微生物学实验指导.doc

微生物实验守则微生物学实验的目的是：加深对微生物学理论知识的理解；扎实掌握实验的基本操作，并牢固建立无 菌操作的概念；培养学生认真观察、发现问题、分析问题和解决问题的工作能力；树立学生实事求是、严 肃认真的科学态度和勤俭节约、协作攻关的优良作风为了提高教学效果，保证实验质量和实验室安全，特提出如下注意事项1. 每次实验前必须充分预习实验教材，以了解实验的目的、原理和方法，熟悉实验操作中的主要步骤 和环节2. 非必要的物品不要带入实验室，必须带进的物品应放在不影响实验操作的地方3. 实验时认真听教师的讲解，仔细观察示范操作4. 许多微生物有潜在的致病能力实验中要严格无菌操作，以免培养的微生物进入外界环境，并保证 所培养的微生物不受污染① 实验室内严禁餐饮② 实验前洗手并用酒精棉球擦拭手和台面③ 实验操作过程中，要严格进行无菌操作，以防止菌体间交叉感染或致病菌对人体造成危害④ 在进行接种操作时，要关闭门窗，以防止空气对流，要尽量减少走动和讲话，以防止尘埃飞扬和唾 沫四溅⑤ 用过的带菌吸管、滴管、玻片、涂布棒和移液器枪头等，用酒精或来苏尔等浸泡以后再进行清洗⑥ 离开实验室之前要用肥皂洗手⑦ 实验室中的菌种和物品等，未经教师允许，不得携带出实验室。

凡需进行培养的材料，都应注明菌种名、接种日期、处理方法及操作者姓名（或组别） ，放在制定的培养箱中进行培养5. 如发生培养菌的器皿打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况时，应立即报告指导教师，及时处理，菌液污染实验台面或其他物件时，应及时用 3％的来苏尔或 5％的石炭酸液擦拭消毒6. 爱护仪器、设备，严格按照操作规程使用仪器、设备，以确保仪器的安全和学生的人身安全，并做 好使用记录，确保仪器的正常使用7. 按时观察实验现象，认真及时的做好实验记录，对于当时不能得到实验结果而需要连续观察的，则 需记下每次的实验结果，以便分析清晰填写实验报告作业，科学阐述实验结论8. 节约水、电，适量取用药品等耗材9. 实验结束后，应将实验记录交指导教师审阅及检查，经同意后方可结束实验实验完毕，认真清洗 个人器皿、保养仪器、清理试剂和清洁台面，确保实验以后各种药品和仪器回归原位，台面干净整洁10. 值日生负责打扫实验室卫生及检查实验室安全状况（门窗、水、电、煤气等）实验一微生物学实验基础一、 目的要求1. 熟悉实验室的各种仪器与设备2. 学会制作棉塞的与包扎玻璃器皿，了解玻璃器皿的洗涤方法二、 实验材料实验室内各种仪器、培养皿、三角瓶、试管、纱布、棉花、棉线、牛皮纸、剪刀等。

三、 实验内容（一）微生物实验室常用仪器和设备1. 显微镜显微镜是微生物实验中常用的仪器，应对它非常的熟悉根据光源不同，显微镜可分为光学显微镜和电子显微镜两大类前者以可见光（或者紫外光）为光源， 后者以电子束为光源在我们的实验中常用的是光学显微镜光学显微镜有多种，主要有普通光学显微镜、 荧光显微镜、暗视野显微镜、倒置显微镜等在我们的实验中最常用的是普通光学显微镜，下面介绍它的主要构造1）普通光学显微镜构造此类显微镜的构造主要可分为两部分：机械部分和光学部分显微镜的机械部分包括镜座、镜臂、镜 筒、转换器、载物台、调焦螺旋等部件，是显微镜的基本组成单位，主要是保证光学系统的准确配合和灵 活调控光学部分由物镜、目镜、聚光器、光源、反光镜等组成，它们直接影响显微镜的性能，是显微镜 的核心部分图1-1显微镜的构造图（2）普通光学显微镜的使用方法：① 取镜安放：取镜：右手握住镜臂，左手平托镜座，保持镜体直立 （特别要禁止单手提着显微镜走，防止目镜从镜 筒中滑脱）安放：放置桌边时动作要轻一般应在身体的前面，略偏左，镜筒向前，镜臂向后，距桌边 7〜10 cm处，以便观察和防止掉落② 低倍镜的使用：观察任何标本都必须先用低倍镜。

