吡蚜酮检测方法.doc

吡蚜酮检测方法吡蚜酮检测方法1、分析目标化合物吡蚜酮 2、仪器设备 带紫外分光光度检测器的高效液相色谱仪和液相色谱—质谱仪 3、试剂 除下列试剂外，使用附录 2 所列试剂 磷酸盐缓冲液（pH6）：0.2 mol／L 磷酸二氢钾溶液中加入 0.2mol／L 磷酸氢 二钾溶液，调节至 pH6 4．标准品 吡蚜酮：含吡蚜酮 99％以上，熔点为 217℃ 5．试验溶液的制备 a 提取方法 ① 谷类和豆类 将样品粉碎，通过 420μm 的标准网筛后，称取其 10.0g，加入 20ml 水，放置 2 小时 加入 100mL 甲醇和 5ml 0.5mol／L 碳酸钾，搅拌 3 分钟后，用涂布 1cm 厚硅藻 土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中，取出滤纸上的残留物，加入 50ml 甲醇，搅 拌 3 分钟后，按上述同样操作，合并滤液于减压浓缩器中，45℃以下浓缩至约 5ml 将其移入 100mL 分液漏斗中，用 5mL 水洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，合并洗 液于上述分液漏斗中，再用 20mL 正己烷洗涤上述减压浓缩器的茄型瓶，合并洗 液于分液漏斗中，缓缓振荡 1 分钟后，静置，弃去正己烷层，水层中再加入 20mL 正己烷，按上述同样操作，弃去正己烷层，在将水层移入磨口减压浓缩器 中，用少量水洗涤分液漏斗，合并滤液于减压浓缩器中，45℃以下浓缩至约 5mL，加入 5mL 水。

② 水果和蔬菜 水果和蔬菜：准确称取约 1 kg 样品，必要时定量加入适量水，搅切混合均匀后， 称取相当于 20.0g 样品的量 加入 100mL 甲醇和 5mL 0.5mol／L 碳酸钾溶液（梅：3mol／L 碳酸钾溶液），搅拌 3 分钟，用涂布 1cm 厚硅藻土的滤纸抽滤于磨口减压浓缩器中，取冲滤纸 上的残留物，加入 50ml 甲醇，搅拌 3 分钟后，按上述同样操作，合并滤液于减 压浓缩器中，45℃以下浓缩至约 5ml，加入 5m 水 b、净化方法 ① 乙基甲硅烷基化硅胶柱和酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法 在乙基甲硅烷基化硅胶小柱（1000mg）中注入 10mL 甲醇，弃去流出液再注入 10mL 水，弃去流出液柱中注入 a 提取方法所得的溶液后，注入 10mL 水，弃 去流出液抽滤一分钟，除去水分另外一根酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱（500mg）中注入 10mL 甲醇，弃去流出液，在酰胺丙基甲硅烷基化硅胶小柱上 面连接上述的乙基甲硅烷基化硅胶小柱，注入 20mL 甲醇，收集流出液于磨口减 压浓缩器中，在 40℃以下除去甲醇，残留物中加入 5mL 乙醇：正己烷（1：4） 混合溶液溶解。

② 硅胶柱色谱法 在硅胶小柱（1000mg）中注入 10mL 正已烷，弃去流出液柱中注入①乙基甲硅 烷基化硅胶柱和酰胺丙基甲硅烷基化硅胶柱色谱法所得的溶液后，注入 10mL 乙 醇：正已烷（1：4）混合溶液，弃去流出液，再加入 20mL 乙醇：正已烷 （2：3）混合溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在 40℃以下除去乙醇和 正已烷，残留物中加入 5mL 水：甲醇（9：1）混合溶液溶解 ③ 十八烷基甲硅烷基化硅胶柱色谱法 十八烷基甲硅烷基化硅胶小柱（1000mg）中注入 10mL 甲醇，弃去流出液，再注 入 10mL 水，弃去流出液柱中注入②硅胶柱色谱法所得的溶液后，注入 15mL 水：甲醇（9：1）混合溶液，弃去流出液，再加入 10mL 水：甲醇（7：3）混合 溶液，收集流出液于磨口减压浓缩器中，在 45℃以下除去水和甲醇，残留物中 加入 2mL 水：甲醇（4：1）混合溶液溶解，此为试验溶液 6、操作方法 a 定性试验 按下列操作条件进行试验，试验结果应与标准品的一致 操作条件 柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径 5μm） 柱：内径 4.6mm、长 250mm 不锈钢管 柱温：40℃ 检测器：波长 298nm。

流动相：水：甲醇：磷酸盐缓冲液（pH6）（18：5：2）的混合溶液调整流速 使吡蚜酮在 10～12 分钟流出 b 定量试验 根据与 a 定性试验相同的试验条件所得的试验结果，峰高法或峰面积法定量 c 确证试验 按照下列操作条件，用液相色谱—质谱仪测定，试验结果应与标准品的一致 此外，必要时用峰高法或峰面积法进行定量 操作条件 柱填充剂：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径 5μm） 柱：内径 2.0mm、长 150mm 不锈钢管 柱温：40℃ 流动相：水：甲醇（4：1）混合溶液调整流速使吡蚜酮在 10～12 分钟流出 7．定量限 谷类、豆类：0.01 mg/kg ，水果、蔬菜：0.005 mg/kg8．注意事項 吡蚜酮必须在碱性条件下进行提取。