌患者血清及肿瘤组织中的表达及其意义作者:周海茵，李 健，乔世铭，尹世萍［摘要］ 目的 研究血管内皮细胞生长因子（VEGF）在胃癌患者血清及肿瘤组织中的表达情况，探讨其临床意义方法 应用 ELISA 法对 60 例非肿瘤疾病手术患者和 60 例胃癌患者术前、术后血清 VEGF 水平进行定量测定，并应用免疫组化法测定肿瘤组织的 VEGF结果 胃癌患者术前血清 VEGF 高于对照组（P＞0.05） 两组术后较术前升高，肿瘤组术后较术前升高（P＜0.05） 肿瘤组术前血清 VEGF 水平、肿瘤组织中的 VEGF 与浆膜受累、淋巴结转移及临床病理分期有关肿瘤组术后随访 30～36 个月中出现复发转移和死亡的患者，术前 VEGF表达较其他患者升高（P＜0.05） 结论 血清 VEGF 水平及肿瘤组织中的 VEGF 与胃癌的浸润、转移有关，检测血清 VEGF 及肿瘤组织中的 VEGF 对胃癌浸润、转移程度和预后的判断有重要意义［关键词］ 胃肿瘤；微转移；血管内皮生长因子Expression and significance of VEGF in serum and tumor tissue in gastric cancerZHOU Hai-yin，LI Jian，QIAO Shi-ming，et al.Department of General Surgery，The Central Hospital of Yangpu District，Shanghai 200090，China［Abstract］ Objective To evaluate the clinical significance of vascular endothelial growth factor (VEGF) expression in serum and tumor tissue in gastric cancer patients.Methods The pre-operational and post-operational levels of serum VEGF were measured by ELISA kit in 60 cases of gastric cancer and 60 cases of non-carcinoma as the control group，the expression of tumor tissue VEGF was measured by immunohistochemical assay.Results The pre-operational level of serum VEGF in gastric cancer was higher than that in the control group(P＞0.05).The post-operational level of serum VEGF was increased in both groups，especially in the tumor group(P＜0.05).The expression of VEGF in serum and tumor tissue was positively correlated with tumor invasion depth，lymph-node metastasis and clinical pathological stage.A follow up of 30～36 months reveals the pre-operational level of serum VEGF of tumor recurrence and death in patients was higher than the others in the tumor group(P＜0.05).Conclusion The expression of serum VEGF and tumor tissue VEGF is closely correlated with invasion and metastasis of gastric cancer.Serum VEGF and tumor tissue VEGF assay may be used to pre-operatively predict invasion and metastasis and used to evaluate prognosis.2［Key words］ stomach neoplasm;micrometastasis;vascular endothelial growth factor肿瘤的增殖和转移是血管新生依赖性的。

在肿瘤血管生成过程中，血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是目前了解的功能最强大的特异性血管生长调节因子，各种转化生长因子、表皮生长因子、IL-6、IL-12、野生型 P53 及一些原癌基因均可上调 VEGF 产生促血管活性［1］ ，故 VEGF 可能为促血管活性因子的最后共同道路［2］ 本研究通过对胃癌患者手术前后血清 VEGF 的定量测定及肿瘤标本中 VEGF 表达情况，探讨其与临床病理及肿瘤预后的关系现分析报告如下1 资料与方法1.1 一般资料 选择我院普外科 2002 年 11 月～2003 年 5 月期间住院接受手术治疗的胃癌患者 60 例，其中男 33 例，女 27 例，年龄 35～85 岁，中位年龄68 岁其中Ⅰ期 8 例，Ⅱ期 15 例，Ⅲ期 34 例，Ⅳ期 3 例对照组选择同期住院手术的非肿瘤患者 60 例1.2 方法1.2.1 血清标本采集 在术前、术后第 7 天和术后 6 个月每月 1 次分别抽取清晨空腹静脉血 3ml，离心分离血清，置于-20℃冻存待测1.2.2 血清 VEGF 定量检测 采用双抗体夹心 ELISA 法，样本中的 VEGF 与酶标板上的抗人 VEGF 单抗结合，再与结合有生物素的抗人 VEGF 抗体结合，经辣根过氧化物酶标记的 Streptavidin 与生物素结合，与酶底物反应染色，在 492nm测定与 VEGF 浓度相对应的 OD 值。

以标准品的 OD 值画出标准曲线，根据样品 OD值在该曲线图上查出相应的 VEGF 含量1.2.3 肿瘤组织 VEGF 检测 肿瘤组织经常规固定、石蜡包埋、切片后，采用 Envision 二步法染色一抗采用鼠抗人 VEGF 单克隆抗体肿瘤组织 VEGF 以肿瘤细胞胞质内出现棕黄色颗粒为阳性VEGF 判断标准：（-）为无瘤细胞着色，（+）为着色瘤细胞数＞10%1.2.4 统计学方法 用 SPSS11.0 软件做统计分析，P＜0.05 为差异有显著性2 结果2.1 围手术期血清 VEGF 水平比较 围手术期两组血清 VEGF 水平见表 1从表 1 可见，术前肿瘤组血清 VEGF 水平虽高于对照组，但差异无显著性（P＞0.05） 术后两组血清 VEGF 均较术前明显升高（P＜0.05） 肿瘤组术后血清 VEGF 较对照组明显增加，两组差异有显著性（P＜0.05） 3表 1 围手术期血清 VEGF 水平比较 （x±s，μg/L）2.2 肿瘤组术前血清 VEGF 与肿瘤临床病理参数的关系 肿瘤组术前血清VEGF 与肿瘤临床病理参数的关系见表 2从表 2 可见，肿瘤组织细胞中的 VEGF表达阳性患者的血清 VEGF 水平虽高于表达阴性者，但差异无显著性（P＞0.05） ；有淋巴结转移的患者血清 VEGF 水平显著高于无淋巴结转移者（P=0.003） ；肿瘤侵犯浆膜的患者血清 VEGF 水平显著高于浆膜未受累者（P=0.037） ；临床分期为Ⅲ和Ⅳ期患者血清 VEGF 水平显著高于Ⅰ和Ⅱ期者（P=0.029） 。

