毕业设计(论文)苹果中原花青素的提取及其抗氧.doc

毕业设计(论文)题 目 苹果中原花青素的提取及其抗氧活性研究苹果中原花青素的提取及其抗氧化活性研究【摘要】：对从苹果中提取原花青素的工艺进行了研究，考察了提取温度、时间、pH值、料 液比以及提取溶剂等因素的彫响，在单因素试验的基础上,通过正交试验筛选出最佳的提収工 艺条件，即以80%的乙醇为溶剂、料液比为1 ： 10、pH值为6.0、提取温度80°C、浸提3次、 每次浸提120min,在此条件下，原花青素的得率为0.116%在抗氧化试验中，以Vc做对照，结 杲表明，原花青素具有很强的抗氧化活性以富士苹杲为试验材料，邻苯二酚为底物，对多酚氧 化酶(polyphenol oxidase,PPO)的提取条件及特性进行了研究结果表明，富士苹果PPO的最 佳提取条件为pH值5.4的磷酸氢二钠■柠檬酸缓冲液(含20g.L-l的PVFP和2.5 g.L-lTriton XJ00)、液料比1.5 mL.g-l;PPO的最适温度为30°C,最适pH值为4.0单独使用对PPO活性 抑制能力最强的是L-半胱氨酸，其次是抗坏血酸，草酸和柠檬酸抑制能力较弱复合抑制剂的最优组合为0.900 g.L-1抗坏血酸、5.000 g.L-1柠檬酸、3.750 g.L-1草酸、1.000 g.L-lL■半胱 氨酸，对PPO的抑制率达97.83%。

关键词】:苹果；原花青素；提取；抗氧化活性Extraction of apple procyanidins and their antioxidativeactivityAbstract: The extraction of procyanidins from apple process has been studied, examined the extraction temperature, time, pH, solid-liquid ratio as well as the extraction solvent and other factors, in the single-factor test, based on the screening by orthogonal the optimal extraction conditions, that is 80% ethanol as solvent, solid-liquid ratio of 1:10, pH value of 6.0, extraction temperature 80 °C, extracted three times, each time extracting 120min, in this condition the original anthocyanins yield of 0.116%. In anti-oxidation tests, in order to Vc as controls, results showed that the proanthocyanidins have a strong antioxidant activity. With Fuji apple as experimental material, catechol as the substrate for polyphenol oxidase (polyphenol oxidase, PPO) extraction conditions and properties were studied. The results showed that Fuji apple PPO extract the best conditions for pH value of 54, disodium hydrogen phosphate - citric acid buffer (including 20g.L-l of PVPP and 2.5 gL-1 Triton X-100), liquid feed ratio 1.5 mL . g-1; PPO optimum temperature is 30 °C, optimum pH value of 4.0. Used alone inhibited the ability of PPO activity is the strongest L-cysteine, followed by ascorbic acid, oxalic acid and citric acid suppression capability is weak. The optimal combination of compound inhibitor 0.900 gL-l ascorbic acid, 5.000 gL-1 citric acid, 3.750 gL-1 oxalic acid, 1.000 gL-lL-cysteine, the inhibition of PPO rate of 97.83%.Key words: apple extract the antioxidant activity of procyanidin刖吕1苹果中原花青素的检测方法1.2仪器与试剂2. 1仪器与材料2. 2实验方法2. 3实验结果与分析 43原花青素的抗氧化性研究 53. 1原花青素抗氧化性与结构的关系 53. 2原花青素在体内的吸收代谢 53. 3原花青素抗氧化性的药理作用 6结论 7致谢 7参考文献 8-XX. —1—冃IJ S原花青素(英文：Proanthocyanidins)是一类黄烷醇单体及其聚合体的多酚化合物。

其共同 的特点是在酸性介质中加热均可产牛花青素(Anthocyanidins),故被称为原花 青素原花青素是植物中一种色素成分，广泛存在于各种植物中结构在结构上，原花青素是由不同数量的儿茶素(catechin)或表儿茶素(epicatechin) 结合而成最简单的原花青素是儿茶素、或表儿茶素、或儿茶素与表儿茶素形成 的二聚体，此外还有三聚体、四聚体等直至十聚体按聚合度的大小，通常将二〜 五聚体称为低聚体(简称0PC),将五聚体以上的称为高聚体(简称PPC) o应用 在各类原花青素中，低聚体分布最广，更具抗氧化和自由基清除能力的生理活性, 是最重要的一类原花青素国内外以葡萄籽中原花青素作为主要活性成分的药品 及保健食品开发较多目前对原花青素中低聚体与高聚体的分类及测定方法仍没 有统一的标准1苹果中原花青素的检测方法1.1原理苹果原花青素是由不同数目的儿茶素或表儿茶素结合而成最简单的结构是儿茶 素、表儿茶素或儿茶素与表儿茶素形成的二聚体，此外还有三聚体、四聚体等直至十聚体 按聚合度的大小，通常将二至四聚体的称为低聚体(oligomeric proantho cyanidins,简称 OPC's),将五聚体以上的称为高聚体(procyanidolic polymers,简称PPC)。

