检测系统分析性能验证及确认课件.ppt

检测系统分析性能验证及确认宋鉴清2024/9/141------《论语·卫灵公》 2024/9/142•检测系统：是指完成一个检验项目所涉及的仪器、试剂、校准品、操作程序、质控品、样品、质量控制、保养计划、操作者等的组合•检测系统的用途：为患者提供准确的检验结果2024/9/143•要记住：单单一个试剂盒上的所谓分析性能，一定不就是试剂盒的！因为只有试剂没有仪器的合作，就没有这些分析性能！•同样，仪器厂商宣传的那些分析性能一定是在该仪器上使用了某个厂商的试剂盒才具有的！•因此所有的分析性能一定是一个检测系统的！不是试剂盒的、也不是某个仪器的！2024/9/144常见检测系统•配套检测系统-性能验证：￿￿￿A+A+A 封闭系统￿￿￿A+B+B 配套开放系统•自建检测系统-性能确认：￿￿￿A+B+C 非配套开放系统2024/9/145LDH 乳酸脱氢酶性能特征(罗氏)-12024/9/146LDH 乳酸脱氢酶性能特征(罗氏)-22024/9/147ISO 15189认可准则的要求2024/9/1482024/9/149 验证（verification）确认（validation）定义通过提供客观证据证明给定项目满足规定的要求通过提供客观证据对特定的预期用途或应用要求已得到满足的认定。

适用范围配套检测系统固定组合的检测系统标准方法非标准方法、实验室设计或制定的方法、超出预定范围使用的标准方法和修改过的确认方法（自建检测系统）完成者临床实验室独立完成厂商，方法的研究和开发者，或临床实验室性能指标精密度，正确度，可报告范围，有时还有检出限精密度，正确度，可报告范围，检出限，干扰，携带污染等目的满足厂商声明或预期用途满足检验预期用途的特定要求CNAS CL02：2012 5.5.1.3性能验证与确认的区别2024/9/1410性能验证项目的选择（一）5.5检验方法和程序的分析性能验证内容至少应包括正确度、精密度和可报告范围￿CNAS-CL38：2012《医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明》5.5检验方法和程序的分析性能验证内容至少应包括：检出限，精密度（包括重复性和中间精密度）、符合率，并￿应明确检验项目的预期用途，如筛查、诊断、确认CNAS-CL39：2012《医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学检验领域的应用说明》2024/9/1411性能验证项目的选择（二）5.5尿液干化学分析仪性能验证的内容至少应包括阴性和阳性符合率CNAS-CL41：2012《医学实验室质量和能力认可准则在体液学检验领域的应用说明》5.5血液分析仪的性能验证内容至少应包括正确度、精密度、可报告范围等。

CNAS-CL43：2012《医学实验室质量和能力认可准则在临床血液学检验领域的应用说明》2024/9/1412•WS/T 403-2012《临床生物化学检验常规项目分析质量指标》•WS/T 406-2012《临床血液学检验常规项目分析质量要求》•WS/T 408-2012《临床化学设备线性评价指南》•WS/T 492-2016《临床检验定量测定项目精密度与正确度性能验证》2024/9/1413•EP5-A3 .Evaluation of precision of quantitative measurement procedures; approved guideline-third edition. 2014 •EP15-A3. User verification of precision and estimation of bias；approved guideline-third edition.2014•EP9-A2. Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples;Approved Guideline—Second Edition• EP6 A. Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement rocedures:A Statistical Approach; Approved Guideline•EP10 A2. Preliminary Evaluation of Quantitive Clinical of Laboratory  Methods; Approved Guideline—Second Edition.2024/9/14142024/9/1415性能验证相关的基本概念•精密度（precision）:在规定的条件下，对同一或类似被测对象重复测量所得示指或测得值间的一致程度。

