[精品]黄连素的提取与含量鉴定及其抗菌性的研究.doc

黄连素的提取及其肠道抗菌性的研究摘 要长久以來，黄连索在临床上被应用于多种疾病的治疗，并收到极佳的效果， 因此在医学上占有重要的地位但是，是跖三分毒，只有合理的用纱才能对机体 冇利，胡乱服用的话，反而会对健康造成伤害利用其溶解度的相关性质，可通 过酸提取法从黄连中取得黄连素再通过漂口粉进行鉴定最后，设置对照试验, 以肠道细菌为对象，研究在一定范围内不同浓度黄连素的抗菌作用以此来提醒 人们合理、科学的利用黄连索，乃至其他抗生索关键词：黄连素 提取 肠道细菌抗菌性目 录1. 前言 12. 实验口的 23. 实验原理4. 试验设备 25. 实验材料及试剂 36. 实验步骤 37. 实验记录 48. 实验结论 49. 实验评估及相关讨论 510. 参考文献 61前言：黄连素的通用名叫盐酸小槳碱，是从黄连、黄柏等小漿科植物中捉炼出来的一 种抗菌性牛物碱，黄连素能对抗病原微牛物，对多种细菌如痢疾杆菌、结核杆菌、 肺炎球菌、伤寒杆菌及白喉杆菌等都有抑制作用，其中对痢疾杆菌作用最强，常 用來治疗细菌性胃肠炎、痢疾等消化道疾病，系治疗腹泻的冇效药物，常作为居 家旅行的常备药物，但人们却没有认识到黄连素是一种抗菌素，对腹泻不加区分 地胡乱服用，冇害于健康，在抗菌素滥用的今天，重新认识黄连素、准确应用并 严格管理使用是十分有必要的。

引自：文汇报2010-03-29——腹泻不要随意服用黃连素现代药理学研究证实黄连素具冇显著的抗心力衰竭、抗心律失常、降低胆固 醇、抗制血管平滑肌增殖、改善胰岛素抵抗、抗血小板、抗炎等作用，在心血管 系统和神经系统疾病展现其诱人的前景另一方面，黄连素在临床中-•直作为非 处方药用于治疗腹泻，在人们越來越多的滥用非处方药的今天，黄连索也难免被 胡乱用于治疗腹泻本实验欲通过从黄连中捉取黄连素，并对所得产品进行鉴定然后，通过通 过研究在一定范围内不同浓度的黄连素对肠道细菌的抗菌作用最后，谨以此研 究来提醒人们合理利用黃连素，避免对身体造成不必要的伤害2实验目的：2.1从黄连中捉取黄连素2.2以漂口粉对提取物中的黄连素进行鉴定2. 3研究在一定范围内不同浓度的黄连素对肠道细菌的抗菌作用2.4通过对肠道细菌的研究提醒人们合理利用黄连索3实验原理：3.1黄连素的分子式[C20H18C1N04],分子量371.8,熔点145C,自然界中常以季 鞍碱形式存在,碱性强(pkall.53),能溶于水中，其水溶液有三种互变形式黃连素又名小漿碱，为黃色针状结晶，微溶于冷水，较易溶于热水中，几乎 不溶于乙储、苯等冇机溶剂。

其盐在水中溶解度很小，尤其是盐酸盐盐酸盐为 1： 500,酸性硫酸盐1： 100,硫酸盐1： 30,但在热水中都比较容易溶解3.3黄连素的鉴定在酸性条件下，加入少量漂口粉可使黄连素溶液显樱红色3.4据有关研究，一定浓度的黃连素具有一定的抗菌性4实验设备：研钵，电热套，温度计，PH计，试管，试管夹，烧杯(250ml),培养皿(6个), 量筒(100ml),胶头滴管，普通蒸憾装置，圆底烧瓶，电子天平，制冰机，冷凝 管，水浴装置，蒸发皿，石棉网，漏斗，纱布，滤纸，玻璃棒，抽滤装置，沸石5实验材料及试剂黄连、稀硫酸、浓盐酸、漂白粉、丙酮、新鲜肉汤、NaCl品体、氢氧化钙 溶液、新鲜老鼠粪便6实验步骤：6.1黄连素的提取6.1.1称取20g已磨细的中药黄连装入250mL圆底烧瓶中，加入0. 3% H.SO, 200mlo并加入沸石，放入电热套中煎煮6.1.2煎煮30min后，趁热过滤，加入氢氧化钙溶液调至中性待反应完全后, 进行抽滤6.1.3所得滤液加入浓盐酸，使PH值为2~3,静置于冰水浴中冷却，待温度降 低到接近OC,立即抽滤，结品用冰水洗涤2次，用丙酮洗涤一次，即得黄连素 盐酸盐粗品6.1.4将所得粗产品进行重结晶，达到纯化的目的。

干燥后，用电子天平秤得质 量，并记录6. 2黄连素的鉴定621取两只试管，编号甲，乙各加稀盐酸2ml622取木詁约5mg,加入到甲试管中，用玻璃棒搅拌均匀6.2.3往甲，乙两试管各加漂口粉少量若甲试管溶液显樱红色，而乙试管无此 现彖，则证明冇黄连素生成6.3不同浓度黄连素的抗菌性的研究为避免肠道以外的细菌的干扰，本实验将选择在超净试验台操作，所用仪器也经 过消毒处理6. 3.1配制新鲜肉汤，并加入适量NaCl使其咸度近似于普通饭菜以便使溶液渗 透压与肠道环境近似从而制成简单的细菌培养液6. 3.2取5个培养皿编号为A , B, C, D, E各加入30ml的培养液6.3.3以6. 1所得黄连索为原料按一定的剂量加入到E, C, D, E培养皿中， 分别配制成含黄连素100ug/ml, 200ug/ml, 300ug/ml, 400ug/ml的营养液培养 血A不做处理，作为空口对照的对彖6.3.4将5个5个培养皿置于3 7 的恒温培养箱中备用6.3.5从小口鼠的新鳞粪便中通过冲洗，用纱布过滤，即得小白鼠肠道的细菌滤 液6. 3.6将小鼠肠道细菌滤液加入另一个新制培养液皿（F）中并置于37C恒温箱中培养2个小时使Z具有足够的数量來保证实验进行。