二聚体中， 因两个单体的构象或键合位置不同，可有多种异构体，己分离鉴别的8种结构形式分别命 名为B1-B8,其中B1-B4是由C4~C8键合，B5~B8由C4~C6键合在各类葡萄原花青 素中，二聚体分布最广，研究最多，是最重要的一类苹果原花青素而且苹果原花青素在热 酸条件下可醇解产生花色素李春阳等［2］利用LCMS对苹果花色素进行分析测定，确定为 矢车菊素，从而证明苹果原花青素主要结构单元为原花青定，即其B环上含有两个独基仁2仪器与试剂紫外分光光度法BateSmith法［3］此法是利用原花青素在酸性条件下加热转化为红色的原 理，测泄的只是苹果籽提取物中原花青素的相对值，其含量用原花青素指数(procyanidolic index)来表示，指数一般在80-100之间，有时也可能大于100这种方法测定的结果重现性 很差，并且原花青素在此条件下反应不是很彻底Porter法 基于BateSmith法的缺点，Porter等人对其进行了改进Porter法改进之处主 要是在试剂中添加了 Fe3+,以提高反应的稈度和颜色的稳泄性，此方法测泄的也是原花青 素的相对含量，结果用PVU(porter value unit)表示。

这两种方法，因为没有对照品，测得 的只是相对值，不能直接反映原花青素的含量美国葡萄籽方法评定委员会认为这两种方法 不能作为葡萄籽提取物中总多酚或原花青素的定量分析方法钳酸镀分光光度法钳酸钱分光光度法是基于原花青素中邻苯二酚与钳酸钱在弱酸性介 质中反应生成黄色钳酸酯，此方法也用于茶多酚的含量测定［6］反应产物在333 nm波长处 具有最大吸收该方法的线性范围为5-110 pg/mL, RSD为1回收率为 97.8 %-102.5 %,相关系数r=0.9995,检出限为2.7 pg/mLo研究发现钳酸酯在酸性条件 下(pH值2〜5)最易生成且能稳定存在，溶液的吸光度大随着pH值的升高，溶液颜色逐 渐变浅，吸光度逐渐减小，这是由于随着pH值的增大，溶液中OH■离子浓度增加，加速了 钳酸酯的水解硫酸高肺钱分光光度法 原理是原花青素与Ce4+在强酸性介质中反应生成无色的Ce3+, 通过测定黄色高肺盐的吸光度，间接测定原花青素，Ce4+在319nm波长处具有最大吸收, 原花青素在0.12-10 pg/mL范围内符合比尔定律，己用于实际样品的测定高铁盐一铁氧化钾分光光度法［8］以原花青素为标准品，待原花青素将Fe3+还原成 Fe2+后，Fe2+与铁氧化钾生成可溶性蓝色配合物KFe［Fe(CN)6］,在710 nm处有最大吸 收，原花青素浓度在0.1 ~10pg/mL范围内与吸光度值呈线性相关(r=0.9998),回收率为 95.4%~102.5%, RSD值为1实验考察了酸度、温度、试剂用量、反应时间 对反应的影响，表明随着pH值的增大，吸光值逐渐增大，当pH值在2〜4之间，吸光度 值大而稳定。

在室温条件下反应1 h就可以，当反应温度高于35 °C时，出现滕氏蓝沉淀 本方法具有简单、快速、灵敏等优点，可方便用于苹果提取物中原花青素含量测定1・3分析方法电化学方法［16］利用原花青素的抗氧化力测定原花青素含量的电化学新方法，其原理是在 pH=8.33的TrisHCI•邻苯三酚体系中，加入原花青素后，邻苯三酚于一0.96 V(vs.SCE)处的 还原峰电流减小，且峰电流的减小量与原花青素加入量在10*100 pg/mL范围内呈线性相 关，检出限为4pg/mL之后，韩志萍等［17］采用线性扫描极谱法和循坏伏安法测定原花青 素其原理是在碱性硼砂底液中，原花青素与Zn( II 1.02±0.02V)(vs.SCE)电位处产生灵敏络合吸附波，其峰电流IP与原花青素在40~200 mg/L范围内呈良好的线性关系，该 方法的检出限为25 mg/Lo卢翠英［18］首次建立了流动注射一抑制化学发光测定葡萄籽提取 物中原花青素的含量此方法是基于在碱性条件下，原花青素对H2O2Luminol体系有显著 的抑制作用，结合反相流动注射技术，原花青素质量浓度在0.2-20.0 mg/L范围与相对发 光强度呈线性关系，检出限为0.1 mg/L,采样频率为140次/h,对10.0 mg/L的原花青素 平行测定11次，其RSD为1.2%,冋收率为97%~103%。

该类方法具有操作简单、快速、 灵敏度高和线性范围宽等优点，用于保健品的测定，结果令人满意2.5 高效液相法(HPLC) ［19・20］HPLC测定结果准确，而且能够测定出各个聚合物 及不同异构体的含量但测定所需的各个单体不易得到，只能自行纯化制备，各异构体之间 分离不完全，且分析时间长，。