糖化血红蛋白精选PPT.ppt
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CompanyLOGO糖化血红蛋白糖化血红蛋白检验科检验科 目录目录 概述概述1 临床意义临床意义2 检测方法检测方法3糖化血红蛋白与血糖糖化血红蛋白与血糖4Company Logo 概述概述 糖化血红蛋白(GHb)是血红蛋白中2条B链的N端的颉氨酸与葡萄糖非酶化结合而成，其数值与血糖浓度成正比，且为不可逆的结合，随红细胞消亡而消失 什么是糖化血红蛋白？糖化血红蛋白可反映取血前糖化血红蛋白可反映取血前糖化血红蛋白可反映取血前糖化血红蛋白可反映取血前2 2～～～～3 3月血糖的平均水平月血糖的平均水平月血糖的平均水平月血糖的平均水平 Company Logo 概述概述HbAHbA（（95%95%～～97%97%））血红蛋白血红蛋白A AHbAHbA0 0（（90%90%））非糖化血红蛋白部分非糖化血红蛋白部分HbAHbA1 1（（5%5%～～7%7%））糖化血红蛋白糖化血红蛋白A A0 0（（αα2 2ββ2 2）） -HbA -HbA1a1a糖化血红蛋白糖化血红蛋白HbAHbA1 1ββ链链HbAHbA1a11a1果糖果糖-1-1，，6-6-二磷酸的糖化二磷酸的糖化HbAHbA1a21a2葡萄糖葡萄糖-6--6-磷酸的糖化磷酸的糖化 -HbA -HbA1b1bHbAHbA1 1带有未知反应部分带有未知反应部分 -HbA -HbA1c1c75%75%～～80%80%的的HbAHbA1 1，在，在ββ链链-N-N末端末端缬缬氨酸氨酸D-D-葡萄糖糖化葡萄糖糖化1-HbA1-HbA1c1c不稳定的不稳定的HbAHbA1c1c（醛亚肽）（醛亚肽）S-HbAS-HbA0 0稳定的稳定的HbAHbA1c1c（酮胺）（酮胺）HbAHbA2 2( (＜＜3%)3%)血红蛋白血红蛋白A A2 2（（αα2 2δδ2 2））HbFHbF( (＜＜1%)1%)血红蛋白血红蛋白F F（（αα2 2γγ2 2））糖化血红蛋白命名Company Logo 概述概述 HbA1HbA1是由是由HbA1aHbA1a、、HbA1bHbA1b、、HbA1cHbA1c组成，组成，其中其中HbA1cHbA1c的量最大，所以反映血糖水平时的量最大，所以反映血糖水平时一般用一般用HbA1cHbA1c表示。
每表示每1 1％的％的HbA1cHbA1c大致代表大致代表了了2mmol2mmol／／L L的血糖变化的血糖变化 国际糖尿病联盟推出了亚太糖尿病防治指南，国际糖尿病联盟推出了亚太糖尿病防治指南，明确糖化血红蛋白为国际公认的糖尿病监测金明确糖化血红蛋白为国际公认的糖尿病监测金标准标准, ,且应且应<6.5<6.5％ HbA1bHbA1bHbA1cHbA1cHbA1aHbA1aHbA1HbA1Company Logo 概述概述v 糖化血红蛋白比例取决于血糖浓度、血糖和血红蛋白的接触时间以糖化血红蛋白比例取决于血糖浓度、血糖和血红蛋白的接触时间以 及红细胞存活时间及红细胞存活时间v 除血红蛋白半衰期的影响外，糖化程度基本取决于血糖升高的程度除血红蛋白半衰期的影响外，糖化程度基本取决于血糖升高的程度 以及持续的时间糖化是不可逆的，所以血糖浓度越高、接触时间以及持续的时间糖化是不可逆的，所以血糖浓度越高、接触时间 越长，糖化血红蛋白的比例就会越高越长，糖化血红蛋白的比例就会越高Company Logo 临床意义临床意义糖化血红蛋白的特点决定了他在糖尿病监测中有很大意义：糖化血红蛋白的特点决定了他在糖尿病监测中有很大意义：（（1 1）与血糖值相平。