精密度的度量通常以不精密度（SD、方差或CV）表示•批（Run）：在检测系统真实性和精密度稳定的间隔期，一般不超过24小时或不少于2小时•正确度(trueness)：无穷多次重复测量所得量值的平均值与一个参考量值间的一致程度与系统测量误差有关，与随机测量误差无关，以偏倚（Bias）表示•准确度(accuracy)：单次检测结果与参考值间的一致程度，以总误差（TE）表示2024/9/1416性能验证相关的基本概念•线性（linearity）：检测样本时，在一定范围内可以直接按比例关系得出分析物含量的能力•总误差(total error)：实验室用某方法在多次独立检测中分析某样品所得各个结果值与靶值之差在一定置信区间内的最大允许范围•灵敏度(analytical sensitivity)：校准曲线的斜率，即对于规定量的变化分析程序产生信号的变化•检测限(detection limit)：分析程序具有适当的确定检出的分析物的最小浓度或量检测限依赖于空白读数大小2024/9/1417性能验证的实施过程    对检验程序的性能验证涉及到多方面工作，为了得到可靠结果，实验室负责人或实验主持人应对此项工作有一个概括了解，先制定一个方案，包括如下工作：￿￿￿1、性能验证项目的选择、质量目标确定、性能验证方案制定及实施工作计划；￿￿￿2、实验前准备（人员培训、仪器维护及校准、样本留取及制备）；￿￿￿3、实验操作、数据收集、处理；￿￿￿4、结论。

2024/9/1418分析质量指标的确定•分析质量指标（analytical quality  specifications）;又称质量目标（quality goals）、质量规范（quality specification）、质量标准（quality standards）和分析性能目标（analytical performance goals）•判断临床检验结果精密度、正确度和准确度水平高低的指标，或临床检验结果应达到的精密度、正确度和准确度要求，通常用不精密度、偏倚和总误差来表示2024/9/1419层次模式设定策略协议条款1评价分析性能对特定床决策的影响特定临床情况下的质量规范2评价分析性能对一般临床决策的影响A.基于生物变异的一般质量规范B.基于医疗观点的一般质量规范3专业建议A.国家或国际专家小组指南B.个别或学会工作组专家指南4由法规机构或室间质量评价组织者制定的质量规范A.由法规机构制定的质量规范B.由室间质量评价组织者制定的质量规范5已发表的当前技术水平数据A.已发表的能力验证和室间质量评价的数据B.已发表的特定的方法学设定质量目标的层次模式和方法2024/9/1420质量目标质量目标2024/9/1421精密度验证￿2024/9/1422•采用2个浓度的质控物，每天分析1个批次，每个浓度重复检测4次，连续5天。

数据经过离群值检验，收集2×20=40个有效数据，并通过统计分析评价方法计算总精密度和批内精密度，与允许范围进行比较，判断结果是否接受•将估计的批内精密度和室内精密度与本室规定的相应的允许范围(CV批内<1/4总允许误差，CV总<行业标准)比较，判断验证是否通（同时参考CLIA规定的TEa、厂商声明）￿——参考《临床检验方法学评价》EP15-A2WS/T 492-20162024/9/1423方法精密度分析方案－结果汇总仪器名称：日立7600-210　　项目浓度水平①浓度水平②精密度CV%允许范围判定结果验证值判定结果精密度CV%允许范围判定结果验证值判定结果CACV批内0.77%1.25%通过0.0621 通过CV批内1.20%1.25%通过0.0783 通过CV总1.41%2.0%通过0.1254 通过CV总1.77%2.0%通过0.1258 通过PCV批内1.20%2.50%通过0.0444 通过CV批内1.17%2.50%通过0.0579 通过CV总1.38%4.0%通过0.0584 通过CV总2.01%4.0%通过0.1130 通过MGCV批内1.59%3.75%通过0.0678 通过CV批内1.24%3.75%通过0.1008 通过CV总2.56%5.5%通过0.1261 通过CV总2.43%5.5%通过0.2103 通过2024/9/1424临床血液学•批内精密度￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿•试验方案•批内精密度以连续检测结果的变异系数为评价指标，使用1份正常浓度水平的临床标本，按常规方法重复检测11次，计算后10次的算术平均值、标准差及变异系数，与允许的变异系数进行比较，判断结果是否接受。

•——（参考WS/T 406-2012《临床血液学检验常规项目分析质量要求》）2024/9/14252024/9/1426•日间精密度￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿•试验方案•日间精密度以室内质控在控结果的变异系数为评价指标，使用Sysmex配套质控品（低值、中值、高值）当前批号累积的变异系数，与允许的变异系数进行比较，判断结果是否接受•——（参考WS/T 406-2012《临床血液学检验常规项目分析质量要求》）临床血液学2024/9/14272024/9/1428临床案例临床案例12024/9/1429临床案例临床案例12024/9/1430临床案例临床案例12024/9/1431正确度验证￿2024/9/1432•WS/T 406-2012《临床血液学检验常规项目分析质量要求》•WS/T 492-2016《临床检验定量项目精密度与正确度性能验证》•EP9-A3:Measurement procedure comparison and  bias estimation using patient samples; approved guideline- third edition. 2013•EP9-A2：Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline - Second Edition，2002•EP15-A2：User Verification of Performance for Precision and Trueness ,2005•EP15-A3. User verification of precision and estimation of bias；approved guideline-third edition.20142024/9/1433临床血液学1试验过程1.1 样本的准备选取10份检测结果在参考区间内的新鲜临床样本。