6.3.7依次从F菌培养液中提取10ml肠道细菌培养液，分别等量加入到A到E五 个培养皿中然后放回恒温箱中培养6. 3.8毎隔一个小时观察一次，记录各个培养皿菌落的生存状况7实验记录7. 1记录相关数据组分时间1 h2 h3 h4 h备注ABCDE7. 2分析上图所得数据，以得到不同浓度黄连素在不同吋间段内对肠道细菌的 作用，并作详细报告8实验结论8. 1通过本实验对黄连素的提取，可初步得出黄连中黄连素的含量8. 2通过对黄连素抗菌性的研究，可得到黄连素的浓度，以及时间与细菌生长 的作用关系借此大致了解黄连索在肠道对细菌的作用8.3弓I：（文汇报）现代医学研究发现：在人的肠道内共生着600余种、100万 亿的庞大菌群系统离开它们，人类就不能健康地生存，I大I为它们能合成供给人 体自己所不能合成的各种必需维生素，能合成供给人体肠黏膜再生和修复所必需 的短链脂肪酸如丁酸，特别重要的是这些肠道微牛物还是构成肠淋巴免疫系统的 重要成员，而肠淋巴免疫占人体免疫功能系统的70%,长期滥用黄连索将对上述 系统造成不可估计的损失H期：2010-03-29作者：林晖腹泻一般可分为感染性腹泻和非感染性腹泻，对于非感染性腹泻患者來说黄 连素并无药效作用。

通过木实验可知，一定浓度的黃连素对肠道的正常细菌的生 长具有抑制甚至杀伤作用，其中包括了许多对人体有益的细菌胡乱服用黄连素 在造成肠道细菌数量与功能失调的同时也间接对机体的代谢造成一 •定程度的伤 害因此，对于一些不明腹泻（特别针对于非感染性腹泻的病因，比如：肠易 激综合征、溃疡性结肠炎、营养不良、食物中毒、内分泌疾病、过敏性疾病等）, 患者首要应该特别地注意饮食起居，如若反复不止，则应当选择就医9实验评估及相关讨论9.1本实验关于黄连素的提取主要参考了《医学有机化学实验》——实验7 — 4 从黃连中提取黃连素但木实验又对实验方案进了较大的调整，不采用醇提取法, 而采用酸水提取法其优点如下：a・不论对于乙醇还是水，黄连素的溶解特性都是微溶于冷的溶剂，较易溶于热 的溶剂，从这点岀发，证明了水捉取法的可行性b・黄连素的盐溶液在硫酸溶液中的溶解度比在盐酸溶液中的溶解度大十多倍， 利用此特性可有效的使黄连素结品沉淀，冃其中的硫酸根可通过氢氧化钙溶液去 除c・温度对黄连素的提取是个重要的因素，即温度高可大大加快提取速率很明 显，用酸水提取法可比醇提取法获取更高的温度d・与醇提取法和比，酸水提取法有着成木低廉，安全系数高的优点。

9. 2黄连粉末磨得越细，以及实验前先将黄连索置于圆底烧瓶中用稀硫酸浸泡， 会明显提高黄连素的提取效果9.3考虑到黄连素的熔点极高，稳定性良好，关于黄连素的提取，本实验使用圆 底烧瓶宜接煎煮的方法，可使提取的时间人人缩短9. 4木次实验所得的黄连素，虽经过纯化，纯度仍难以达到100%,因此，配制营 养液的时候浓度值难免存在误差9. 5从小鼠粪便小收集的细菌种类与成分比例难免会与肠道当中存在偏差，会造 成一定的偏差9.6由丁•成人服用黄连索的剂量-•般是0.3g左右，而平吋饭量加上饮水量等 1〜3L由此计算出存在于肠道的黄连素浓度范围在100〜300ug/ml左右9・7由于实验操作时间紧凑，对于培养液中菌落的现象差别可能不会太明显，故 实验前先配制含一定浓度的细菌液为好9. 8我们应该通过对黄连素的初步研究得以举一反三，不仅掌握一些有关研究方 面的知识与能力，更重要的是要明片，任何事物的运行与操纵都冇一定的原理与 规律，只有科学的，理性的认知，才能使人类自身更好的发展，进步，更好的与 大口然和谐相处，从而更好的改造我们的世界参考文献【1】《医用有机化学实验》科学出版社——第一章 有机化学实验基础知识， 笫三章 有机化学的分离与提纯，第七章 天然有机物的提取之实验7 —4 从 黄连中捉取黄连素【2】《生物工程实验技术手册》化学工业出版社——第二章 微生物学实验 2 .1培养基的配制与灭菌【3】百度百科一一黃连素；百度百科一一盐酸小漿碱片【4】文汇报2010-03-29——腹泻不要随意服用黄连素【5】《辽宁中医院大学学报》2 0 0 9年第1 1卷第一期——黄连素的研究进 展作者任贻军，高逢喜（华中科技大学同济医学院附屈荆州医院药剂科）。