与血糖值相平 血糖越高，糖化血红蛋白就越高，所以能反映血糖的控制水平血糖越高，糖化血红蛋白就越高，所以能反映血糖的控制水平2 2）生成缓慢生成缓慢 由于血糖是不断波动的，每次抽血只能反映当时的血糖水平，而糖化由于血糖是不断波动的，每次抽血只能反映当时的血糖水平，而糖化 血红蛋白是逐渐形成的，短暂的血糖升高不会引起糖化的升高血红蛋白是逐渐形成的，短暂的血糖升高不会引起糖化的升高; ;反之反之 亦然故不受餐前餐后影响故不受餐前餐后影响Company Logo 临床意义临床意义（（3 3）一旦生成不易分解）一旦生成不易分解 糖化血红蛋白相当稳定，不易分解，所以它虽然不能反映短期内糖化血红蛋白相当稳定，不易分解，所以它虽然不能反映短期内 的血糖波动，却能较好的反映较长时间的血糖控制程度的血糖波动，却能较好的反映较长时间的血糖控制程度120120天天 内血糖的平均水平）内血糖的平均水平）（（4 4）较少受血红蛋白的影响）较少受血红蛋白的影响 糖化血红蛋白是指其在总血红蛋白中的比例，所以不受血红蛋白糖化血红蛋白是指其在总血红蛋白中的比例，所以不受血红蛋白 水平的影响。
水平的影响Company Logo 临床意义临床意义 糖化血红蛋白增高对人体的影响是多方面的，它可改变红细胞对氧糖化血红蛋白增高对人体的影响是多方面的，它可改变红细胞对氧的亲和力，使组织与细胞缺氧，加速心脑血管并发症的形成；可引起肾的亲和力，使组织与细胞缺氧，加速心脑血管并发症的形成；可引起肾小球增厚，诱发糖尿病肾病小球增厚，诱发糖尿病肾病(DN)(DN)；还可引起血脂和血粘滞度增高，是心；还可引起血脂和血粘滞度增高，是心血管病发生的重要因素因此，血管病发生的重要因素因此，监测糖化血红蛋白不论对糖尿病患者疾监测糖化血红蛋白不论对糖尿病患者疾监测糖化血红蛋白不论对糖尿病患者疾监测糖化血红蛋白不论对糖尿病患者疾病控制情况，并发症的预测情况，还是糖尿病病人的筛选等方面都有重病控制情况，并发症的预测情况，还是糖尿病病人的筛选等方面都有重病控制情况，并发症的预测情况，还是糖尿病病人的筛选等方面都有重病控制情况，并发症的预测情况，还是糖尿病病人的筛选等方面都有重要的意义要的意义要的意义要的意义 ！！！！Company Logo 临床意义临床意义 美国美国1 1型糖尿病控制及并发症试验型糖尿病控制及并发症试验(DCCT)(DCCT)和英国和英国2 2型糖尿病控制与并发症型糖尿病控制与并发症(UKPDS)(UKPDS)均把糖化血红蛋白作为糖尿病的一个重要评价指南，且都充分肯定了强均把糖化血红蛋白作为糖尿病的一个重要评价指南，且都充分肯定了强化治疗在阻止血管并发症发生、发展的重要作用。
化治疗在阻止血管并发症发生、发展的重要作用 区别应激性血糖增高和妊娠区别应激性血糖增高和妊娠糖尿病糖尿病(GDM)(GDM)中的检测意义中的检测意义 有助于糖尿病慢性有助于糖尿病慢性并发症的认识并发症的认识 是糖尿病患者血糖总体是糖尿病患者血糖总体控制情况的指标控制情况的指标 对判断糖尿病的不同对判断糖尿病的不同阶段有一定的意义阶段有一定的意义 早期发现糖尿病早期发现糖尿病 指导对血糖的调整指导对血糖的调整 糖化血糖化血红蛋白红蛋白Company Logo 临床意义临床意义 糖化血红蛋白的检测对糖尿病患者的整体情况有糖化血红蛋白的检测对糖尿病患者的整体情况有糖化血红蛋白的检测对糖尿病患者的整体情况有糖化血红蛋白的检测对糖尿病患者的整体情况有很重要的意义人们不能仅局限在对血糖的认识上来很重要的意义人们不能仅局限在对血糖的认识上来很重要的意义人们不能仅局限在对血糖的认识上来很重要的意义人们不能仅局限在对血糖的认识上来管理血糖，应综合糖化血红蛋白才能更好的控制血糖，管理血糖，应综合糖化血红蛋白才能更好的控制血糖，管理血糖，应综合糖化血红蛋白才能更好的控制血糖，管理血糖，应综合糖化血红蛋白才能更好的控制血糖，预防并发症的发生预防并发症的发生预防并发症的发生预防并发症的发生 ！！！！