1.2 试验步骤￿① 10份标本分别在该仪器上检测2次，记录各项目20次检测结果，计算均值；② 相同样本在临检室标准仪器（J-3001-LJ）上同样检测2次，记录各项目20次检测结果，计算均值，设为靶值；③ 该仪器检测结果均值与靶值计算偏倚1.3 质量控制￿￿￿￿整个试验阶段检测仪器状态正常，各批次质控结果均符合要求2 试验数据分析￿￿￿￿各试验数据的统计分析方法参考《临床血液学检验常规项目分析质量要求》3 试验结果的判定标准各项目的偏倚应符合表6的要求2024/9/14342024/9/14352024/9/14362024/9/1437正确度初步评价￿￿￿￿先用5个定值PT样品进行正确度初步评价，每个样品测量1次，计算5个样品与靶值之间的平均偏倚，若≤允许偏差（卫生行业标准）初步评价通过，直接进行正确度确认；若不通过则进行校准，初步评价通过后再进行正确度确认2024/9/1438•检测PT样品5份，每个样品重复测量3次，计算每个样品均值与靶值的相对偏倚；•检测参考方法定值的新鲜血清样品5份，每个样品重复测量3次，计算每个样品重复测量的均值与靶值的相对偏倚；•用实验方法和参考方法同时检测40份新鲜样品，每天测量10个样品，每个样品测量1次，连续4天。

以参考方法结果为横座标X，实验方法为纵座标Y，绘制散点图，计算回归方程，计算参考区间两端和医学决定水平处的相对偏倚￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿￿（--EP9-A3）•偏倚≤允许偏差，正确度得到确认确认实验方法2024/9/1439•有证参考物质（CRMs）：已用参考方法或决定性方法定值，可从美国国家标准局（NIST）或其他国际组织认可的提供者获得;•从能力验证试验（PT）中获得的参考物：如CAP和卫生部检验中心能力验证试验中提供的调查品;•厂商提供的正确度确认物或质控物;•室间质量评价计划中使用的质控物;•由第三方提供的已用不同方法定值的物质•定值参考物质检测的回收实验2024/9/1440比￿￿对￿2024/9/1441•试验方案•收集样本20份，其浓度应均匀分布整个分析测量范围采用试验方法和比较方法分别检测20份样本，试验持续4天，每天测定5份样本每种方法对于每个样本重复测定2次，将样本按1、2、3、4、5的顺序进行第一次测定，再按反向顺序测定第二次顺序中的样本浓度尽量随机排列其测定结果经过方法内、方法间离群值检验，X值合适范围检验，离散度均匀性检查等步骤，绘制散点图，粗略分析方法间是否呈线性关系。

通过线性回归分析估计在医学决定水平处的预期偏倚的95%可信区间大小；或者如数据离散度均匀，可计算各浓度的平均偏倚及平均百分比偏倚大小将两种偏倚与偏倚的允许范围进行比较以判定是否符合要求——参考《临床检验方法学评价》EP9-A2WS/T 407-2012 医疗机构内定量检验结果的可比性验证指南2024/9/1442•     皮肌炎是一种引起皮肤、肌肉、心、肺、肾等多脏器严重损害的，全身性疾病，而且不少患者同时伴有恶性肿瘤它的1症状表现如下：•    1、早期皮肌炎患者，还往往伴有全身不适症状，如-全身肌肉酸痛，软弱无力，上楼梯时感觉两腿费力；举手梳理头发时，举高手臂很吃力；抬头转头缓慢而费力皮肌炎图片——皮肌炎的症状表现方法内离群值检验实验方法差值绝对值的均值：0.19 接受限为前者4倍：0.77 实验方法相对差值绝对值的均值：0.02 接受限为前者4倍：0.07 比较方法差值绝对值的均值：0.21 接受限为前者4倍：0.85 比较方法相对差值绝对值的均值：0.02 接受限为前者4倍：0.08 方法间离群值检验E值：0.22 E的控制限=4*E=0.878E'值：0.0146 E'的控制限=4*E'=0.0585 X值合适范围的检验2024/9/14442024/9/1445CNAS-CL38：2012《医学实验室质量和能力认可准则在临床化学检验领域的应用说明》2024/9/1446质控数据比对分析临床案例临床案例22024/9/1447临床案例临床案例22024/9/1448临床案例临床案例22024/9/1449临床案例临床案例22024/9/1450临床案例临床案例22024/9/1451临床案例临床案例22024/9/1452临床案例临床案例22024/9/1453可报告范围临床可报告范围分析测量范围2024/9/1454线性评价方法1.目测法:主观、粗略、不能确定每个点的线性程度；2.改良Doumas方法（平均斜率法）；￿3.CAP设备委员会（IRC）采用的多项式回归分析方法(CAP-IRC法)；4.CLSI EP-6A法（定量检验方法的线性评价）。

