生物制药 细胞培养技术.doc

1 .微载体培养操作要点 •培养初期：保证培养基与微球体处于稳定的PH与温度水平，接种 细胞（对数生长期，而非稳定期）至终体积1/3的培养液中，以增加 细胞与微载体接触的机会不同的微载体所用浓度及接种细胞密度是 不同的常使用2.3g/L的微载体含量，更高的微载体浓度需要控制 环境或经常换液•贴壁阶段（3.8d）后，缓慢加入培养液至工作体积，并且增加搅拌 速度保证完全均质混合•培养维持期：进行细胞计数（胞核计数）、葡萄糖测定及细胞形态「A3镜检随意细胞增殖，微球变得越来越重，需增加搅拌速率经过3d左右，培养液开始呈酸性，需换液：停止搅拌，让微珠沉淀5min,弃掉适宜体积的培养液，缓慢加入新鲜培养液（37C）,重新开始搅 拌•收获细胞：首先排干培养液，至少用缓冲液漂洗1遍，然后加入相 应的酶，快速搅拌（75.125r/min） 20-30mino然后解离收集细胞及其产品•微载体培养的放大：可以通过增加微载体的含量或培养体积进行 放大使用异倍体或原代细胞培养生产疫苗、干扰素，巳被放大至4000L以上2 .什么是微载体?微载体是指直径在60-250gm,能适用于贴壁细胞生长的微珠一般 是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成。

自Van Wezel用DEAE-Sephadex A 50研制的第一种微载体问世以来，国际市场上出 售的微载体商品的类型巳经达十几种以上，包括液体微载体、大孔 明胶微载体、聚苯乙烯微载体、PHEMA微载体、甲壳质微载体、聚 氨酯泡沫微载体、藻酸盐凝胶微载体以及磁性微载体等常用商品化 微载体有三种：Cytodexl> 2、3, Cy top ore 和 Cytoline•微载体的大小：增大单位体积内表面积(S/F)对细胞的生长非常有 利使微载体直径尽可能小，最好控制在100-200J1IH之间•微载体的密度：一般为L03.L05g/cm2,随着细胞的贴附及生长, 密度可逐渐增大•微载体的表面电荷：据研究，控制细胞贴壁的基本因素是电荷密度 而不是电荷性质若电荷密度太低，细胞贴附不充分，但电荷密度过 大,反而会产生“毒性”效应3 .微载体培养优点: •表面积/体积(S/V)大，因此单位体积培养液的细胞产率高;•把悬浮培养和贴壁培养融合在一起，兼有两者的优点;•可用简单的显微镜观察细胞在微珠表面的生长情况;•简化了细胞生长各种环境因素的检测和控制，重现性好;•培养基利用率较高;•放大容易;•细胞收获过程不复杂;•劳动强度小；•培养系统占地面积和空间小什么是微囊化培养技术？有哪些优点?微囊化培养技术其要点是：在无菌条件下将拟培养的细胞、生物活性物质及生长介质共同包裹在薄的半透膜中形成微囊，再将微囊 放入培养系统内进行培养。

生长介质为1. 4 %海藻酸钠溶液，半透S由多聚赖氨酸形成培养系统可采用搅拌式或气升式反应器系统实验证明，采用批式和连续灌注式培养杂交瘤细胞生产单克隆抗体, 在7〜27 d微囊内抗体浓度可达1 250〜5 300 mg/ L利用微囊包if裹具有特定功能的组织细胞，形成免疫隔离的人工细胞，以此植入if疾病动物或病人体内1980年报道了微囊化胰岛移植治疗大量实验 性糖尿病他们将同种大鼠胰岛用海藻酸-聚赖氨酸-聚乙烯亚胺包 埋后植入链腿霉素诱导的糖尿病大鼠体内，在未用免疫抑制剂的情 况下，控制大鼠血糖正常达一年左右微囊化培养的优点是:%1 可防止细胞在培养过程中受到物理损伤；%1 活性蛋白不能从囊中自由出入半透膜，从而提高细胞密度和产物 含量，并方便分离纯化处理缺点是: ①微囊制作复杂，成功率不高;②微囊内死亡的细胞会污染正常产物;%1 收集产物必须破壁，不能实现生产连续化。