Company Logo 检测方法检测方法糖化血红蛋白结果糖化血红蛋白结果阳离子交阳离子交换色谱法换色谱法免疫分析免疫分析 电泳电泳亲和层析亲和层析检测方法学Company Logo 检测方法检测方法检测方法检测方法方法方法原理原理分析物分析物评评 估估柱色谱法柱色谱法( (巨柱巨柱) ) 离子交换色谱法离子交换色谱法HbAHbA1a1a，，HbAHbA1b1b，，HbAHbA1c1c醛亚胺被部分测定醛亚胺被部分测定bFbF、、HbSHbS、、HbCHbC、乙醛副产品、乙醛副产品产生干扰产生干扰微柱微柱离子交换色谱法离子交换色谱法HbAHbA1 1受受HbHb变异体干扰、对温度和变异体干扰、对温度和pHpH敏感敏感HPLCHPLC离子交换色谱法离子交换色谱法HbAHbA1a1a，，HbAHbA1b1b，，HbAHbA1c1c受受HbHb变异体干扰、对温度和变异体干扰、对温度和pHpH敏感敏感FPLCFPLC离子交换色谱法离子交换色谱法HbAHbA1a1a，，HbAHbA1b1b，，HbAHbA1c1c醛亚胺醛亚胺分离分离HbAHbA1c1c和醛亚胺的效果最好；参考方法和醛亚胺的效果最好；参考方法硫代巴比妥酸硫代巴比妥酸水解和酮酸己糖水解和酮酸己糖比色测定比色测定HbAHbA1c1c仅检测酮胺形式，醛亚胺被消除；也和硅酸反仅检测酮胺形式，醛亚胺被消除；也和硅酸反应应电泳电泳电渗电渗HbAHbA1c1c醛亚胺干扰醛亚胺干扰等电聚焦等电聚焦pH5pH5～～6.56.5HbAHbA1c1c醛亚胺醛亚胺可检测异常血红蛋白可检测异常血红蛋白亲和层析色谱法亲和层析色谱法 苯基硼酸盐柱苯基硼酸盐柱总糖化血红蛋白总糖化血红蛋白HbFHbF、、HbSHbS、、HbCHbC和翻译后修饰物不干扰和翻译后修饰物不干扰免疫化学方法免疫化学方法特异的抗体（单特异的抗体（单克隆，多克隆）克隆，多克隆）的酶免法和免疫的酶免法和免疫比浊法比浊法HbAHbA1c1c，，HbAHbA2c2cHbHb变异体不干扰，能检测糖化变异体不干扰，能检测糖化HbAHbA2 2,HbS,HbS1c1c, ,但不但不能检测能检测HbFHbF1c1cCompany Logo 检测方法检测方法检测方法检测方法糖化血红蛋白在年龄或性别上的相关性并不明显，参考范围取决于分析方法或试剂糖化血红蛋白在年龄或性别上的相关性并不明显，参考范围取决于分析方法或试剂。
方方 法法商商 标标 名名 称称参参 数数参考区间（参考区间（% %））亲和层析亲和层析GHb IMxGHb IMxGHb HbAGHb HbA1c1c****GHb 4.8GHb 4.8～～7.87.8，，HbAHbA1c1c 4.4 4.4～～6.46.4亲和层析亲和层析Glyc-AffinGlyc-AffinGHbGHbGHb 4.0GHb 4.0～～8.08.0亲和层析亲和层析BM HbABM HbA1 1HbAHbA1 1HbAHbA1 1 5.0 5.0～～8.08.0亲和层析亲和层析Glyc-HbGlyc-HbGHbGHbGHb 5.0GHb 5.0～～8.08.0亲和层析（微柱）亲和层析（微柱）HbAHbA1 1 微柱试验微柱试验HbAHbA1 1HbAHbA1 1 3.43.4～～6.16.1琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳DIATRACDIATRACHbAHbA1c1cHbAHbA1c 1c 3.33.3～～5.65.6免疫比浊，多克隆抗体免疫比浊，多克隆抗体TinaQuant HbATinaQuant HbA1c1cHbAHbA1c1cHbAHbA1c 1c 4.34.3～～5.85.8* *，，HbAHbA1c1c 3.6 3.6～～5.35.3* *EIAEIA，单克隆抗体，单克隆抗体DAKO HbADAKO HbA1c1cHbAHbA1c1cHbAHbA1c 1c 2.82.8～～4.94.9* * ，， HbAHbA1c1c 4.5 4.5～～5.95.9* *免疫比浊，单克隆抗体免疫比浊，单克隆抗体DCA2000DCA2000HbAHbA1c1cHbAHbA1c 1c 4.24.2～～6.36.3免疫比浊，单克隆抗体免疫比浊，单克隆抗体UnimateUnimateHbAHbA1c1cHbAHbA1c 1c 4.54.5～～5.75.7离子交换色谱法离子交换色谱法( (微柱微柱) )HbAHbA1c1c微柱试验微柱试验HbAHbA1c1cHbAHbA1c 1c 4.24.2～～5.95.9HPLCHPLC离子交换色谱法离子交换色谱法DIAMATDIAMATHbAHbA1 