2024/9/1455样本来源1.病人标本；2.低浓度的标本（或推荐的稀释液）稀释高浓度标本；3.病人样本中添加分析物（如CaCl2、Glu)、加入量原则上少于总体积的10%；4.商业质控物/校准物/线性验证物质2024/9/1456项目名称项目名称线性范围线性范围水平水平1 1质控均值质控均值水平水平2 2质控均值质控均值钾1.5-10.0 4.017.519钙0.05-52.413.24血糖0.11-41.66.8419.85肌酐9-13260164713.2总蛋白1-13052.2760.95丙氨酸氨基转移酶4-100083195.3肌酸激酶3-2300233.1623.9低密度脂蛋白0.026-18.103.0794.57淀粉酶3-1500130.9262.5胆固醇 0.13-20.77 4.8117.3132024/9/1457线性：0.11-41.66.8419.856.8419.852024/9/1458平均斜率法评价分析测量范围（改良Doumas方法）试验方案•选取接近仪器标注的分析测量范围上限（其样本浓度不低于标定分析范围上限的85%）和下限的两个分析浓度的样本(H和L)，按照1L、0.8L＋0.2H、0.6L+0.4H、0.4L+0.6H、0.2L+0.8H、1H的比例关系配制6个系列浓度的样本。

对每个混合样本进行多次(至少2次)检测经统计后拟合回归线y＝bx+a试验结果的判定标准•将拟合回归线的相关系数r≥0.975（r2≥0.95），b值在1±0.05范围作为判断标准——部分参考《临床检验质量管理技术基础》（冯仁丰）、EP62024/9/14592024/9/1460方法分析测量范围分析方案－结果汇总仪器名称：日立7600平均斜率法编号项目厂商标注的测量范围实验室验证的测量范围验证结果1ALKP1－12000.00 －931.50 呈线性2TG0.01－11.290.05 －13.49 呈线性3TC0.13－20.770.00 －8.32 呈线性4GGT2－10002.00 －992.00 呈线性5DBIL0.7－342.10.60 －301.50 呈线性2024/9/1461CLSI EP-6A法（定量检验方法的线性评价）2024/9/14622024/9/14632024/9/14642024/9/14652024/9/14662024/9/14672024/9/14682024/9/14692024/9/14702024/9/14712024/9/14722024/9/14732024/9/14742024/9/1475花絮•尿液线性验证：细菌•血白细胞(高值样品)-浓缩•尿红细胞2024/9/1476可视化管理Visual Management5S精益Lean单件流1 PieceFlow标准工作Standard Work拉动系统Pull制造拉动式生产Create signals to pull on demand, obvious when something is very empty减少差异和￿复杂性Reduce variation &complexity迈向单件处理￿Move away from batching, backlog and queue能够看到￿Ability to see维持流动Organized to Flow:1.整理2.整顿3.清扫4.清洁5.素养¡精益化性能验证-单件流:线性验证，高值样品？？2024/9/1477设备性能评估-12024/9/1478设备性能评估-12024/9/1479设备性能评估-22024/9/1480设备性能评估-22024/9/1481设备性能评估-22024/9/1482工欲善其事，必先利其器。

居是邦也，事其大夫之贤者，友其士之仁者￿-----《论语·卫灵公》 2024/9/14832024/9/1484。