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【最新word论文】Survivin和COX-2在膀胱移行细胞癌中的表达【临床医学专业论文】.doc

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    • 1Survivin 和 COX-2 在膀胱移行细胞癌中的表达【摘要】 目的 探讨 Survivin和 COX-2在人膀胱移行细胞癌(BTCC)中的表达及其临床意义方法 采用 S-P免疫组化技术分别观察 40例 BTCC和 10例正常膀胱组织标本中 Survivin和 COX-2的表达,分析其表达水平与 BTCC临床病理参数之间的关系结果 Survivin和 COX-2基因在 BTCC中的表达与在正常膀胱黏膜比较差异均有统计学意义(均为 P<0.01)不同临床分期和病理分级间Survivin和 COX-2表达的差异具有统计学意义(P<0.05 或 P<0.01)结论 Survivin和 COX-2的高表达是 BTCC预后不良的指征,有望成为 BTCC预后不良的独立性指标 【关键词】 移行膀胱癌;Survivin;COX-2Abstract: Objective To explore the expression of Survivin and COX-2 in human bladder transitional cell carcinoma(BTCC) and the biological significance. Methods Immunohistochemical S-P method and RT-PCR、western plot was used to detect the expression of Survivin and COX-2 in 40 cases with BTCC and 10 controls with normal bladder mucosa. Results The expression of the Survivin and COX-2 in human BTCC was higher than that in normal bladder mucosa (P<0. 01). There was significant difference in the expression of Survivin and COX-2 among different clinical stages (P<0.05). The significant difference in the expression of Survivin and COX-2 among the different pathological grades was found (P<0.05 or P<0.01). Conclusion The high expression of Survivin and COX-2 could be regarded as an independent indication for evaluating the prognosis in BTCC.Key words: bladder neoplasms;survivin;COX-2膀胱移行细胞癌(BTCC)的浸润和转移进程复杂,与多种癌基因和抑癌基因的表达、调控以及细胞凋亡有关。

      Survivin 基因是近年来发现的凋亡抑制基因;COX-2基因是与抑制肿瘤转移相关的基因,它们对多种肿瘤的转移有调控作用本研究应用 SP 免疫组化方法和 RT-PCR检测了 40例膀胱癌和 10例正常膀胱组织标本的 Survivin和 COX-2的表达,探讨其表达与 BTCC临床分期、病理分级的相互关系,为临床正确估计预后和治疗提供依据1 材料与方法1.1 研究对象宁夏医学院附属医院泌尿外科 2006年 1月—2006 年 12月电切和开放手术治疗的 BTCC患者 40 例,其中男 20例,女 20例,年龄 31~80 岁,平均 62岁2经尿道膀胱肿瘤电切(TURBt)20 例,膀胱部分切除 10例,膀胱全切 10例病理分级按 WHO法,其中 G1级 15例,G2 级 15例,G3 级 10例;肿瘤分期按 UICC TNM 标准,其中 T1 期 12例,T2 期 15例,T3 期 13例组织学分类:40 例均为BTCC从 10例行开放手术的前列腺增生(BPH)患者取膀胱组织标本作对照1.2 染色方法所有标本均经 10%的多聚甲醛固定、石蜡包埋并进行连续超薄切片,分别作苏木精 2伊红(HE)染色、免疫组织化学 SP染色。

      所有标本均由两位病理学专家确诊所有一抗均购自 Maixin公司,SP 试剂盒由福州迈新生物技术开发有限公司提供所有操作严格按试剂盒说明进行石蜡切片脱蜡,水化后行免疫组织化学染色抗体工作浓度 Survivin为 1∶100,COX-2 为 1∶200,最后用二氨基联苯氨(DAB)染色,苏木精复染以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作为阴性对照,已知阳性标本作为阳性对照,阳性标本显色后,立即全部终止反应1.3 结果判断Survivin、COX-2 阳性表达为胞浆成棕黄色在切片阳性细胞区随机挑选10个高倍视野共计数 1000个肿瘤细胞,按照文献[1]方法,在高倍镜下对染色作如下评分:①染色深浅:无着色为 0分,淡黄色为 1分,棕黄色为 2分,棕褐色为 3分;②染色细胞计数:没有细胞染色为 0分,1%~10%为 1分,11 %~33 %为 2分,34 %~66 %为 3分,>66 %为 4分两项结果相加<2 分为阴性(-),2~3 分为弱阳性(+),4~5 分为中度阳性(6),6~7 分为强阳性(7)1.4 RT-PCR检测 Survivin、COX-2 mRNA 的表达分别收集培养的各组细胞,按 Trizol试剂盒说明书提取总 RNA,取 1μg总 RNA反转录合成 cDNA,再取 20μL 反转录产物进行 PCR循环。

