秦皮水提液中秦皮乙素含量检测方法的建立.docx

    秦皮水提液中秦皮乙素含量检测方法的建立    王建舫，朴美憬，苏日娜，崔德凤，穆 祥*（北京农学院 兽医学（中医药）北京市重点实验室，北京 102206）Reference：为建立秦皮水提液中秦皮乙素含量检测的方法，以乙腈-0.1%磷酸（13：87）为流动相，采用高压液相色谱仪和紫外检测器进行测定结果表明，在10～100μg/mL范围内，秦皮乙素浓度和峰面积的线性关系良好，秦皮乙素的平均回收率为96.35%（n=6），RSD为2.15%该方法符合方法学考察的规定，可作为秦皮水提液中秦皮乙素含量测定的方法Keys：秦皮水提液；秦皮乙素；高效液相色谱；方法的建立秦皮为木犀科植物苦枥白蜡树Fraxinus rhynchophylla Hance、白蜡树 Fraxinus chinensis Roxb.、尖叶白蜡树Fraxinus szaboana Lingelsh.或宿柱白错树Fraxinus stylosa Lingelsh.的干燥枝皮或干皮春、秋二季剥取，晒干苦、涩，寒归肝、胆、大肠经具有清热燥湿，收涩止痢，止带，明目用于湿热泻痢，赤白带下，目赤肿痛，目生翳膜[1]本试验采用高效液相色谱法对秦皮水提液中秦皮乙素的含量进行了测定，建立了一种专一性强、重复性好的测定方法。

1 材料高压液相色谱仪（沃特世有限公司）；超纯水（上海力新仪器有限公司）；针筒式微孔滤膜过滤器（天津市科亿隆实验设备有限公司）；秦皮乙素（批号E-0244，购自上海同田生物技术股份有限[来自wWw.LW5U.com]公司）；秦皮（购自北京同仁堂）；秦皮水提液，本实验室自制；乙腈、甲醇（色谱纯，天津市光复精细化工研究所）2 方法2.1 色谱条件博纳艾杰尔色谱柱（5μm，150mm×4.6mm）；流动相为乙腈-1%磷酸（13：87）；流速为1.0mL/min；检测波长：348nm；柱温：25℃2.2 对照品溶液[来自WW]的制备精密称取秦皮乙素2.5mg放置于25ml容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，得到对照品贮存液（100μg/ml）吸取秦皮乙素对照品贮备液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0ml，分别放置于5mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，分别得到10、20、40、60、80μg/ml的溶液加上对照品贮存液，组成6个浓度梯度的对照品溶液2.3 秦皮水提液的制备称取秦皮2g，加入100ml蒸馏水，加热回流1h，放冷，过滤，得到样品溶液2.4 阴性样品溶液的制备吸取2ml甲醇，过滤，得到阴性样品溶液。

3 结果3.1 方法学考察3.1.1　专属性试验精密吸取阴性样品溶液、秦皮乙素对照品溶液和秦皮水提液样品溶液各10μl，自动进样注入高压液相色谱仪中，结果在秦皮乙素色谱峰相应的位置上，秦皮水提液样品溶液具有相同保留时间的色谱峰，而在阴性样品中没有出现相应的色谱峰（见图1）3.1.2　线性关系考察分别精密吸取浓度为10、20、40、60、80、100μg/ml的对照品溶液10μl，自动进样注入高压液相色谱仪，对色谱图进行处理后计算出峰面积，以秦皮乙素浓度（μg/ml）为横坐标，峰面积值为纵坐标，计算回归方程为y=40430x-30198，R2=0.9983结果表明，在10～100μg/ml范围内，峰面积与秦皮乙素浓度呈良好的线性关系（见图2）3.1.3　精密度试验取秦皮乙素对照品溶液10μl进样，连续进样6次，结果峰面积的相对标准偏差（RSD）为0.25%，说明仪器精密度良好3.1.4　重复性试验取同一批秦皮水提液10μl注入色谱仪，连续进样6次，结果6份样品峰面积RSD为0.71%，表示方法重复性良好3.1.5　溶液稳定性试验取同一批秦皮水提液，分别于0、1、4、8、12和24h进样10μl，测定峰面积，结果表明，24h内峰面积RSD为0.96%，表明样品溶液在24h内稳定。

3.1.6　加样回收率试验量取已知秦皮乙素含量的秦皮水提液3.5ml，置5ml容量瓶中，加入对照品贮存液1.5ml，用甲醇定容，至刻度，混匀，进样10μl注入色谱仪，计算加样回收率重复6次，结果6份样品平均回收率为96.35%，RSD为2.15%，表明回收率良好3.2 样品的测定取10μl秦皮水提样品溶液，注入高压液相色谱仪，按照上面的色谱条件进行测定，通过外标一点法计算样品中秦皮乙素的含量，结果样品中秦皮乙素含量为31.28μg/ml4 小结本试验采用高效液相色谱-紫外检测法测定了秦皮水提液中秦皮乙素的含量，方法学考察证明该试验中使用的方法良好，可以作为秦皮水提液中秦皮乙素含量测定的方法Reference[1]　国家药典委员会编中华人民共和国药典（一部）[Ｓ].北京：中国医药科技出版社，2010：254.  -全文完-。