1 HbA HbA1c1cHbAHbA1 1 5.15.1～～7.3 7.3 ，，HbAHbA1c1c 4.3 4.3～～6.16.1HPLCHPLC离子交换色谱法离子交换色谱法HS-8HS-8HbAHbA1 1 HbA HbA1c1cHbAHbA1 1 5.05.0～～7.87.8，，HbAHbA1c1c 4.4 4.4～～5.75.7HPLCHPLC离子交换色谱法离子交换色谱法L-9100L-9100HbAHbA1 1 HbA HbA1c1cHbAHbA1 1 4.54.5～～6.06.0，，HbAHbA1c1c 3.4 3.4～～4.74.7数值来自包装说明书或参考文献，数值来自包装说明书或参考文献，* *有不同的标准品；有不同的标准品；****““标准血红蛋白标准血红蛋白””；；GHbGHb：总糖化血红蛋白：总糖化血红蛋白Company Logo 检测方法检测方法1目前没有一个认可目前没有一个认可的参照物的参照物2有基于特异血红蛋有基于特异血红蛋白白ββ链链N N末端残基末端残基的的HbA1cHbA1c候选参考候选参考方法方法3用用内内切切酶酶酶酶解解Gluc-CGluc-C完完整整血血红红蛋蛋白白分分子子的的方方法法已已经经被被优优化化并并用用于于获获得得HbA1cHbA1c和和HbAoHbAo的的ββ链链N-N-末末端端六六肽肽。
这这些些肽肽已已通通过过反反相相HPLCHPLC分分离离并并通通过过电电离质谱分析法定量离质谱分析法定量糖化血红蛋白测定的标准化糖化血红蛋白测定的标准化Company Logo 检测方法检测方法糖化血红蛋白室间质量控制糖化血红蛋白室间质量控制因为没有参考方法因为没有参考方法或国际认可的参考或国际认可的参考物可用，靶值往往物可用，靶值往往根据不同的测定方根据不同的测定方法和（或）制造商法和（或）制造商提供的值或同一分提供的值或同一分析系统组模式获得析系统组模式获得对于糖化血红蛋对于糖化血红蛋白的测定，许多白的测定，许多国内和国际的实国内和国际的实验室调查组织提验室调查组织提供了室间质量控供了室间质量控制制Company Logo 检测方法检测方法疾病对糖化血红蛋白测定的影响疾病对糖化血红蛋白测定的影响药药物物治治疗疗药药物物和和化化学学物物血血液液学学疾疾病病肾肾脏脏功功能能不不全全不不稳稳定定的的糖糖化化血血红红蛋蛋白白（（醛醛亚亚胺胺））Company Logo 糖化血红蛋白与血糖糖化血红蛋白与血糖血糖严格控制的患者血糖严格控制的患者(HbA1c<8%)(HbA1c<8%)可使：可使：●●视网膜病变下降视网膜病变下降7676％％ ● ●肾脏病变下降肾脏病变下降5656％％ ● ●神经系统病变下降神经系统病变下降6060％％ ● ●心血管病变下降心血管病变下降4141％％ ● ●Hb1AcHb1Ac每下降每下降1 1％可导致％可导致 微血管并发症下降微血管并发症下降3535％％Company Logo 糖化血红蛋白与血糖糖化血红蛋白与血糖HbA1c 平均血糖水平平均血糖水平%水平水平md/dLmmol/L14.0 13.5 13.0 12.5 12.0 11.5 11.0 显著升高显著升高必须必须 采取相关措采取相关措施施 360 330 300 270 20 18.3 16.7 15 10 9.5 9.0 8.5 升高升高应采取应采取 有关措施有关措施 240 210 13.3 11.7 8.0 7.5 7.0 轻度升高轻度升高 糖尿病有效控制糖尿病有效控制的目标的目标 180 15 10 8.3 6.5 6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 正常范围正常范围 120 90 60 6.7 5 3.3 HbA1c HbA1c 与平均血糖水平的关系与平均血糖水平的关系 Company Logo 糖化血红蛋白可以稳定可靠的反映出检测前糖化血红蛋白可以稳定可靠的反映出检测前120120天内的平天内的平均血糖水平，且受抽血时间，是否空腹，是否使用胰岛素等均血糖水平，且受抽血时间，是否空腹，是否使用胰岛素等因素干扰不大，是国际公认的糖尿病监控因素干扰不大，是国际公认的糖尿病监控““金标准金标准金标准金标准””！！