生物选修一--DNA的粗提取与鉴定-课件PPT.ppt

DNADNA粗提取与鉴定粗提取与鉴定2021/8/2611 1、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的DNADNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破2 2、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水解酶活性，防止解酶活性，防止解酶活性，防止解酶活性，防止DNADNA降解，二是降低分子运动，易于降解，二是降低分子运动，易于降解，二是降低分子运动，易于降解，二是降低分子运动，易于形成沉淀析出，三是低温有利于增加形成沉淀析出，三是低温有利于增加形成沉淀析出，三是低温有利于增加形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNADNA分子柔韧性，分子柔韧性，分子柔韧性，分子柔韧性，减少断裂；减少断裂；减少断裂；减少断裂；注意：注意：2021/8/262根据以上原理可设计提取和纯化根据以上原理可设计提取和纯化DNA的方案：的方案：方案一：方案一：30mL含含DNA的滤液＋的滤液＋2mol/L NaCl→同方向搅拌，同方向搅拌，DNA溶解溶解→加入蒸加入蒸馏水馏水→DNA析出析出→过滤得到过滤物过滤得到过滤物→放到放到2mol/LNaCl溶液中溶解溶液中溶解→DNA-NaCl溶解溶解液液方案二：方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白酶）酶）→静置静置10～～15分钟分钟→DNA滤液滤液方案三：方案三：30mL滤液滤液→60～～75℃℃恒温保温恒温保温10~15分钟分钟→过滤获得过滤获得DNA滤液滤液2021/8/263两种材料的两种材料的DNA粗提取与鉴定过程粗提取与鉴定过程以鸡血为材料以鸡血为材料以花菜为材料以花菜为材料①①①①释放组织细胞中的释放组织细胞中的释放组织细胞中的释放组织细胞中的DNADNA，，，，②②②②粗提取粗提取粗提取粗提取DNADNA，，，，③③③③将粗提取的将粗提取的将粗提取的将粗提取的DNADNA进一步纯化，进一步纯化，进一步纯化，进一步纯化，④④④④鉴定提取物是鉴定提取物是鉴定提取物是鉴定提取物是DNADNA2021/8/264鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图2021/8/2652mol/L2mol/L鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图2021/8/2665 5、过滤、过滤、过滤、过滤→→取纱布上的滤物取纱布上的滤物取纱布上的滤物取纱布上的滤物纱布过滤纱布过滤纱布过滤纱布过滤6 6、再次溶解、再次溶解、再次溶解、再次溶解DNADNA2mol/LNaCl2mol/LNaCl溶液溶液溶液溶液取滤物取滤物取滤物取滤物鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图2021/8/2677 7、加冷酒精使、加冷酒精使、加冷酒精使、加冷酒精使DNADNA析出（纯化）析出（纯化）析出（纯化）析出（纯化）冷酒精冷酒精冷酒精冷酒精鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图的粗提取实验流程图2021/8/268DNA的鉴定2021/8/269鸡血细胞鸡血细胞鸡血细胞鸡血细胞植物组织植物组织植物组织植物组织１. 0.1g/ml. 0.1g/ml的柠檬酸钠溶液的柠檬酸钠溶液的柠檬酸钠溶液的柠檬酸钠溶液, ,按按按按1:21:2的比例与新鲜鸡血混的比例与新鲜鸡血混的比例与新鲜鸡血混的比例与新鲜鸡血混合搅拌均匀。

合搅拌均匀合搅拌均匀合搅拌均匀２２２２. .将血液置于冰箱中将血液置于冰箱中将血液置于冰箱中将血液置于冰箱中2424小时小时小时小时, ,弃上部澄清液弃上部澄清液弃上部澄清液弃上部澄清液３３３３. .取烧杯中的血细胞液约取烧杯中的血细胞液约取烧杯中的血细胞液约取烧杯中的血细胞液约5~10ml5~10ml加入到加入到加入到加入到100ml100ml烧杯中，烧杯中，烧杯中，烧杯中，向烧杯中加入向烧杯中加入向烧杯中加入向烧杯中加入20ml20ml蒸馏水，用玻棒沿一个方向蒸馏水，用玻棒沿一个方向蒸馏水，用玻棒沿一个方向蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速快速快速快速搅拌搅拌搅拌搅拌5 5分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂４４４４. .将将将将2mol/L2mol/L的氯化钠溶液的氯化钠溶液的氯化钠溶液的氯化钠溶液50ml50ml缓缓倒入烧杯中，用玻缓缓倒入烧杯中，用玻缓缓倒入烧杯中，用玻缓缓倒入烧杯中，用玻棒沿一个方向搅拌，使棒沿一个方向搅拌，使棒沿一个方向搅拌，使棒沿一个方向搅拌，使DNADNA溶解于氯化钠溶液中，溶解于氯化钠溶液中，溶解于氯化钠溶液中，溶解于氯化钠溶液中，滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞DNADNA提取液提取液提取液提取液５５５５. .将鸡血细胞将鸡血细胞将鸡血细胞将鸡血细胞DNADNA提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状DNADNA不再析出为止。