放置切片：升高镜筒，把玻片标本放在载物台中央，标本材料正对通光孔的中心，用压片夹压住载玻 片的两端调焦：将要观察的玻片标本放在载物台通光孔的中央，玻片标本两端用压片夹夹紧，再用手沿顺时针 方向旋转粗调节器，把镜筒徐徐降到接物镜头差不多接近玻片标本（约半厘米）为止 （从侧面观察下降镜筒）然后左眼观察，边观察边用调节器将镜筒徐徐上升（逆时针方向旋转粗调节器）直到发现物象，观察 清晰为止如果不够清楚，可用细准焦螺旋调节（ 不可以在调焦时边观察边使镜筒下降，以免压碎装片和 镜头）③ 低倍镜的观察 由所用的目镜放大倍数与物镜放大倍数相乘，即为原物被放大的倍数如果物像不在视野中央，要慢慢移动到视野中央，适当再进行调节④ 高倍镜的使用 选好目标：如果要观察视野内某部分更细微的结构，则需要用高倍镜观察先用低倍物镜确定要观察的目标，将其移至视野中央转动转换器，把低倍物镜轻轻移开，原位置小心换上高倍物镜再用粗调节 器徐徐将镜筒距离调整，至视野中出现物象，然后用细调节器调节到看清物象止 （用高倍物镜工作距离较短，操作要十分仔细，以防镜头碰击玻片） 调焦：在正常情况下，当高倍物镜转正之后，在视野中央即可见到模糊的物像，只要向反时针方向略 微调动细准焦螺旋，既可获得清晰的物像。

在换上高倍物镜观察时，视野变小变暗，要重新调节视野亮度，可升高聚光器或利用凹面反光镜⑤ 油镜的使用 高倍镜下观察的标本，如果放大倍数还不够，可用油镜，换用前，同样要先在高倍镜下观察，把要观察的部分放在视野的正中央观察到清晰的物象之后，在盖玻片上表面的中央滴一小滴香柏油，再换上油 镜头，使油镜头与香柏油接触，然后由目镜观察一边观察，一边用手稍移动细调节器（切忌用粗调节器） 以看清物象用油镜观察完毕后，转开油镜，必须用擦镜纸点二甲苯擦去镜头上的香柏油下降镜筒，直 立反光镜，使光学部件的光线不再对在一条直线上应当了解的是，在显微镜中观察到的物象是倒象，因此移动玻片时，应注意移动方向如果要使物象 左移动就要向右移动玻片，同样要使物象向前移动，就要向后移动玻片⑥ 使用后的整理 观察结束，应先将镜筒升高，聚光器下降，再取下切片，然后转动转换器，使物镜与通光孔错开，做好清洁工作清洁完毕，再下降镜筒，使物镜和载物台处于最大距离处，然后移动转换器，使两个物镜位 于载物台上通光孔的两侧，呈“八”字形，将反光镜转至与载物台垂直，罩上防尘罩，仍用右手握住镜臂， 左手平托镜座，按号放回镜箱中3）显微镜的保养① 取送显微镜时，必须右手握住镜臂，左手托住镜座，轻拿轻放。

② 显微镜的使用，一定要按实验指导写的方法和步骤，认真仔细去做，不然，容易损坏标本和镜头, 又达不到看清物象的目的③ 观察标本时，一定要先用低倍镜观察，再用高倍镜，低倍镜能看清，就不必用高倍镜④ 不能用硬纸擦透镜，必须用干净的擦镜纸，朝一个方向擦拭透镜，以免损坏镜头⑤ 不要随便转动粗细调节器，以免机器损伤，调节失灵⑥ 载物台要保持清洁、干净，不要让水或其他液体（酸、碱或其他化学药品等）流到台上，以免生锈 或腐蚀⑦ 避免阳光直接照射，要防潮湿、防灰尘，经常保持镜体和镜体箱的干燥和清洁2、高压蒸汽灭菌锅应用最广、效果最好的灭菌器是高压灭菌锅用于培养基、生理盐水、废弃的培养物以及耐高热药品、纱布、玻璃器皿等的灭菌其种类有手提式、直立式、横卧式等（图 1-2），他们的构造及灭菌原理基本相同压力表排气阀主排气软管图1-2-1手提式高压蒸汽灭菌锅立式高压蒸汽灭菌锅 普通卧式高压蒸汽灭菌锅 圆形卧式高压蒸汽灭菌锅图 1-2-2图 1-2-3图 1-2-4By174图1-3棉塞的制作高压蒸汽灭菌锅主要构造为一双层金属圆筒，两层之间盛水，外壁坚厚，上方或前方有金属厚盖， 盖上装有螺旋，借以紧闭盖门，使蒸汽不能外溢，因而锅内压力可升高，其温度也相应增高。