Company Logo CompanyLOGO CompanyLOGOYMAod1ZOCqe3!PDsg4%RFti6&SHvj7(UIxl9)WKymb+XMAoc1ZNBqe2!PDrg4$QFth6&SGvj7*UIwl9)VKyma+XLAoc0ZNBpe2#PDrf4$QEth5&SGuj7*TIwk8)VJyma-XLznc0YNBpd2#OCrf3$QEsh5%RGui7*THwk8(VJxma-WLznb0YMBpd1#OCqf3!QEsg5%RFui6*THvk8(UJxl9-WKznb+YMAod1ZOCqe3!PDsg4%RFti6&SHvj8(UIxl9)WKynb+XMAoc1ZNCqe2!PDrg4$RFth6&SGvj7(UIwl9)VKyma+XLAoc0ZNBpe2#PDrf4$QEth5&SGuj7*TIwk9)VJyma-XLzoc0YNBpd2#ODrf3$QEsh5%SGui7*THwk8)VJxma-WLznb0YMBpd1#OCqf3!QEsg5%RFui6*THvk8(UJxla-WKznb+YMApd1ZOCqe3!PEsg4%RFti6&THvj8(UIxl9-WKynb+XMAoc1ZNCqe2!PDrg4$RFth6&SGvj7(UIwl9)VKymb+XLAoc0ZNBqe2#PDrf4$QFth5&SGuj7*UIwk9)VJyma-XLzoc0YNBpd2#ODrf3$QEsh5%SGui7*THwk8)VJxma-WLznc0YMBpd1#OCrf3!QEsg5%RGui6*THvk8(VJxla-WKznb+YMApd1ZOCqe3!PEsg4%RFti6&THvj8(UIxl9-WKynb+XMAod1ZNCqe2!PDsg4$RFth6&SHvj7(UIwl9)WKymb+XLAoc0ZNBqe2#PDrf4$QFth5&SGuj7*UIwk9)VJyma+XLzoc0YNBpe2#ODrf3$QEth5%SGui7*TIwk8)VJxma-XLznc0YMBpd1#OCrf3!QEsg5%RGui6*THvk8(VJxla-WKznb0YMApd1ZOCqf3!PEsg4%RFui6&THvj8(UJxl9-WKynb+YMAod1ZNCqe2!PDsg4$RFth6&SHvj7(UIwl9)WKymb+XLAoc1ZNBqe2#PDrg4$QFth5&SGvj7*UIwk9)VKyma+XLzoc0ZNBpe2#ODrf3$QEth5%SGui7*TIwk8)VJxma-XLznc0YMBpd2#OCrf3!QEsh5%RGui6*THwk8(VJxla-WLznb0YMApd1#OCqf3!PEsg4%RFui6&THvj8(UJxl9-WKynb+YMAod1ZNCqe3!PDsg4$RFti6&SHvj7(UIxl9)WKymb+XMAoc1ZNBqe2!PDrg4$QFth5&SGvj7*UIwk9)VKyma+XLzoc0ZNBpe2#ODrf4$QEth5%SGuj7*TIwk8)VJyma-XLznc0YNBpd2#OCrf3$QEsh5%RGui6*THwk8(VJxla-WLznb0YMApd1#OCqf3!PEsg5%RFui6&THvk8(UJxl9-WKznb+YMAod1ZOCqe3!PDsg4%RFti6&SHvj7(UIxl9)WKymb+XMAoc1ZNBqe2!PDrg4$QFth6&SGvj7*UIwl9)VKyma+XLAoc0ZNBpe2#PDrf4$QEth5&SGuj7*TIwk8)VJyma-XLznc0YNBpd2#OCrf3$QEsh5%RGui7*THwk8(VJxma-WLznb0YMBpd1#OCqf3!QEsg5%RFui6*THvk8(UJxl9-WKznb+YMAod1ZOCqe3!PDsg4%RFti6&SHvj8(UIxl9)WKynb+XMAoc1ZNCqe2!PDrg4$RFth6&SGvj7*UIwl9)VKyma+XLAoc0ZNBpe2#PDrf4$QEth5&SGusg4%RFui6&THvj8(UJxl9-WKynb+YMAod1ZNCqe2!PDsg4$RFth6&SHvj7(UIwl9)WKymb+XLAoc1ZNBqe2#PDrg4$QFth5&SGvj7*UIwk9)VKyma+XLzoc0ZNBpe2#ODrf3$QEth5%SGui7*TIwk8)VJxma-XLznc0YMBpd2#OCrf3!QEsh5%RGui6*THwk8(VJxla-WLznb0YMApd1#OCqf3!PEsg4%RFui6&THvj8(UJxl9-WKynb+YMAod1ZNCqe3!PDsg4$RFti6&SHvj7(UIxl9)WKymb+XMAoc1ZNBqe2!PDrg4$QFth5&SGvj7*UIwk9)VKyma+XLzoc0ZNBpe2#ODrf4$QEth5%SGuj7*TIwk8)VJyma-XLznc0YNBpd2#OCrf3$QEsh5%RGui6*THwk8(VJxla-WLznb0YMApd1#OCqf3!PEsg5%RFui6&THvk8(UJxl9-WKznb+YMAod1ZOCqe3!PDsg4%RFti6&SHvj7(UIxl9)WKymb+XMAoc1ZNBqe2!PDrg4$QFth6&SGvj7*UIwl9)VKyma+XLAoc0ZNBpe2#PDrf4$QEth5%SGuj7*TIwk8)VJyma-XLznc0YNBpd2#OCrf3$QEsh5%RGui7*THwk8(VJxma-WLznb0YMBpd1#OCqf3!QEsg5%RFui6&THvk8(UJxl9-WKznb+YMAod1ZOCqe3!PDsg4%RFti6&SHvj8(UIxl9)WKynb+XMAoc1ZNCqe2!PDrg4$RFth6&SGvj7*UIwl9)VKyma+XLAoc0ZNBpe2#PDrf4$QEth5&SGuj7*TIwk9)VJyma-XLzoc0YNBpd2#ODrf3$QEsh5%SGui7*THwk8(VJxma-WLznb0YMBpd1#OCqf3!QEsg5%RFui6*THvk8(UJxla-WKznb+YMApd1ZOCqe3!PEsg4%RFti6&THvj8(UIxl9)WKynb+XMAoc1ZNCqe2!PDrg4$RFth6&SGvj7(UIwl9)VKymb+XLAoc0ZNBqe2#PDrf4$QFth5&SGuj7*UIwk9)VJyma-XLzoc0YNBpd2#ODrf3$QEsh5%SGui7*THwk8)VJxma-WLznc0YMBpd1#OCrf3!QEsg5%RGui6*THvk8(VJxla-WKznb+YMApd1ZOCqe3!PEsg4%RFti6&THvj8(UIxl9-WKynb+XMAod1ZNCqe2!PDsg4$RFth6&SHvj7(UIwl9)WKymb+XLAoc0ZNBqe2#PDrf4$Qf4$QFth5&SGuj7*UIwk9)VJyma+XLzoc0YNBpd2#ODrf3$QEsh5%SGui7*THwk8)VJxma-WLznc0YMBpd1#OCrf3!QEsg5%RGui6*THvk8(VJxla-WKznb0YMApd1ZOCqe3!PEsg4%RFti6&THvj8(UIxl9-WKynb+XMAod1ZNCqe2!PDsg4$RFth6&SHvj7(UIwl9)WKymb+XLAoc1ZNBqe2#PDrf4$QFth5&SGuj7*UIwk9)VJyma+XLzoc0YNBpe2#ODrf3$QEth5%SGui7*TIwk8)VJxma-XLznc0YMBpd2#OCrf3!QEsg5%RGui6*THvk8(VJxla-WKznb0YMApd1ZOCqf3!PEsg4%RFui6&THvj8(UJxl9-