      Survivin 引物序列:上游 5′-ACAACCAAACCTCACACTACTG-3′,下游 5′-ATAGATCCCATTACAGACAGCG-3′COX-2 引物序列:上游 5′- GGATTTTTATTTAAGAGGAGTAGGT -3′,下游 5′-CTACCAAAATTTTTATTATAATCCC -3′Survivin 产物长度 439bp,COX-2 产物长度 468bp,94℃变性 1min,60℃复性 30s,72℃延伸 40s,共 35个循环,末次循环 72℃延伸 10 minGAPDH 引物序列:上游 5′-TCACCATCTTCCAGGAGCGAG-3′,下游 5′-TGTCGCTGTTGAAGTCAGAG-3′,产物长度 648bp,94℃变性 1 min,55℃复性30s,72℃延伸 40s,共 30个循环,末次循环 72℃延伸 10min反应结束后取反应产物 5μL 进行 20g/L琼脂糖凝胶电泳,溴化乙锭染色,UVP 型凝胶图像分析系统做图,以各组目的基因与 GAPDH基因灰度的比值代表 Survivin、COX-2 mRNA的表达量1.5 数据分析各样本测定值以平均值±标准差表示,以统计学软件 SPSS 11.0进行分析,采用 Fisher确切概率法检验分析 Survivin和 COX-2在膀胱癌组及正常组织中表3达的关系;采用 R×C列联表扩检验分析 BTCC组织中 survivin和 COX-2的表达与其临床病理特征之间的关系;采用 Pearosn相关性检验分析 BTCC组织中Survivin和 COX-2表达之间的相关性。

      以 a=0.05作为统计学检验的显著性水准2 结果2.1 BTCC及对照膀胱组织中 Survivin、COX-2 蛋白表达对照膀胱组织中 Survivin、COX-2 均无阳性表达,在 BTCC中 Survivin为胞浆和胞核成棕黄色(图 1,见封 4),COX-2 为细胞胞浆和胞膜染成棕黄色(图2,见封 4)Survivin、COX-2 在 40例 BTCC组织中阳性表达分别为 29例(72.5 %)、26例(65.0 %),在 10例正常膀胱组织中为 0例,两者比较差异有统计学意义(P<0.01)在不同临床分期中 Survivin、COX-2 表达差异均有统计学意义(P<0.05);在不同病理分级中阳性表达差异均有统计学意义(P<0.05 或P<0.01),见表 1表 1 Survivin 、COX-2 在 BTCC 中的表达(略)2.2 Survivin、COX-2 mRNA 表达以各组目的基因与 GAPDH基因灰度的比值代表 Survivin mRNA的表达量BTCC组织内 Survivin、COX-2 mRNA表达均显著增加,两组间差异有统计学意义(P<0.05),见表 2表 2 BTCC组织 Survivin、COX-2 表达量(略)3 讨论Survivin 是新近发现的一种细胞凋亡抑制蛋白,它具有抑制细胞凋亡与调节细胞周期两种功能,在大多数恶性肿瘤中都有表达,而在除胚胎期外的正常组织中不表达[2] 。

      Survivin 可抑制 Caspase级联反应下游的 Caspase3、7,发挥其抗凋亡作用[3] ,其用于 BTCC的诊断已引起了广泛关注本研究发现,在40例 BTCC中,Survivin 的阳性表达率为 72.5%,且与肿瘤的病理分级呈正相关,这与 Gazzaniga等[4]研究结果一致COX-2是一种膜结合的分子量为 71ku的糖蛋白,具有环氧合酶和过氧化物合成酶的双重功能[5] COX-2 在正常组织中不表达或极微量表达,但在肿瘤组织中表达量显著提高,提示与肿瘤的发生密切相关COX-2 参与肿瘤发生的机制不明,可能与促进肿瘤血管生成和抑制机体免疫反应等有关本研究发现,COX-2 在 BTCC组织中强阳性表达,并且与肿瘤的分级、分期相关提示 COX-2 的过表达不仅促进 BTCC的发生,并且可能加强了肿瘤的侵袭和转移能力,本研究结果与 Lim等[6]的发现相符Peng 等[7]和 Cornetta 等[8]在对喉鳞癌和甲状腺癌的研究中也发现 COX-2 mRNA 和 COX-2蛋白呈高表达Gallo 等[9]的研究表明,在头颈部肿瘤中 COX-2 的表达与肿瘤血管的生成有关,同时通过Cox多元回归分析发现,COX-2 蛋白的过表达是最有意义的预后因子。

      4BTCC的转移复发是一个多步骤、多因素相互作用的复杂过程,单一的分子指标是无法进行精确预测的,各种指标中均无足够的特异性,采用多个指标进行联合检测是今后的研究方向在我们研究的 2种基因中,其在染色体上的定位各不相同,Survivin 为凋亡抑制蛋白,COX-2 属原癌基因,2 个基因在 BTCC中表达增强,也说明膀胱肿瘤的发生是一个多基因突变的结果总之,COX-2 和Survivin各自高表达或两者共同高表达均是 BTCC预后不良的指征,有望成为BTCC预后不良的判断指标参考文献】[1]Fromowitz FB,Voila MV,Chao S,et al.Ras p21 expression in t he procression of breast cancer[J].Hum Pathol,1987,18(8):1268-1671.[2]Adida C,Cortty PL,Mcgrat HJ,et a1.Developenmentally regulated expression of the novel cancer anti-apoptosis gene survivin in human and mouse differentiation[J]. Am J Pathol,1998,152(8):43-46.[3]Shin S,Sung BJ,Cho YS,et al.Ananti-apoptotic protein human survivin is a direct inhibitor of caspase23 and 27[J]. Biochemistry,2001,40(1。

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