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百尾参止咳活性成分探究［摘要］采用小鼠氨水引咳法研究百尾参Disporum cantoniense的止咳作用，利用各种现代色谱技术手段对止 咳活性部位进行化学成分分离与纯化，并根据化合物的理化 性质和光谱数据鉴定结构结果表明百尾参水提取物及乙醇 提取物均有止咳活性，而乙醇提取物高剂量组的止咳作用高 于阳性对照;从乙醇提取物中首次分离并鉴定了 8个化合物, 分别为豆辎-4-烯-3-酮(1),麦角笛-5, 7, 22-三烯-3 B - 醇 (2 ), obtucarbamate A ( 3 ), obtucarbamate B (4 ), neotigogenin (5),偶氮-2, 2 -双［Z- (2, 3-二懸基-4-甲基-5-甲氧基)苯基乙烯］(6), dimethyl {［carbonylbis ( azanediyl ) Jbis ( 2-methyl-5 , 1-phenylene) } dicarbamate (7),桝皮素-3-0- 3 -D-毗喃 葡萄糖昔(8),活性跟踪显示化合物3, 4, 6具有止咳作用， 其中化合物6的止咳作用与阳性对照相当［关键词］百尾参；止咳活性；偶氮化合物；化学成分百尾参为百合科L订iaceae万寿竹属植物万寿竹 Disporum cantoniense (Lour. ) Merr.。

其味甘、淡，性平， 具有润肺止咳、健脾消积的功效，可用于治疗虚损咳喘、痰 中带血、肠风下血、食积胀满等症［1-2］ o百尾参是苗族习 用药材，是复方制剂咳速停系列药物的主药目前，关于百尾参的研究主要集中在栽培方面[3-6],对其化学成分及生 物活性研究较少[7-10] o为了探究百尾参的止咳活性成分， 采用小鼠氨水引咳法首先研究了百尾参的止咳活性部位，其 乙醇提取物具有明显的止咳作用；其次对乙醇提取部位的化 学成分进行了系统的分离，从中分离鉴定了 8个化合物，分 别为豆笛-4-烯-3-酮(1),麦角辎-5, 7, 22-三烯-3 3-醇 (2 ), obtucarbama.te A (3 ), obtucarbamate B ( 4 ), neotigogenin (5),偶氮-2, 2’ -双[Z- (2, 3-二羟基-4-甲基-5-甲氧基)苯基乙烯](6), dimethyl {[carbonylbis ( azanediyl ) ]bis ( 2-methyl-5 ,1-phenylene) } di carbamate (7),彳斛皮素-3-0- 3 -D-毗喃 葡萄糖昔(8),以上化合物均为首次从该植物中分离得到； 最后对分离得到的量大的化合物3, 4及6进行了活性测试, 结果显示3个化合物均有止咳作用，其中化合物6的止咳活 性与阳性对照相当。

1材料昆明种小鼠(SPF级)，雌雄对半，体重18〜22 g,由 长沙东创实验动物科技服务部提供，合格证号SCXK (湘) 2009-0012o磷酸可待因口服液III,香港万辉药业有限公司，批号 110401乙醇为食用级，其余试剂均为分析纯试剂，重庆川 东化工(集团)有限公司化学试剂厂X-4型熔点仪，温度未校正，北京泰克仪器有限公司生 产；ZF7三用紫外分析仪，购于巩义市予华仪器有限责任公 司；INOVO 400 MHz型核磁共振波谱仪（TMS为内标），美国 Vari an公司生产，JEOL ECX-500 MHz型核磁共振波谱仪（TMS 为内标），日本电子株式会社生产；HP 5973质谱仪，美国安 捷伦公司生产；柱色谱硅胶（200〜300目）和薄层用硅胶 GF254 ,青岛海洋化工厂生产；Sephadex LH-20 ,购自 Pharmacia 公司药材于2010年8月采自贵州省安顺市，原植物经贵州 师范学院朱富寿教授鉴定为百尾参D. cantoniense,标本保 存于贵州师范学院药用植物研究所2方法2. 1提取物的制备取上述2份百尾参药材粗粉各40 g,精密称定，分别加 入8倍量食用乙醇、蒸馆水加热回流提取2次，每次3h, 合并2次滤液，减压浓缩至浸膏，精密称定，计算各溶剂提 取物得膏率：乙醇5. 7%,水25. 8%o2. 2止咳活性研究[11]取小鼠90只，雌雄各半，随机分成9组，即乙醇提取 物高、低剂量组，水提取物高、低剂量组（生药量5. 80, 1.25 g - kg-1）,生理盐水对照组（空白对照组），磷酸可待因口 服液阳性对照组（300. 0 mg • kg-1）,单体化合物3, 4, 6 组(300.0 mg • kg-1),每组10只。