表 2 肿瘤组术前血清 VEGF 与肿瘤临床病理参数的关系 （x±s，μg/L）注：*TNM 分期根据新国际 T.N.M 胃癌分期转换为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期2.3 随访 术后 60 例均得到随访，5 例Ⅰ期和 2 例Ⅱ期患者术后未化疗而未得到术后随访时的外周血（随访至今均存活） ，其余 53 例患者有术后 6 个月共6 次随访的血清检测结果随访 30～36 个月，在 53 例患者中 11 例死亡，5 例出现转移和复发，其余 37 例无瘤存活，死亡及转移复发的患者术前的血清 VEGF 水平高于无瘤存活的患者（见表 3） ，且差异有显著性（P＜0.05） 死亡 11 例中 7例术后 VEGF 持续高水平表达，5 例表达量逐渐升高；5 例出现复发和转移的患者，其中 3 例术后血清 VEGF 水平持续高表达，并且表达量升高；37 例无瘤存活者中21 例术后 VEGF 水平持续低表达，6 例升高后转低，10 例术后 VEGF 水平出现逐渐升高，目前正密切随访中表 3 死亡及转移复发者与无瘤存活者术前的血清 VEGF 水平比较 （x±s，μg/L）3 讨论VEGF 是一种特异的作用于内皮细胞的多功能因子，作为一个重要的促血管生成因子，在原位诱导血管生成的作用十分强大［3］ 。

VEGF 作为内皮细胞特异有丝分裂原刺激内皮细胞增生、促使血管渗漏、刺激细胞迁移，导致纤维蛋白原外渗进入肿瘤间质而促成肿瘤浸润组织的血管生成，从而形成肿瘤内部高密度的微血管网VEGF 还能刺激淋巴内皮细胞增生，增加肿瘤高血源性和高淋巴源扩散的风险［4］ VEGF 还可通过诱导 Bcl-2 的表达、激活有丝分裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）和抑制 c-JNK(c-jun-NH3-kinase）而抗肿瘤细胞凋亡本研究结果显示，肿瘤侵犯浆膜、有淋巴结转移、临床分期较晚的患者血清 VEGF 水平显著升高，提示血清 VEGF 水平在一定程度上反映肿瘤进展的程度Lissoni 等研究指出，晚期恶性肿瘤伴有 VEGF 内源性分泌增加，提示血清 VEGF水平升高，则预后较差Hyodo 的研究发现，在胃肠肿瘤中，有远处转移患者的血清 VEGF 较无远处转移的患者明显增高，且转移患者化疗前 VEGF 水平低者化疗效果及生存期较升高者好Kumar 等的研究发现，结直肠癌淋巴结阳性患者的血4清 VEGF 比阴性者明显升高Fujisaki 发现血清 VEGF 水平与 Duke’s 分期显著相关。

Celen 等报道诊断结直肠肿瘤 VEGF 的敏感性高于 CEA 等肿瘤标志物［5］ 术前肿瘤组血清 VEGF 水平虽高于对照组，但无统计学意义，术后两组血清VEGF 均较术前升高，但肿瘤组较非肿瘤组更为明显，这可能与手术创伤、术后伤口生长及创面修复有关在随访血清 VEGF 水平变化中，我们发现出现复发、转移及死亡组术前的血清 VEGF 较无瘤存活组明显升高，可以反映肿瘤病变的严重程度复发、转移及死亡组围手术期的血清 VEGF 水平有升高，但差异无显著性，这可能为术前除原发肿瘤以外，微转移灶分泌入循环血中的 VEGF 占较大比例，手术清除了原发灶，但对于微转移灶无效，手术创伤及术后修复使 VEGF 水平升高，又促进了微转移灶的进一步发展，因此我们认为血清 VEGF 是特异性较高的微转移检测指标肿瘤组织中 VEGF 阳性表达率亦随肿瘤侵犯浆膜、淋巴结转移、临床分期进展而增加本研究显示，血清 VEGF 水平和肿瘤组织中 VEGF 阳性表达率两者之间无显著相关，这可能与血清 VEGF 反映全身组织的 VEGF 水平，而肿瘤组织中VEGF 阳性表达率仅反映局部肿瘤组织中 VEGF 有关尽管如此，无论是术前血清VEGF 水平或肿瘤组织中 VEGF 阳性表达都与肿瘤的转移、分期及预后密切相关。

故检测血清 VEGF 是判断肿瘤分期和预报胃癌术后肿瘤复发及生存的独立指标之一［6］ ，定期。