用玻棒搅拌，使析出的不再析出为止用玻棒搅拌，使析出的不再析出为止用玻棒搅拌，使析出的不再析出为止用玻棒搅拌，使析出的DNADNA缠绕于玻棒末端缠绕于玻棒末端缠绕于玻棒末端缠绕于玻棒末端６６６６. .将析出的将析出的将析出的将析出的DNADNA再溶解于再溶解于再溶解于再溶解于2mol/L2mol/L的氯化钠溶液中的氯化钠溶液中的氯化钠溶液中的氯化钠溶液中７７７７. .在在在在DNADNA的氯化钠溶液中倒入的氯化钠溶液中倒入的氯化钠溶液中倒入的氯化钠溶液中倒入95%95%的酒精的酒精的酒精的酒精50 ml50 ml（冷（冷（冷（冷却过的酒精效果较好），使却过的酒精效果较好），使却过的酒精效果较好），使却过的酒精效果较好），使DNADNA再次析出，用玻棒再次析出，用玻棒再次析出，用玻棒再次析出，用玻棒搅拌，使搅拌，使搅拌，使搅拌，使DNADNA再次缠绕于玻棒末端再次缠绕于玻棒末端再次缠绕于玻棒末端再次缠绕于玻棒末端８８８８.DNA.DNA的鉴定：取两支试管，各加入的鉴定：取两支试管，各加入的鉴定：取两支试管，各加入的鉴定：取两支试管，各加入2ml0.0152ml0.015氯化钠氯化钠氯化钠氯化钠溶液，将溶液，将溶液，将溶液，将DNADNA溶解于其中一支试管中，另一支做为溶解于其中一支试管中，另一支做为溶解于其中一支试管中，另一支做为溶解于其中一支试管中，另一支做为对照组。

然后，在两支试管内加等量的二苯胺试剂，对照组然后，在两支试管内加等量的二苯胺试剂，对照组然后，在两支试管内加等量的二苯胺试剂，对照组然后，在两支试管内加等量的二苯胺试剂，水浴加热水浴加热水浴加热水浴加热10min10min左右，冷却，观察实验现象左右，冷却，观察实验现象左右，冷却，观察实验现象左右，冷却，观察实验现象１１１１. .取新鲜植物组织（菜花）取新鲜植物组织（菜花）取新鲜植物组织（菜花）取新鲜植物组织（菜花）放置于冰箱中冷却放置于冰箱中冷却放置于冰箱中冷却放置于冰箱中冷却1~21~2天天天天２２２２. .取取取取3030克植物组织克植物组织克植物组织克植物组织, ,切碎切碎切碎切碎, ,置于研体中置于研体中置于研体中置于研体中, ,倒入适量倒入适量倒入适量倒入适量洗洁精洗洁精洗洁精洗洁精, ,加入适量的加入适量的加入适量的加入适量的NaCl,NaCl,充分研磨充分研磨充分研磨充分研磨1010分钟分钟分钟分钟３３３３. .过滤研磨液，取上清夜过滤研磨液，取上清夜过滤研磨液，取上清夜过滤研磨液，取上清夜置于冰箱中冷却几分钟置于冰箱中冷却几分钟置于冰箱中冷却几分钟置于冰箱中冷却几分钟４４４４. .取取取取1 1倍体积的上清液，倍体积的上清液，倍体积的上清液，倍体积的上清液，加入加入加入加入2 2倍体积的倍体积的倍体积的倍体积的95%95%的的的的冷酒精当中，用玻棒轻冷酒精当中，用玻棒轻冷酒精当中，用玻棒轻冷酒精当中，用玻棒轻轻搅拌，沉淀轻搅拌，沉淀轻搅拌，沉淀轻搅拌，沉淀3~53~5分钟分钟分钟分钟后可见白色絮状后可见白色絮状后可见白色絮状后可见白色絮状DNADNA缠缠缠缠绕于玻棒末端。

绕于玻棒末端绕于玻棒末端绕于玻棒末端５５５５.DNA.DNA的提纯同鸡血细胞的提纯同鸡血细胞的提纯同鸡血细胞的提纯同鸡血细胞为实验材料的实验操作为实验材料的实验操作为实验材料的实验操作为实验材料的实验操作步骤步骤步骤步骤6 6、、、、7 7，具体数据有，具体数据有，具体数据有，具体数据有一定的差异一定的差异一定的差异一定的差异６６６６. .鉴定鉴定鉴定鉴定2021/8/2610DNA的的粗粗提提取取与与鉴鉴定定实验原理实验原理DNA在不同浓度在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同溶液中溶解度不同DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同与其他细胞成分在酒精中溶解度不同DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同DNA与二苯胺呈现蓝色反应与二苯胺呈现蓝色反应DNA粗提取粗提取选择适宜材料选择适宜材料破碎细胞破碎细胞DNA的溶解和析出的溶解和析出DNA的纯化的纯化鉴定鉴定DNA与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应总结：总结：2021/8/26111. 下列关于下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是粗提取与鉴定的说法正确的是 A．氯化钠的浓度越低，对．氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大的溶解度越大 B．人血也可代替鸡血进行实验．人血也可代替鸡血进行实验 C．柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂．柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 D．．DNA不能溶于酒精不能溶于酒精2. 在破碎鸡血细胞时，要先加入在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是的蒸馏水，其作用是A. DNA溶解于水溶解于水 B．． 血细胞破裂，血细胞破裂，DNA释放释放C．稀释血液，防止凝固．稀释血液，防止凝固 D．． 有利于搅拌有利于搅拌3. 若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的是涤剂和食盐，加入食盐的目的是A. 利于利于DNA的溶解的溶解 B. 分离分离DNA和蛋白质和蛋白质C. 溶解细胞膜溶解细胞膜 D. 溶解蛋白质溶解蛋白质4. 在在DNA粗提取实验中，向在溶解粗提取实验中，向在溶解DNA的的NaCl溶液中，不断加入溶液中，不断加入蒸馏水的目的是蒸馏水的目的是A．有利于溶解．有利于溶解DNA 　　 B．有利于溶解杂质．有利于溶解杂质C．减少．减少DNA的溶解度的溶解度 D．减少杂质的溶解度．减少杂质的溶解度2021/8/2612 刚才的发言，如刚才的发言，如有不当之处请多指有不当之处请多指正。

谢谢大家！　　正谢谢大家！　　2021/8/2613部分资料从网络收集整理而来，供大家参考，感谢您的关注！。