WKynb+YMAod1ZNCqe3!PDsg4$RFth6&SHvj7(UIwl9)WKymb+XLAoc1ZNBqe2#PDrg4$QFth5&SGvj7*UIwk9)VKyma+XLzoc0ZNBpe2#ODrf4$QEth5%SGui7*TIwk8)VJxma-XLznc0YMBpd2#OCrf3!QEsh5%RGui6*THwk8(VJxla-WLznb0YMApd1#OCqf3!PEsg4%RFui6&THvj8(UJxl9-WKynb+YMAod1ZNCqe3!PDsg4$RFti6&SHvj7(UIxl9)WKymb+XMAoc1ZNBqe2!PDrg4$QFth5&SGvj7*UIwk9)VKyma+XLzoc0ZNBpe2#ODrf4$QEth5%SGuj7*TIwk8)VJyma-XLznc0YNBpd2#OCrf3$QEsh5%RGui6*THwk8(VJxla-WLznb0YMApd1#OCqf3!PEsg5%RFui6&THvk8(UJxl9-WKznb+YMAod1ZOCqe3!PDsg4%RFti6&SHvj7(UIxl9)WKymb+XMAoc1ZNc1ZNBqe2!PDrg4$QFth6&SGvj7*UIwk9)VKyma+XLzoc0ZNBpe2#ODrf4$QEth5%SGuj7*TIwk8)VJyma-XLznc0YNBpd2#OCrf3$QEsh5%RGui7*THwk8(VJxla-WLznb0YMApd1#OCqf3!PEsg5%RFui6&THvk8(UJxl9-WKznb+YMAod1ZOCqe3!PDsg4%RFti6&SHvj8(UIxl9)WKymb+XMAoc1ZNBqe2!PDrg4$QFth6&SGvj7*UIwl9)VKyma+XLAoc0ZNBpe2#PDrf4$QEth5&SGuj7*TIwk9)VJyma-XLznc0YNBpd2#OCrf3$QEsh5%RGui7*THwk8(VJxma-WLznb0YMBpd1#OCqf3!QEsg5%RFui6*THvk8(UJxla-WKznb+YMAod1ZOCqe3!PDsg4%RFti6&SHvj8(UIxl9)WKynb+XMAoc1ZNCqe2!PDrg4$RFth6&SGvj7(UIwl9)VKymb+XLAoc0ZNBpe2#PDrf4$QEth5&SGuj7*TIwk9)VJyma-XLzoc0YNBpd2#ODrf3$QEsh5%SGui7*THwk8)VJxma-WLznc0YMBpd1#OCqf3!QEsg5%RFui6*THvk8(UJxla-WKznb+YMApd1ZOCqe3!PEsg4%RFti6&THvj8(UIxl9-WKynb+XMAod1ZNCqe2!PDrg4$RFth6&SGvj7(UIwl9)VKymb+XLAoc0-WLznb0YMApd1#OCqf3!PEsg5%RFui6&THvj8(UJxl9-WKynb+YMAod1ZNCqe3!PDsg4$RFti6&SHvj7(UIxl9)WKymb+XMAoc1ZNBqe2!PDrg4$QFth6&SGvj7*UIwk9)VKyma+XLzoc0ZNBpe2#ODrf4$QEth5%SGuj7*TIwk8)VJyma-XLznc0YNBpd2#OCrf3$QEsh5%RGui7*THwk8(VJxla-WLznb0YMApd1#OCqf3!PEsg5%RFui6&THvk8(UJxl9-WKznb+YMAod1ZOCqe3!PDsg4%RFti6&SHvj8(UIxl9)WKymb+XMAoc1ZNBqe2!PDrg4$QFth6&SGvj7*UIwl9)VKyma+XLAoc0ZNBpe2#PDrf4$QEth5&SGuj7*TIwk9)VJyma-XLznc0YNBpd2#OCrf3$QEsh5%RGui7*THwk8(VJxma-WLznb0YMBpd1#OCqf3!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