醋酸纤维素薄膜电泳操作要点及常见差错和失败原因分析.doc

醋酸纤维素薄膜电泳操作要点及常见差错和失败原因分析 醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯由该物质制成的薄 膜称为醋酸纤维素薄膜种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能完全消除纸 电泳中出现的“拖尾”现象，又因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也 少，电泳时电流的大部分由样品传导，所以分离速度快，电泳时间短，样品用 量少，5μg 的蛋白质可得到满意的分离效果因此特别适合于病理情况下微量 异常蛋白的检测 醋酸纤维素薄膜与滤纸相比较，有以下优点： （1）分离效果好对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”现象，染色后背景能完 全脱色，各种蛋白质染色带分离清晰，因而提高了定量测定的精确性 （2）快速省时由于亲水性较滤纸小，电渗作用小，电泳时大部分电流是由样 品传导的，所以分离速度快，电泳时间短，一般电泳 45~60 分钟即可，加上染 色、脱色，整个电泳完成仅需 90 分钟左右 （3）灵敏度高，样品用量少，血清蛋白电泳仅需 2ul 血清，故常用于检测在病 理情况下微量异常蛋白质的改变 （4）应用面广某些蛋白质在纸上电泳不易分离，如胎儿甲种球蛋白、溶菌酶、 胰岛素、组蛋白等用醋酸纤维素薄膜电泳能较好地分离。

（5）易保存，易定量醋酸纤维素薄膜电泳染色后，经冰乙酸、乙醇混合液或 其他溶液浸泡后可制成透明的干板，有利于扫描定量及长期保存醋酸纤维素膜经过冰醋酸乙醇溶液或其它透明液处理后可使膜透明化有利 于对电泳图谱的光吸收扫描测定和膜的长期保存⒈材料与试剂醋酸纤维素膜一般使用市售商品，常用的电泳缓冲液为 pH8.6 的巴比妥缓冲液，浓度在 0.05-0.09mol/L⒉操作要点⑴膜的预处理：必须于电泳前将膜片浸泡于缓冲液，浸透后，取出膜片并 用滤纸吸去多余的缓冲液，不可吸得过干并在一角做上记号⑵加样：样品用量依样品浓度、本身性质、染色方法及检测方法等因素决 定对血清蛋白质的常规电泳分析，每 cm 加样线不超过 1μl，相当于 60- 80μg 的蛋白质⑶电泳：可在室温下进行电压为 25V/cm，电流为 0.4-0.6mA/cm 宽⑷染色：一般蛋白质染色常使用氨基黑和丽春红，糖蛋白用甲苯胺蓝或过 碘酸-Schiff 试剂，脂蛋白则用苏丹黑或品红亚硫酸染色⑸脱色与透明：对水溶性染料最普遍应用的脱色剂是 5％醋酸水溶液为了 长期保存或进行光吸收扫描测定，可浸入冰醋酸：无水乙醇＝30：70（V/V）的 透明液中。

醋酸纤维素薄膜电泳是生物化学实验中的一门重要技术 ,这项实验在生物化学以 及有机化学科目的学生实验中长期使用 ,也是各层次的医学生物化学课程中必开 的实验项目 笔者长期从事学生实验工作 ,有过许多次的失败经历 ,仔细地观察并分析发生的 原因之后 ,发现有许多原因 ,是由我们操作过程中发生了某些失误所造成的只 要解决了这些问题 ,就能使实验大部分获得成功醋酸纤维素薄膜电泳常见差错和失败原因分析 下载（PDF 版）（1）纳米盘下载地址：醋酸纤维素薄膜电泳常见差错和失败原因分析-源自yyx520.pdf（2）rayfile 盘下载地址：醋酸纤维素薄膜电泳常见差错和失败原因分析醋酸纤维素薄膜电泳常见差错和失败原因分析- -源自源自 yyx520.pdf醋酸纤维素薄膜电泳常见差错和失败原因分析 全文如下：。