超声波提取植物总黄酮.doc

1实验一 植物材料中总黄酮分离提取 --超声波提取植物总黄酮一、实验目的为充分利用天然植物资源，避免资源的浪费，探讨植物总黄酮的提取及鉴别方法 二、实验原理采用超声波乙醇浸提法从植物材料（黄芩、银杏叶、枇杷叶）中提取黄酮类物质，并用分光光度法测定含量利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响三、实验材料原料：黄芩、银杏叶、枇杷叶试剂：95% 乙醇 AR；无水乙醇 AR；亚硝酸钠 AR；硝酸铝 AR；氢氧化钠AR；芦丁标准品、蒸馏水其它：滤纸、吸管、容量瓶、漏斗、试管四、实验仪器超声波清洗器（超声工作频率 40kHz） ；紫外可见分光光度计；抽滤机电炉子水浴锅五、实验步骤（一）试剂配制a.硝酸铝（10%）：称取20 g硝酸铝溶于蒸馏水中，定容至 200 mL，混匀，贴标签备用b.亚硝酸钠（5%）：称取10 g亚硝酸钠溶于蒸馏水中，定容至200 mL，混匀，贴标签备用c.芦丁标准溶液（ 2 mg/ml）：称取芦丁2 g于1000 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并定容至刻度，混匀，贴标签备用。

d.乙醇溶液（60%）：600ml无水乙醇，溶于蒸馏水，定容至1000 ml容量瓶中，混匀，贴标签备用e.氢氧化钠溶液（ 4%）： 40 g氢氧化钠溶于水，定容至1000 ml容量瓶中，混匀，贴标签备用二）总黄酮成分提取 取干燥植物材料（黄芩、银杏叶、香樟叶） ，粉碎称取约 5 g，加 80 ml 95%乙醇，浸泡 20min，超声波提取 30 min，抽滤滤渣再加 80 ml 95 %乙醇，2浸泡 20min，再次超声波提取 30 min，抽滤，合并两次滤液，减压回收（水浴加热）乙醇至滤液仅剩 5～7 ml 为止，放置 100 ml 容量瓶中，用 60%乙醇稀释至刻度，得样品液三）定量实验-总黄酮的含量测定1. 波长的选择取样品液适量，在 0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在 420～700 nm 波长范围测定络合物的吸光度，络合物于 510 nm 波长处有最大吸收，故测定时选用此波长2. 标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（2 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml 于 10 ml 容量瓶中，分别加入 5%亚硝酸钠溶液 0.40 ml，摇匀，静置 6 min；再加 10%硝酸铝溶液 0.40 ml，摇匀，静置 6 min；再加 4%氢氧化钠溶液 4.00 ml，用 60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置 15 min，以试剂作空白参比液，于 510 nm 处测定吸光度。

管号 1 2 3 4 5 6 7芦丁 0.00 0.50 1.00 2.00 3.00 4.00 5.00亚硝酸钠 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40硝酸铝 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40氢氧化钠 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.0060%乙醇 5.20 4.70 4.20 3.20 2.20 1.20 0.20浓度 0.00 0.10 0.20 0.40 0.60 0.80 1.003. 提取物含量的测定精密吸取样品液 1 ml，置 10 ml 容量瓶，按标准曲线的制备方法，测定其吸光度 A，用标准曲线法计算样品中总黄酮的含量（ mg/ml）管号 1 黄芩 1 黄芩 2 银杏 1 银杏 2 香樟 1 香樟 2样品液 0.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00亚硝酸钠 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40硝酸铝 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40 0.40氢氧化钠 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.00 4.0060%乙醇 5.20 4.20 4.20 4.20 4.20 4.20 4.20六、实验讨论利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。

超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的此过程是一个物理过程，浸提过程中无化学反应，被浸提的生物活性物质在一定时间内保持不变七、思考题1、黄酮类化合物的生理作用？32、在本实验中，哪些因素会影响测定结果？。