每天灌胃(ig)给药1 次，给药体积按20 mL • kg-1,连续给药6 do末次给药1 h 后，利用氨水气雾引咳法，用超生雾化器均匀地雾化浓氨水 于倒扣的500 mL密闭玻璃钟罩内，然后迅速将小鼠放入钟 罩内，喷雾5 s,观察记录小鼠的咳嗽潜伏期(从放入开始 至咳嗽的时间)和2 min内咳嗽的次数结果以土S表示，实验数据采用SPSS 18.0统计软件进 行统计学处理，采用单因素方差分析，显著性检验标准为P 3结果与分析3. 1百尾参提取物及单体化合物对氨水气雾致小鼠咳嗽 的影响实验结果表明，阳性药物、水及食用乙醇提取物高、低 剂量组均有延长小鼠咳嗽潜伏期和减少小鼠咳嗽次数的作 用(P 化合物6淡黄色粉末；mp 307〜309 C； EI-MS m/z (%) 386 (M+• ), 322, 206, 180, 148 (100), 121, 77； 1H-NMR (C5D5N, 500 MHz) 6 : 9. 78, 9. 24 (各 2H, s,-0H), 8. 38 (2H, s, H-6’ ), 7. 64 (2H, d, J二8. 6 Hz, H-2), 7. 17 (2H, d, J二8.6 Hz, H-1), 3. 66 (3H, s, -0CH3), 2. 32 (3H, s, -CH3)； 13C-NMR (C5D5N, 125 MHz) 6 : 130.9(C-l), 115.8 (C-2), 137.9 (CT，), 139. 1 (C-2，),153.8 (C-3Z ), 124.8 (C~4f ), 155.5 (C~5f ), 115.2(C~6f ), 51.8 (-0CH3), 17.5 (-CH3)。

以上数据与文献[17] 报道的偶氮-2, 2’ -双[Z- (2, 3-二軽基-4-甲基-5- 甲氧基)苯基乙烯]基本一致化合物7白色粉末；mp 230〜232 C； EI-MS m/z (%) 386 (M+・),354, 206, 180 (100), 148, 121, 77, 59； 1H-NMR (DMS0-d6, 400 MHz) 6 : 8.81 (2H, s, -NHC0NH-),8.53 (2H, s, -NHCOO-), 7. 52 (2H, s, H-2, 2’)，7. 14 (2H, dd, J二8.4, 2.0 Hz, H-6, 6’)，7.06 (2H, d, J二8. 4 Hz, H-5, 5’)，3. 64 (6H, s, -0CH3), 2. 13 (6H, s, 7, T -CH3)； 13C-NMR (C5D5N, 125 MHz) 5 : 137.0 (C-1,r ), 114.8 (C-2, 2’ ), 138. 3 (C~3, 3’ ), 115.2 (C—4, 4f ), 130.8 (C-5, 5’)，125・2(C-6, 6f ), 17.6 (CH3-7, T ), 52.2 (0CH3), 155. 3 (-NHCONH-), 153. 0 (-NHCOO-)。