高压蒸汽灭 菌锅还装有排气阀，用来调节灭菌锅内蒸汽压力与温度，并保障安全；高压蒸汽灭菌锅上还装有温度压力 表，指示内部的温度和压力3、超净工作台是进行微生物无菌操作的工作台，它能在局部形成高净洁度的环境其工作原理是借助鼓风机将外界空气强行通过一组过滤器，净化的无菌空气连续不断地进入操作台面，并且台内设有紫外线杀菌灯，可对环境进行杀菌，保证了超净工作台面的正压无菌状态4、培养箱培养箱又称保温箱，是培养微生物的主要仪器培养箱一般为方形或长方体形，外壳是喷漆的铁皮或优良塑料材料，内壁为铝板，夹层填充石棉或玻璃棉等绝缘材料以防止温度扩散内层底部安装电阻丝用以加热，利用空气对流，使箱内温度均匀5、干燥箱30-300 C不同类型的干燥箱由于干燥箱又称烘箱，是一种常用于物品干燥的仪器，加热范围一般为用途、要求不同，构造略有差异其构造与传统的培养箱基本相同，只是底层下的电热量大主要用于玻璃仪器的灭菌，也可用于洗净的玻璃仪器的烤干6、离心机离心机的主要用途是使液体标本达到离心沉淀的目的其原理是利用离心力的作用，将浊液固液分离二）棉塞的制作与玻璃器皿的包扎1、棉塞的制作常用的棉塞有试管塞和三角瓶塞，其制作方法基本一致，具体步骤见图 1-3。

不合格的棉塞合格的棉塞图1-2 合格与不合格棉塞的对比图2、玻璃器皿的清洗 玻璃器皿的清洁与否，常会影响实验结果的准确性，所以在使用之前，对玻璃器皿要进行洗涤 1）新玻璃器皿 新玻璃器皿含有游离碱，初次使用时，应先在 2％的盐酸水溶液内浸泡数小时，再用自来水冲洗干净 2）带油污的玻璃器皿 可先在 50g/L 的碳酸氢钠液内煮两次，再用肥皂和热水洗涮 3）带菌的玻璃器皿滴管和吸管：投入 3％的来苏水或 5％的石炭酸溶液内浸泡数小时或过夜，或经高压蒸汽灭菌后，用自 来水及蒸馏水冲净载玻片及盖玻片： 先浸入 3％的来苏水或 5％的石炭酸溶液内， 然后用夹子取出经清水洗净， 再放入 95％ 的乙醇中，使用时在火焰上烧去乙醇，或用软布擦干使用均可其他的带菌玻璃器皿：应先经 121 C高压蒸汽灭菌，20-30min后取出，趁热到处容器内的培养物，再 用热水和肥皂水刷洗干净，用自来水冲洗3、玻璃器皿的包扎 试验中的各种玻璃器皿常常要进行灭菌处理，为了使灭菌后仍能保持无菌状态、以及防止在灭菌过程 中带有样品的玻璃器皿内的蒸汽冲破棉塞，导致器皿内的样品喷溅出来，所以，在灭菌之前对需灭菌的器 皿进行包扎① 培养皿洗净、干燥后，一般每 6 套（可视情况改变数量）叠放在一起，用牛皮纸卷成一筒，外面用棉绳捆扎 紧，然后进行灭菌后备用。

灭菌后的培养皿，一定要使用时才能打开牛皮纸，以免微生物再次污染② 试管洗净、干燥的试管，塞上合格的面塞，面塞入管 2/3，管外留 1/3，同规格的 7支（可视情况改变数量） 用棉绳捆扎在一起，试管上半部分外包纱布和牛皮纸，再用棉绳捆扎紧后准备灭菌，灭菌后，用时再打开 如果试管内有培养基等，应注明③ 三角瓶 三角瓶每个需要单独塞好棉塞，用牛皮纸包扎，用棉绳扎紧后待灭菌灭菌后，用时再打开如果瓶 内有待灭菌的物质如培养基、生理盐水等，应注明四、实验报告1. 普通光学显微镜的构造主要分为哪几。