结 合文献[18]鉴 定该化 合物为dimethyl {[carbonylbis ( azanediyl ) ]bis ( 2~methyl-5 , 1-phenylene) }dicarbamate,其波谱数据为首次报道化合物8黄色粉末，Molish反应呈阳性，薄层色谱喷 A1C13 后荧光增强；ESI-MS m/z 463.0 [M-H]-,487. 1[M+Na] + ； 1H-NMR (DMSO-d6, 500 MHz) 6 : 12.62 (1H, s, 5-OH),7. 56 (1H, d, J二6.8 Hz, H-6Z ), 7. 54 (1H, s, H-2Z ),6.8 (1H, d, J=6. 8 Hz, H-5’)，6. 38 (1H, d, J=2. 3 Hz, H-8), 6. 17 (1H, d, J=2. 3 Hz, H-6), 5.44 (1H, d, J=7. 5 Hz, H—1〃 )； 13C-NMR (DMS0-d6, 125 MHz) 5 : 156.8(02),133.8 (C-3), 178. 0 (04), 161. 7 (C-5), 99.2 (06),164.6 (C-7), 94.0 (C-8), 156. 7 (C-9), 104. 5 (C-10), 121. 7 (CT ), 115. 7 (C-2, ), 145. 3 (C—3’ ), 149. 0(C-4’ ),116. 7(C-5’ ), 122. KC-67 ), 101. 3(Glu-CT),74. 6 (Glu-C-2), 77. 0 (Glu-C-3), 70.4 (Glu-04), 78. 1 (Glu-C-5), 61. 5 (Glu-C-6)o以上波谱数据与文献［19］报 道的桝皮素-3-0- B -D-毗喃葡萄糖昔基本一致。

［致谢］贵州省、中国科学院天然产物化学重点实验室 的张建新副研究员和王道平副研究员在化合物波谱数据测 定方面提供了帮助［参考文献］［1］ 邱德文，杜江.中华本草•苗药卷M.贵阳：贵 州科技出版社，2005： 54.［2］ 贵州省药品监督管理局•贵州省中药材、民族药材质量标准［M］.贵阳：贵州科技出版社，2003： 162.［3］ 张雁萍.安顺民族药用植物野生百尾参植株的形态特征与分布［J］.贵州农业科学，2006, 34 (5)： 55.［4］ 张雁萍，向波.苗族药用植物野生百尾参间套作不同播期育苗试验［J］.贵州农业科学，2007, 35 (3)：55.［5］ 张雁萍.野生百尾参种子2年生植株生长发育特性研究［J］.安徽农业科学，2008, 36 (5)： 1915.[6] 张雁萍.苗族药用植物百尾参野生种子发芽育苗栽培试验[J].种子，2008, 27 (5)： 82.[7] Chen L, Su Y F, Yin Z Y, et al. Flavonoidsfrom Disporum cantoniense (Liliaceae) [J]・ Biochem Syst Ecol, 2009, 37 (5)： 609.[8] 陈磊.百合科两种药用植物化学成分及生物活性 研究[D].天津：天津大学，2009.[9] 甘秀海，周欣，梁志远，等.不同产地百尾参 挥发性成分比较研究[J].安徽农业科学，2012, 40 (2)： 765.[10] 甘秀海，梁志远，王瑞.百尾参抑菌活性研究[J].贵阳学院学报，2012, 7 (1)： 43.[11] 陈奇.中药药理研究方法学M. 2版.北京：人民卫生出版社，2006： 347, 626.[12] 尚小雅，李帅，王映红，等.红绒毛羊蹄甲的化学成分研究[J].中国中药杂志，2006, 31(23)： 1953.[13] 杜子伟，刘吉开，项晨，等.虎皮小牛肝菌的化学 成分研究[J].天然产物研究与开发，2012, 24： 618.[14] Kuo Y H, Jou M H. T。